当归补血汤对宫颈癌荷瘤小鼠抑瘤效果及对免疫调节作用的研究

目的:探讨当归补血汤对宫颈癌荷瘤小鼠抑瘤效果及免疫调节作用。方法:以宫颈癌荷瘤小鼠为实验模型(小鼠宫颈癌U14细胞接种于Balb/c小鼠双侧大腿内侧皮下),共40只,将其分成两组,每组20只,A组喂药当归补血汤,B组给与等量的蒸馏水灌胃,持续16周,测量治疗前后肿瘤大小,计算肿瘤生长率。在免疫抑制模型基础建立宫颈癌荷瘤小鼠40只,分成两组,每组20只,C组喂药当归补血汤,D组予以等量蒸馏水灌胃,2周后断颈,取胸腺、脾脏称量,计算胸腺指数和脾脏指数。结果:灌胃16周后,A组存活10只,B组存活3只,A组与B组相比,体重较B组明显增加,生存时间明显延长,根据生存状态评分两组综合评分具有统计学差异(P<0.05)。A组用药4周、8周、12周后肿瘤体积均明显小于B组(P<0.01),A组用药4周、8周后肿瘤生长率明显低于B组(P<0.01),用药12周后肿瘤生长率比较差异无统计学意义(P>0.05)。C组的胸腺指数和脾脏指数显著高于D组,差异比较有统计学意义(P<0.01)。结论:当归补血汤对宫颈癌荷瘤小鼠抑瘤效果明显,对免疫状态有调节作用。

腺病毒载体介导的胞嘧啶脱氨酶和胸苷激酶融合基因体外抑瘤效果的观察

目的构建重组腺病毒载体,观察自杀基因对不同大肠癌细胞系的细胞毒作用。方法利用重组腺病毒载体介导的胞嘧啶脱氨酶(CD)、单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)融合基因感染人结肠腺癌细胞系LoVo、HCT-8和直肠腺癌细胞系HR-8348,通过细胞集落形成实验、细胞存活率测定(MTT法),检测和分析HSV-tk/丙氧鸟苷((GCV)、CD/5-氟胞嘧啶(5-FC)双自杀基因系统对肿瘤细胞的杀伤作用和旁观者效应的大小。结果 Western Blot检测分析融合基因的表达,显示重组腺病毒介导的双自杀基因可以在3种肿瘤细胞中表达。不加5-FC和GCV时,各转染组和对照组肿瘤细胞集落形成分别为:94、93、95;96、92、94,比较差异无显著性(P>0.05)。在5-FC(80.0mg/L)和GCV(0.8 mg/L)浓度下3种肿瘤细胞存活率降至2.1％、4.3％和3.2％,与不用前药相比差异有显著性(P<0.01)。感染细胞在混合细胞中比例仅仅占5％时,就能获得明显的旁观者效应,细胞杀伤率分别升至22.2％、34.8％和40.4％。结论CD、TK融合基因联合联合双前药治疗能取得显著的抗肿瘤作用。

5-氟尿嘧啶缓释剂对荷U14宫颈癌小鼠抑瘤效果的研究

目的:探讨5-氟尿嘧啶(5-FU)缓释剂对荷U14宫颈癌小鼠的抑瘤效果以及相关细胞凋亡机制。方法:清洁级小鼠ICR接种U14,随机分为对照组、化疗组、缓释组和联合组,观察小鼠生存周期;收集第7天、第13天腹水瘤,观察细胞凋亡、细胞周期以及Bcl-2/Bax蛋白和基因RNA水平表达的变化。结果:与对照组比较,化疗组、缓释组和联合组的平均生存期明显延长;第7天与第13天,化疗组、缓释组和联合组中晚期凋亡和总凋亡均显著高于对照组,其中联合组中晚期凋亡和总凋亡也显著高于缓释组;化疗组、缓释组、联合组的G1期细胞较对照组明显增加,增殖指数明显降低。第7天、第13天,化疗组、缓释组和联合组Bcl-2蛋白或RNA表达均低于对照组,Bax表达均高于对照组;其中联合组Bcl-2低于缓释组,Bax高于缓释组。结论:5-FU延长荷瘤小鼠的生存期,对宫颈癌腹水瘤有较好的抑瘤作用,作用机制很可能通过介导下调Bcl-2、上调Bax的表达。

