卵巢癌患者HPV16/18感染与抑癌基因Rap1GAP表达的关系

目的探讨卵巢癌患者人乳头瘤病毒16/18(HPV16/18)感染与抑癌基因Rap1GAP表达的相关性。方法回顾性选取2014年3月-2019年10月河南大学淮河医院妇科收治的200例卵巢癌患者作为研究对象,依据患者是否发生HPV16/18感染将其划分为感染组(n=106)和非感染组(n=94),检测和比较两组患者卵巢组织的Rap1GAP基因表达情况,分析卵巢癌患者HPV16/18感染和Rap1GAP基因表达之间的相关性。结果HPV16/18感染组Rap1GAP mRNA相对含量和表达率均低于非感染组(P<0.05),且Rap1GAP mRNA在卵巢癌中的表达与HPV16/18感染呈负相关性(r=-0.613,P=0.142)。200例卵巢癌患者中,HPV16/18感染与患者是否合并有糖尿病、肿瘤分化程度、性伴侣数、有无异体输血和Rap1GAP mRNA表达率有关(P<0.05);多因素分析结果显示,肿瘤低分化、性伴侣数≥2个和Rap1GAP mRNA表达(-)是卵巢癌患者HPV16/18感染的影响因素(P<0.05)。结论抑癌基因Rap1GAP在卵巢癌HPV16/18感染患者中的表达率和相对含量均较低,其与卵巢癌HPV16/18感染呈负相关性,Rap1GAP可能共同参与了卵巢癌的发生、发展过程。

LKB1基因突变型非小细胞肺癌的临床特点及治疗药物应用研究进展

非小细胞肺癌(NSCLC)占肺癌类型的大部分,目前晚期NSCLC多采用免疫治疗及化学治疗,但LKB1基因突变型NSCLC对免疫治疗耐药。LKB1基因是一种重要的抑癌基因,在维持细胞能量平衡方面起重要作用,其编码的肝激酶B1(LKB1)可调节细胞代谢、细胞增殖、细胞极性和细胞迁移等过程。LKB1基因突变型NSCLC具有易发生转移和侵袭性强、对免疫治疗耐药、预后欠佳等临床特点。由于LKB1基因突变型NSCLC不能从免疫治疗中获益,故研究者们从LKB1信号通路上寻找治疗靶点和改善耐药等方面寻找突破口,AMPK激动剂、mTOR抑制剂、PARP抑制剂、CDK4/6抑制剂等药物成为研究热点,但目前多处于临床前阶段,各种方案对于LKB1基因突变型NSCLC的疗效仍需要进一步论证。

宫颈癌中HPV感染与Rap1GAP基因及蛋白水平改变关系的研究

目的研究宫颈癌中HPV感染与Rap1GAP基因及蛋白水平改变的关系。方法以我院收治的70例宫颈癌患者为观察组,另选正常宫颈组织70例为对照组。分别对两组对象的宫颈组织进行DNA提取、总RNA提取、cDNA合成、PCR反应扩增。并检测HPV感染、Rap1GAP基因外显子E11和E19缺失率、Rap1GAP mRNA表达及Rap1GAP蛋白表达情况。结果观察组患者HPV感染明显高于对照组(P<0.05)。观察组HPV阳性和阴性组E11和E19的缺失率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Rap1GAP mRNA、Rap1GAP蛋白在观察组HPV阳性组组织中的表达率、阳性表达率明显低于HPV阴性组(P<0.05)。宫颈癌中HPV感染与Rap1GAP mRNA的表达呈正相关(r=0.578),与Rap1GAP蛋白的阳性表达呈正相关(r=0.554)。结论宫颈癌中HPV感染与Rap1GAP mRNA的表达呈正相关,与Rap1GAP蛋白的阳性表达呈正相关。

抑癌基因PTEN和FHIT在口腔鳞癌中的表达及其与cyclin D1的相关性

目的检测抑癌基因PTEN、FHIT在正常口腔粘膜上皮和口腔鳞癌(OSCC)中的表达情况,并探讨其与cyclinD1的关系。方法采用免疫组化SP法检测62例OSCC中FHIT、PTEN、cyclinD1蛋白表达的情况,以12例正常口腔粘膜作对照。结果在正常口腔粘膜中PTEN均为强阳性表达(12/12),在OSCC中24.2%(15/62)表现为PTEN蛋白表达的缺乏或减少;而FHIT在正常口腔粘膜中也均为强阳性表达(12/12),在OSCC中17.7%(11/62)表现为FHIT蛋白表达缺乏或减少;cyclinD1在正常口腔粘膜中91.7%(11/12)表现为阴性或弱阳性表达,在OSCC中53.2%(33/62)表现为阳性或强阳性表达;PTEN与FHIT均为阳性或强阳性表达时,37.8%(28/74)cyclinD1表现为阴性或弱阳性,其中11例为正常口腔粘膜(占正常组的91.7%)。结论PTEN、FHIT在OSCC的发生过程中起着一定的作用;PTEN/FHIT的表达与cyclinD1有关,提示PTEN、FHIT能够下调cyclinD1的表达。

胃癌中抑癌基因GKN1和p16的表达及意义

目的观察胃动蛋白1(gastrokine-1,GKN1)和p16蛋白在胃癌和正常胃组织中的表达,探讨二者表达与胃癌临床病理特征的关系,为获取胃癌诊断和预后相关的蛋白分子提供实验依据。方法应用免疫组化EliVision Plus法检测78例胃癌和30例正常胃黏膜中GKN1和p16蛋白的阳性率。结果正常胃黏膜组织和胃癌组织中GKN1的阳性率分别为93.3%与15.4%;正常胃黏膜组织和胃癌组织中p16的阳性率分别为96.7%和32.1%,GKN1和p16在胃癌组织中表达下调;GKN1表达与胃癌临床分期、Lauren分类和HP感染有关(P<0.05),p16蛋白表达与胃癌临床分期、分化程度和淋巴结转移有关(P<0.05)。结论 GKN1和p16均为抑癌基因,二者在胃癌中的表达缺失均与胃癌的发生密切相关。

人肝细胞癌中抑癌基因PTEN/MMAC1/TEP1的突变分析

PTEN/MMAC1/TEP1(PTEN)是新近分离到的抑癌基因,在多种肿瘤中存在突变。我们检测了34例人肝细胞癌中PTEN基因第5外显子和第8外显子的突变。采用聚合酶链方法以内含子引物扩增第5和第8外显子,继之以单链构象多态性和测序技术分析PTEN基因突变。有4例肝细胞癌SSCP显示异常条带并经测序证实存在突变。2例发生于第4内含子,突变位点相同;另两例发生于第8外显子,其中1例碱基颠换导致PTEN蛋白产物304位半胱氨酸突变为甘氨酸。

抑癌基因KAI1对大肠癌细胞生物学特性的影响

目的研究抑癌基因KAI1对大肠癌细胞生物学特性的影响。方法用KAI1 cDNA质粒转染低表达KAI1基因的人大肠癌LoVo细胞。免疫组化和原位杂交检测转染后mRNA和蛋白的表达,利用体外肿瘤同质性粘附、异质性粘附实验和肿瘤侵袭模型等方法,检测KAI1/CD82对大肠癌粘附与侵袭的影响;以空白质粒转染组为对照组。结果体外实验发现转染KAI1质粒的LoVo细胞同质性粘附能力高于对照组,异质性粘附及侵袭能力明显低于对照组。抑癌基因KAI1对肿瘤的增殖能力没有影响。结论KAI1基因表达的减少可以导致大肠癌细胞同质性粘附降低,对基底膜粘附及侵袭转移的能力增加。因此,KAI1基因可以作为大肠癌的一种转移抑制基因。

乳腺癌中抑癌基因PTEN与cyclinD1的表达及意义

目的 研究乳腺良性、恶性病变中抑癌基因PTEN及细胞周期调控因子cyclinD1的蛋白表达及临床病理特征的关系。方法 应用免疫组织化学S P法检测 2 3例癌旁正常乳腺组织、2 8例乳腺增生组织 (其中 2 0普通型增生 ,8例非典型增生 )、8例导管原位癌、98例浸润性乳腺癌组织PTEN和cyclinD1蛋白的表达 ,并进行微血管密度计数。 结果 非典型增生上皮和导管原位癌的PTEN蛋白水平高于正常乳腺腺上皮 (P <0 0 1) ;浸润性癌组织中PTEN高表达率为4 9 0 % ,与正常乳腺组织比较差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,与增生的乳腺组织和导管原位癌组间差异无显著性。浸润性乳腺癌中PTEN的表达与分级、腋淋巴结转移、TNM分期、微血管密度计数均呈负相关 ,与cyclinD1蛋白表达呈负相关 ,PTEN表达低下时乳腺癌中cyclinD1蛋白的高表达率与腋淋巴结受累、组织学分级呈正相关 ,PTEN高表达时cy clinD1蛋白的高表达率与腋淋巴结受累、组织学分级无关。结论 PTEN与细胞周期调控因子cyclinD1表达的改变是乳腺癌发生的早期事件 ,共同参与乳腺癌的发生。PTEN的表达水平低下可作为乳腺癌分化和转移的一个潜在的生物学标志。CyclinD1对乳腺癌分化和腋淋巴结转移的影响可能部分受到PTEN的调控。