白蛋白紫杉醇聚合物胶束抑瘤效果研究

目的研制紫杉醇聚合物胶束(PTX PM)和白蛋白紫杉醇聚合物胶束(HSA-PTX PM)制剂,比较该两组制剂与市售紫杉醇注射液(PTX injection)的抑瘤效果。方法用激光动态光散射粒度仪检测这两组制剂的粒度分布,透射电镜观察粒子形态。采用传统抑瘤率实验方法和活体动物成像技术方法同时评价抑瘤效果。建立荷B16黑色素瘤C57小鼠模型,考察制剂组对小鼠生存期的影响。结果 2种制剂的粒径有效光强粒径均在100 nm左右。透射电镜显示粒子呈圆整的球形。活体成像图片显示PTX PM和HSA-PTX PM制剂的抑瘤效果优于PTX injection,其中HSA-PTX PM的抑瘤效果更佳。HSA-PTX PM的抑瘤率为72.92%,优于PTX PM(66.49%),明显优于PTX injection(47.68%)(P<0.05)。用传统实验方法计算得到的结果基本一致。生存期实验显示,与市售相比HSA-PTX PM更能延长荷瘤小鼠的平均生存期。结论 PTX PM和HSA-PTX PM的抑瘤效果要优于市售紫杉醇注射液,并且HSA-PTX PM更优。聚合物胶束和白蛋白两种载体联用在抗肿瘤药物制剂技术领域有很好的发展前景。

丙型肝炎病毒内源性靶向基因疫苗对荷瘤小鼠抑瘤效果的初步研究

目的研究基于恒定链的丙型肝炎病毒(HCV)NS3内源性靶向巨噬细胞表面分子Ia的分子基因疫苗对HCV NS3荷瘤小鼠的抑瘤效果,探索HCV感染基因治疗的可行途径。方法BALB/c小鼠皮下接种稳定表达HCV NS3的小鼠骨髓瘤SP2/0-NS3细胞,3 d后于股四头肌注射疫苗进行免疫治疗,2周后进行一次加强免疫。BALB/c小鼠共64只,随机分为等渗盐水对照组、空质粒pCI-neo对照组、pHCV- NS3非靶向治疗组和pHCV-NS3-Thl靶向治疗组,观察成瘤时间、肿瘤大小和小鼠的60 d存活率。结果等渗盐水、pCI-neo、pHCV-NS3、pHCV-NS3-Th1组小鼠平均成瘤时间分别为(16.17±2.55)d、(14.40 ±1.82)d、(16.75±2.36)d、(24.00±5.57)d;成瘤率分别为100.0%(13/13)、100.0%(14/14)、57.1%(8/14)和46.7%(7/15);60 d存活率分别为0、0、50.0%(7/14)和53.3%(8/15)。对四个时间点成瘤小鼠肿瘤大小比较的结果显示,pHCV-NS3-Th1组成瘤小鼠的肿瘤直径最小,与其他组相比,差异均有统计学意义(P<0.01)。结果显示,成瘤小鼠的平均存活时间比等渗盐水组延长6 d,比pCI-neo组延长12 d(P<0.05),比pHCV-NS3组延长6 d。结论pHCV-NS3-Th1具有延迟HCV-NS3荷瘤小鼠肿瘤形成、限制肿瘤生长、降低成瘤率、病死率以及提高存活率的作用。基于恒定链的内源性靶向性基因疫苗有望作为HCV感染防治的候选治疗性疫苗。

不同旋毛虫粗抗原对BALB/c小鼠体内SP2/0肿瘤抑制作用观察

目的研究不同旋毛虫抗原对BALB/c小鼠体内的SP2/0骨髓瘤的抑制作用。方法对BALB/c小鼠经腹腔和肌肉注射不同抗原,3d后对小鼠荷瘤,30d后观察小鼠体内肿瘤的大小,检测小鼠机体的免疫状态,评价不同旋毛虫抗原对小鼠体内的肿瘤的抑制作用。结果腹腔注射肌幼虫可溶性粗抗原、成虫可溶性粗抗原和新生幼虫可溶性粗抗原组的抑瘤效果略好于肌肉注射组。肌幼虫ES抗原组的抑瘤效果最好,成虫ES抗原组次之,但比3种虫体抗原组的抑瘤效果好,3种虫体粗抗原组的抑瘤效果间没有明显差别。结论不同的旋毛虫抗原都有一定的抑制肿瘤的作用,腹腔注射肌幼虫ES抗原能够很好的抑制小鼠体内肿瘤的生长。

猫棒束孢多糖对小鼠S180肉瘤和H22肝癌的抑制作用

猫棒束孢（Isaria felina）是从天然冬虫夏草虫草体中经菌种分离后培养得到的一株真菌,经中国科学院微生物研究所郭英兰教授鉴定为Isaria felina（DC.：Fr.）Fr.,是一种新的冬虫夏草菌种,已被中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏（保藏号：CGMCC NO.0706）。

选择性环氧合酶-2抑制剂对胶质瘤细胞增殖的抑制作用

近年来,很多研究显示环氧合酶-2(COX-2)与胶质瘤密切相关.Celecoxib属非甾体类抗炎药(NSAIDs),是COX-2选择抑制剂,对于胶质瘤作用方面的研究未见报道.为观察Celecoxib对胶质瘤的抑瘤效果,本实验应用MTT法、细胞生长曲线和流式细胞仪等方法,检测Celecoxib对C6胶质瘤增殖的影响.

榄香烯乳的抑瘤作用及其不良反应的防治

对榄香烯乳的作用机理、临床应用作了较全面的综述,并对其不良反应的防治作了简要介绍,认为榄香烯乳对多种肿瘤具有抑瘤效果,并在肿瘤的介入治疗方面有良好的应用前景。

纳秒脉冲处理A375细胞裸鼠皮下移植瘤的疗效评估

ns脉冲电场可以诱发肿瘤细胞的结构和功能发生一系列变化,使其在临床肿瘤治疗中展现出巨大的应用前景。目前,受限于检测评估手段,相关动物实验研究尚不充分。将ns脉冲(电场强度20kV/cm、脉宽200ns、重复频率5Hz、2 000个脉冲)作用于A375裸鼠皮下移植瘤,采用荧光活体成像方法定量研究ns脉冲的抑瘤效果,同时用相机随访观察局部疤痕的转归情况。与对照组荧光增加相比,处理组荧光强度逐渐减弱(检验水准P<0.05),且在第2次处理后14d荧光完全消失;随着时间的推移,治疗区域局部疤痕逐渐变浅,并在第2次处理后22d完全消失。实验结果表明,ns脉冲可以实现局部肿瘤组织的完全切除,且能实现皮肤疤痕的有效转归。

秦皮乙素对BALB/c裸鼠体内胶质瘤生长的影响

【目的】探讨秦皮乙素(Esc)的体内抗胶质瘤活性,为秦皮乙素进一步研究开发为抗胶质瘤药物提供实验依据。【方法】采用C6细胞前肢腋下皮下注射BALB/c裸鼠种瘤构建荷瘤鼠模型;分为4组:模型组、50 mg/kg秦皮乙素组、100mg/kg秦皮乙素组和阳性对照组;采用瘤体积、相对肿瘤增殖率、瘤质量、肿瘤生长抑制率和体质量5个指标评价秦皮乙素的体内抑瘤效果;采用HE染色鉴定瘤体。【结果】与模型组相比,秦皮乙素可显著抑制雄性荷瘤鼠的瘤体积约10倍,瘤质量约8倍,对其体质量无显著影响,与阳性对照药尼莫司汀(ACNU)相似;对雌性荷瘤鼠瘤体的生长无显著抑制作用。【结论】秦皮乙素在雄性荷瘤鼠体内具有显著抗胶质瘤活性,为秦皮乙素进一步开发为抗胶质瘤药物提供了实验依据。