Rap1GAP1在人胰腺癌组织中的表达及意义

目的通过检测Rap1GAP1在人胰腺癌中的表达情况及rap1GAP1在三种人胰腺癌细胞系中的突变情况,探讨其在人胰腺癌发生发展过程中的作用。方法 (1)采用免疫组织化学Envision两步法,检测73例人胰腺癌组织及其癌旁胰腺组织中Rap1GAP1的表达情况,并分析其与胰腺癌临床病理特征之间的关系;(2)采用RT-PCR和测序法检测三种人胰腺癌细胞系中rap1GAP1的突变情况。结果(1)Rap1GAP1在癌旁胰腺组织、胰腺上皮内肿瘤(pancreatic intraepithelial neoplasia,PanIN)1a、1b、2及3级和浸润性胰腺癌中的阳性率分别为100%、93.8%、92.3%、70.0%、57.9%和13.7%。癌旁胰腺组织、各级PanIN与浸润性癌之间的表达差异有统计学意义(P<0.01);Rap1GAP1在高、中和低分化胰腺癌中阳性率分别为26.9%、7.1%和0,显示Rap1GAP1的表达与胰腺癌的分化程度有关(P<0.05)。而Rap1GAP1的表达与患者的年龄、性别、淋巴结转移情况和临床分期无关。(2)Panc-1、MiaPaCa-2细胞系中存在rap1GAP1关键区域(催化结构域)的大片段缺失,而Aspc-1细胞系含有完整的编码rap1GAP催化结构域的外显子。结论相比于癌旁胰腺组织和各级PanIN,浸润性胰腺癌中Rap1GAP1的表达显著降低。另外,Rap1GAP1在低分化胰腺癌中的表达显著降低。提示Rap1GAP1可能是胰腺癌发生发展过程中的一个晚期事件。三种人胰腺癌细胞系中的突变分析结果提示其表达降低可能与遗传学上的大片段缺失有关。

抑癌基因 ING1在大肠癌中的表达及预后意义

目的：探讨ING1基因在散发性大肠癌中的表达与预后及多个临床病理变量之间的关系，并分析其在大肠癌预后的危险因素中是否具有显著意义。方法应用定量RT－PCR方法检测82例大肠癌手术切除标本及相应的癌旁组织中ING1 mRNA的表达水平，分析其表达的差异，研究其表达水平与大肠癌患者临床病理特征及预后的关系。结果（1）ING1 mRNA在大肠癌及癌旁组织中均可被检出，同一配对组织相比，癌旁组织中ING1表达量明显高于肿瘤原发灶；（2） ING1 mRNA的表达与大肠癌的浸润层次、淋巴结转移、远处转移以及TNM分期密切相关；（3）肿瘤组织与癌旁组织ING1表达量相比，比值越低其DFS也越低（P＜0．0001）；（4）经单因素及多因素COX模型分析后显示，ING1作为候选抑癌基因可作为大肠癌预后的独立预测因素（ P＜0．0001）。结论 ING1的过度表达是大肠癌发生过程中的分子事件，可能参与大肠癌的发展过程。 ING1可作为判断大肠癌预后的重要分子标志。

抑癌基因ING1在鼻咽癌中的表达及突变分析

本研究运用免疫组化技术、逆转录 - PCR( RT- PCR) ,PCR- SS-CP技术对鼻咽癌组织及鼻咽癌细胞系中 ING1的表达和突变进行检测 .结果发现 3 0例鼻咽癌标本中 ING1蛋白表达下调率为 70 % ( 2 1/ 3 0 ) ;ING1m RNA表达明显下调率为 4 6% ( 12 / 2 6) ,6例鼻咽癌细胞系中有 2例鼻咽癌细胞系表达明显下调 ,而 11例 ( 4 2 .5 % ) NPC组织及其它 4例细胞系表达与正常水平相当 ,另有 3例 ( 11.5 % )鼻咽癌组织过表达 ;单链构像多态性分析 ( SSCP)在鼻咽癌及鼻咽癌细胞系中均未发现突变 .结果表明ING1基因的转录及翻译表达水平与鼻咽癌的发生 /发展呈负相关 。