旋毛虫抗小鼠体内SP2/0肿瘤作用的研究

目的观察旋毛虫感染对BAlB/c小鼠体内SP2/0瘤细胞生长的抑制作用。方法用不同剂量、不同方法致弱的旋毛虫感染BALB/c小鼠,在不同时间接种SP2/0细胞,于荷瘤后20 d解剖小鼠,测定小鼠体内肿瘤的体积、重量和无瘤生长小鼠比率,检测T淋巴细胞亚群。结果1)未致弱组、紫外线致弱组和60Co致弱组小鼠肿瘤体积和重量均显著低于对照组(P<0.01),CD4+/CD8+显著高于对照组(P<0.05);无瘤生长小鼠比率显著高于对照组;2)接种750条、500条和250条旋毛虫组肿瘤体积和重量均显著低于对照组(P<0.01),CD4+/CD8+显著高于对照组(P<0.05),无瘤生长小鼠比率显著高于对照组;3)接种3 d1、1 d和21 d后荷瘤组的肿瘤体积和重量均显著低于对照组(P<0.01),CD4+/CD8+显著高于对照组(P<0.05),无瘤生长小鼠比率显著高于对照组。结论未致弱的旋毛虫和经不同方法致弱的旋毛虫对BALB/c小鼠体内的SP2/0骨髓瘤细胞的生长均有抑制作用,接种剂量增加,抑瘤效果越明显,但对实验动物的机体损伤也加重。接种11 d后荷瘤组的抑瘤效果好于接种3 d后荷瘤组和21d后荷瘤组。

马钱子碱mPEG-PLGA纳米粒的构建与体外抗肿瘤细胞活性研究

目的本研究作者利用甲氧基聚(乙二醇)(mPEG)-聚(乳酸-羟基乙酸共聚物)(PLGA)制备载有马钱子碱的两亲性嵌段共聚物纳米粒,并评价其对肝肿瘤HepG2细胞的体外抗肿瘤效果。方法采用溶剂蒸发-薄膜分散法制备负载马钱子碱mPEG-PLGA纳米粒,通过透射电镜观察其微观形态,马尔文激光粒度仪测定其粒径分布及ζ电位,并采用反向透析法考察了马钱子碱mPEG-PLGA纳米粒在pH7.4释放介质中的体外释药特性;评价了肝肿瘤HepG2细胞对马钱子碱mPEG-PLGA纳米粒的摄取能力,比较了马钱子碱mPEG-PLGA纳米粒与马钱子碱对肝肿瘤HepG2细胞的体外抗肿瘤效果。结果制备的负载马钱子碱mPEG-PLGA纳米粒呈圆整球状分布,包封率为(95.4±1.6)%,平均粒径为(118.4±15.7)nm,ζ电位为(-24.4±0.5)mV;马钱子碱mPEG-PLGA纳米粒在前期药物释放较快,后期较为平缓;肝肿瘤HepG2细胞对马钱子碱mPEG-PLGA纳米粒具有较强的摄取能力,且马钱子碱mPEG-PLGA纳米粒对肝肿瘤HepG2细胞的抑制作用显著高于马钱子碱。结论本研究制备的马钱子碱mPEG-PLGA纳米粒对肝肿瘤HepG2细胞抑制更显著,具有潜在的临床应用价值,值得进一步研究。

四元复合体介导C-MYC反义RNA抑制肝癌细胞生长增殖

目的探讨四元复合体介导的C-MYC反义RNA转移系统对肝癌细胞系HepG2.2.15致瘤性的体内外抑制作用。方法C-MYC反义RNA四元复合体体外瞬时转染HepG2.2.15细胞,流式细胞术检测C-MYC蛋白的表达水平、细胞凋亡率及细胞周期的变化,MTT法测定细胞增殖代谢活性。以HepG2.2.15细胞制备荷瘤裸鼠模型,局部瘤内注射C-MYC反义RNA四元复合体或联合注射IFN-α,称量瘤重,免疫组化方法检测肿瘤组织C-MYC蛋白的表达。结果C-MYC反义RNA可显著降低细胞C-MYC蛋白的表达水平,使细胞生长停滞于G0/G1期。体内抑瘤实验显示,反义治疗组瘤体C-MYC蛋白表达降低,瘤重(1.72±0.16)g,显著低于生理盐水对照组(P<0.05)。联合IFN-α注射组抑瘤效果更佳。结论肿瘤组织靶向性C-MYC反义RNA转移系统在体内外均可有效降低C-MYC蛋白的表达,抑制细胞的生长增殖。体内联合IFN-α可取得更佳的抑瘤效果。