抑癌基因RASSF1A在肝癌中表达的研究

目的研究抑癌基因RASSF1A在肝癌组织以及肝癌细胞株中的表达情况及其与临床相关因素间的关系。方法收集24例手术切除的肝癌及其癌旁组织以及4株肝癌细胞株(SMMC7721、HepG2、BEL7402和BEL7703(由国家人类基因组南方中心提供)。用RT-PCR和Northern Blot的方法来分析基因RASSF1A在肝癌组织和肝癌细胞株中的表达情况。结果67%的原发性肝癌组织中未检测到RASSF1A的mRNA,而相应的癌旁组织中仅33%的样本未表达RASSF1A;75%(3/4)肝癌细胞株也未表达RASSF1A。结论RASSF1A在肝癌中是一潜在的抑癌基因,RASSF1A基因的失表达在原发性肝癌的发生发展中起重要作用,检测RASSF1A的表达情况可用于对肝癌的早期发现和早期诊断,结合临床相关因素对肝癌预后评估也有帮助。

抑癌基因Mxi1在白血病细胞中表达的研究

目的分析抑癌基因Mxil在白血病发病中的作用。方法利用逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)检测初治急性白血病(AL)患者26例骨髓单个核细胞,经治疗达完全缓解的AL(AL-CR)患者23例、健康对照者30名外周血单个核细胞和2种髓系白血病细胞株(KG1、K562)Mxil基因表达情况。结果所有标本中均可检测到Mxi1基因的表达,Mxi1 mRNA在初治AL患者的表达水平平均为0.531±0.205,在K562和KG1细胞株中的表达水平平均为0.613±0.223和0.628±0.239,均明显低于健康对照组的0.923±0.187,差异有统计学意义(P<0.05);而AL-CR患者的表达水平为0.812±0.243,明显高于初治AL患者(P<0.05),接近健康对照组(P>0.05)。结论白血病患者细胞中Mxi1基因表达水平下降,提示其可能与白血病的发病有关。

抑癌基因beclin1在子宫内膜异位症及非子宫内膜异位症患者中差异表达的意义

目的研究子宫内膜异位症(cndometriosis,Ems)组织中抑癌基因beclin 1的mRNA和蛋白表达情况。方法利用RT-PCR和Western Blot免疫印迹的方法,对EMs的异位内膜组织、在位内膜组织和非EMs在位内膜组织(正常内膜组织)进行mRNA和蛋白表达的半定量分析。利用原位杂交和免疫组化技术对研究各组进行定性及定位分析。结果①beclin 1 mRNA和蛋白在各组中均有表达,异位内膜的表达高于在位内膜和正常内膜,差异有显著性(P<0.005),在位内膜组与正常对照组比较,beclin 1的表达无明显差异(P>0.05);②原位杂交阳性率分别为非EMs组95.1%,EMs异位内膜组100%,EMs在位内膜组91.4%;③免疫组化阳性率分别为非EMs组91.7%,EMs异位内膜组100%,EMs在位内膜组93.4%;④beclin 1的DNA与蛋白表达一致;⑤7例恶变的异位内膜beclin 1免疫组化检测,5例呈阴性,2例呈弱阳性表达。结论抑癌基因beclin 1在子宫内膜组织中均表达,且在异位内膜中呈表达上调,而在恶变的异位内膜中多呈阴性表达,提示beclin 1基因可能与子宫内膜异位症不孕及恶变相关。

大肠癌中抑癌基因p33/ING1 mRNA的表达及意义

目的 了解p33/ING1表达与大肠癌临床病理特征的关系及其可能作用机制。方法 采用逆转录PCR检测 5 2例散发性大肠癌癌组织及正常大肠粘膜中ING1的表达。结果 在大肠癌组织中p33/ING1mRNA表达较正常粘膜明显减弱 ( 30 /5 2 ,5 7.7% ) ,p33/ING1的低表达与肿瘤的Duke’s分期及淋巴结转移显著相关。

抑癌基因DLC-1在结肠癌细胞sw480中表达的研究

目的:初步探讨DLC-1基因在结肠癌细胞sw480中的表达改变及其可能机制;方法:采用RT-PCR和Western blot分析结肠癌细胞CaCo2、sw480的DLC-1表达情况;应用去甲基化药物5—氮杂胞苷处理DLC-1基因阴性表达的细胞株,观察用药前后该细胞DLC-1基因的表达水平、细胞周期、细胞增殖力和侵袭力的影响。结果:CaCo2细胞高表达DLC-1 mRNA,而sw480则呈现表达缺失。经去甲基化药物5—氮杂胞苷处理sw480后,DLC-1 mRNA恢复表达,比较用药前后sw480细胞增殖力下降、细胞周期被阻滞在G2期、细胞侵袭力减弱。结论:DLC-1基因可影响结肠癌细胞sw480的增殖能力和侵袭力,并使结肠癌细胞sw480细胞周期阻滞于G2期,DNA甲基化可能是导致DLC-1在sw480细胞中的失活的一个重要原因。

卵巢癌组织中肺癌抑癌基因1基因启动子甲基化状态及其临床意义

目的探讨肺癌抑癌基因1(TSLC1)在卵巢癌中基因启动子甲基化状态及临床意义。方法应用甲基化特异性PCR检测TSLC1基因启动子在50例卵巢癌组织和10例正常卵巢组织中的甲基化状态并结合临床病理资料进行分析。结果在卵巢癌组织中TSLC1甲基化阳性率(36%,18/50),正常卵巢组织未出现TSLC1甲基化。TSLC1甲基化与肿瘤淋巴结转移与Silverberg分期密切相关(P<0.05)。结论 TSLC1甲基化可能是参与卵巢癌发展的重要分子事件。

结直肠癌中抑癌基因ING1蛋白的表达及其意义

目的 了解大肠癌中ING1表达及其意义。方法 采用免疫组织化学方法检测 5 2例大肠癌组织及正常大肠粘膜中ING1及p5 3蛋白表达。结果 在 5 2例大肠癌组织中ING1蛋白表达较正常粘膜明显减弱 (+ + :9 6% ;+ :3 8 5 % ) ,其表达减弱与Dukes分期及淋巴结转移情况有关 ,ING1蛋白表达与p5 3蛋白表达有关。结论 ING1蛋白表达下调在大肠癌发生、发展过程中起重要作用 ,表达情况与大肠癌的Dukes分期及转移。

肺癌抑癌基因1对人前列腺癌T_3B细胞增殖的抑制效应

背景与目的:肺癌抑癌基因1(tumor suppressor in lung cancer1,TSLC1)是新近发现的一种肿瘤抑制基因,它在包括前列腺癌在内的多种恶性肿瘤中是失活的。本研究通过将TSLC1转染至人前列腺癌T3B细胞来观察T3B细胞增殖的受抑情况。方法:将克隆有TSLC1全长cDNA的真核重组载体pCI-TSLC1稳定转染至前列腺癌T3B细胞中(实验组)。以转染空质粒pCI-neo的T3B细胞为对照组,野生型T3B细胞为空白组。四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖,FACSort流式细胞仪检测细胞周期,AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡情况。结果:实验建立了高表达TSLC1蛋白的稳定细胞株。与对照组和空白组相比,实验组细胞生长速度减慢,增殖受到明显抑制,G0/G1期细胞为(80±3)%,高于对照组(66±4)%和空白组(64.2±0.9)%;S期细胞为(11.1±1.3)%,低于对照组(24.0±2.4)%和空白组(26.2±0.6)%,组间差异有显著性(P<0.01),实验组细胞周期发生了明显的G0/G1期阻滞。实验组细胞早期凋亡率,晚期凋亡率和总凋亡率分别为(11.9±0.4)%,(10.2±0.4)%和(22.1±0.6)%,与对照组和空白组细胞相比均明显升高(P<0.01)。结论:TSLC1基因明显抑制T3B细胞增殖,并诱导细胞发生凋亡。

头颈部鳞癌抑癌基因nm23-H_1的表达、DNA倍体与淋巴结转移的关系

目的 :研究头颈部鳞状细胞癌 (HNSCC)nm2 3 H1基因的表达、DNA含量与淋巴结转移的关系。方法 :选择 3 0例未经治疗的HNSCC患者术后新鲜肿瘤标本 ,应用免疫组化ABC技术和流式细胞术 (FCM )检测瘤细胞nm 2 3 -H1基因表达、异倍体 (aneuploid)和S期细胞比例 (S phasefraction ,SPF) ,探索这 3个参数与淋巴结转移之间的关系。结果 :nm 2 3 H1的阳性率为 60 % ,异倍体检出率为 66.7%。nm 2 3 H1表达、DNA倍体和SPF与淋巴结转移有关 (均为P <0 .0 1)。nm 2 3 H1表达与DNA倍体无关 (P >0 .0 5 ) ,nm 2 3 H1表达与SPF有关 (P <0 .0 5 )。结论 :对nm2 3 H1表达、DNA倍体和SPF的检测可预测HNSCC淋巴结转移趋势和预后 。