抗肿瘤多肽M1-21的剂型优化

通过去溶剂化方法,将单体抗肿瘤多肽M1-21纳米化,形成50 nm左右大小的多肽纳米颗粒(Nano-M1-21).运用动态光色散技术(DLS)和低压透射电镜(TEM)对Nano-M1-21进行表征,并进行体外37℃条件下颗粒稳定性测试.运用乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7和4T1细胞验证Nano-M1-21的抗肿瘤效果,结果表明Nano-M1-21更容易被细胞摄取;相比单体多肽,达到抑制肿瘤细胞的浓度更低.运用小鼠乳腺癌4T1细胞活体肿瘤移植模型,发现Nano-M1-21展示出良好的抑瘤效果.总之,单体肽M1-21经纳米剂型优化后,有利于改善细胞的摄取,显示出更好的抑瘤效果.

尼美舒利联合奥沙利铂在食管癌大鼠中的作用及对β-catenin表达水平的影响

目的 探讨尼美舒利联合奥沙利铂在食管癌大鼠中的作用及对β-连环蛋白(catenin)表达水平的影响。方法 清洁级SD大鼠50只作为对象,随机取大鼠10只设为空白对照组;剩余40只大鼠采用人工食管癌动物模型,建模成功后随机取大鼠10只,设为模型对照组;剩余大鼠分为尼美舒利组、奥沙利铂组和联合组,各10只。空白对照组与模型对照组常规注射等量生理盐水,尼美舒利组灌胃2.5 mg/kg尼美舒利;奥沙利铂组腹腔注射10 mg/(kg·次)奥沙利铂,联合组同时给予尼美舒利与奥沙利铂,给药方式同上,42 d干预对大鼠效果进行评估,比较各组抑瘤率、肿瘤标志物、T淋巴细胞及β-catenin表达水平。结果 联合组瘤体体积、瘤质量均显著低于尼美利舒组、奥沙利铂组和模型对照组(P<0.05);抑制率显著高于尼美利舒组、奥沙利铂组和模型对照组(P<0.05);联合组CEA、CYFRA21-1、SCCAg水平均低于尼美利舒组、奥沙利铂组和模型对照组(P<0.05),显著高于空白对照组(P<0.05);联合组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平均显著高于尼美利舒组和奥沙利铂组(P<0.05);CD8+水平显著低于尼美利舒组和奥沙利铂组(P<0.05);联合组结肠腺瘤样息肉病(APC)、β-catenin、糖原合酶激酶(GSK)3β及轴蛋白(Axin)mRNA水平均显著低于尼美利舒组和奥沙利铂组(P<0.05);奥沙利铂组APC、β-catenin、GSK3β及Axin mRNA水平均显著低于尼美利舒组(P<0.05)。结论 尼美舒利联合奥沙利铂用于食管癌大鼠中能提高抑瘤效果,降低肿瘤标志物水平,减轻奥沙利铂对于T淋巴细胞的抑制作用,可能与抑制β-catenin表达水平有关,有助于增强药物抗肿瘤作用。

旋毛虫抗小鼠体内A549肺癌细胞作用的研究

目的观察旋毛虫对BALB/c小鼠体内A549瘤细胞生长的抑制作用。方法将实验小鼠(BALB/c)随机分为7组,每组10只,1～6组分别接种未处理或不同方法处理的旋毛虫,在不同时间段接种A549细胞。7组为不接种旋毛虫对照组。荷瘤后第30d解剖小鼠,测定小鼠体内肿瘤的体积、重量和无瘤生长小鼠比率,检测T淋巴细胞亚群变化。结果未处理旋毛虫接种组,紫外线处理及60Co处理旋毛虫接种组小鼠肿瘤体积和重量均显著低于未接种对照组(P<0.01),脾脏CD3+、CD4+、CD8+百分率、CD4+/CD8+比值及无瘤生长小鼠比率显著高于未接种对照组(P<0.05或P<0.01);接种前7d和接种后11d荷瘤组小鼠的肿瘤体积、重量均显著低于未接种对照组(P<0.01),脾脏CD3+、CD4+、CD8+百分率及CD4+/CD8+比值显著高于未接种对照组(P<0.05)。结论未处理旋毛虫和经不同方法处理的旋毛虫对BALB/c小鼠体内的A549肺癌细胞的生长均有抑制作用,接种11d后荷瘤组的抑瘤效果更显著。

蒿甲醚固体脂质纳米粒的制备与小鼠体内药动学/药效学评价

目的制备用于静脉注射的蒿甲醚固体脂质纳米粒(ARM-SLNs),并评价小鼠体内药动学以及抑瘤效果。方法采用热熔乳化超声-低温固化法制备ARM-SLNs,并考察其理化性质;测定了ARM-SLNs在小鼠体内的药动学行为,评价ARM-SLNs对小鼠接种HepG2肿瘤细胞的抑制效果。结果本研究制备的ARM-SLNs呈球形分布,平均粒径大小为(77.6±1.3)nm,Zeta电位为(-20.1±0.4)mV,包封率为(93.5±1.2)%,载药量为(9.2±0.3)%,冻干对ARM-SLNs的粒径大小、包封率和载药量均未产生显著影响;ARM-SLNs在体外显示出缓慢释药特性,符合一级动力学方程;小鼠药动学研究表明ARM-SLNs的t1/2及AUC0-t分别是ARM注射液的9.67倍和3.88倍;小鼠药效学研究表明ARM-SLNs的对HepG2肿瘤生长的抑制率显著高于ARM注射液(P<0.05)。结论本研究制备的ARM-SLNs对HepG2肿瘤细胞起到了良好的抑制效果,有望成为ARM的新型给药系统应用于临床研究中。

人参皂苷Rg3-mPEG-PLLA载药胶束的构建与药效学评价

目的:使用甲氧基聚乙二醇-聚乳酸(mPEG-PLLA)共聚物作为载体材料制备人参皂苷Rg3载药胶束并评价其抑瘤效果。方法:采用溶剂蒸发-薄膜分散法制备人参皂苷Rg3-mPEG-PLLA载药胶束,以聚合物/药物用量比(X1)、成膜温度(X2)和水化温度(X3)作为自变量,以药物包封率(Y)作为评价指标,通过Box-Behnken试验设计优化人参皂苷Rg3-mPEG-PLLA载药胶束处方及制备工艺;分别考察了人参皂苷Rg3-mPEG-PLLA载药胶束的微观形态、粒径分布、Zeta电位等理化性质以及在不同pH条件下体外释药特性;比较了人参皂苷Rg3-mPEG-PLLA载药胶束与人参皂苷Rg3对小鼠接种人肝癌HepG2细胞的抑制效果。结果:经优化得到制备人参皂苷Rg3-mPEG-PLLA载药胶束最优处方工艺为:聚合物/药物用量比为9∶1,成膜温度为60℃,水化温度为40℃;3批人参皂苷Rg3-mPEG-PLLA载药胶束的包封率为(91.2±0.8)%,透射电镜照片显示胶束呈圆整球状分布,平均粒径为(142.1±8.9)nm,Zeta电位为(-8.5±0.4)mV,PDI为(0.145±0.017);在不同pH值介质中释药均较为缓慢;人参皂苷Rg3-mPEG-PLLA载药胶束能够显著抑制人肝癌HepG2细胞在裸鼠体内生长。结论:该研究将人参皂苷Rg3制备成mPEG-PLLA载药胶束,可以显著抑制肿瘤细胞生长,有望应用于肝癌治疗。