新型咪唑并吡啶类ATX抑制剂的设计、合成及抑酶活性评价

为发现新型Autotaxin(ATX)抑制剂,本文基于ATX抑制剂GLPG-1690的结构特征,采用药效团融合、生物电子等排等理性药物设计策略设计目标分子。经环合、Buchwald-Hartwig偶联、Curtius重排、脱Boc和亲核取代等步骤,合成了4个化合物,并通过^(1)H NMR、^(13)C NMR以及HR-MS对其进行了结构表征。在此基础上,采用Fluorescent-based ATX Activity Assay测定了目标化合物的抑酶活性。结果显示:化合物10a~10d对ATX均呈现出微摩尔水平的抑制活性,可作为先导物用于后续结构优化。

SHV型β内酰胺酶抑酶效应的研究

目的 :采用分光光度法研究革兰阴性菌产生的 4种SHV型 β内酰胺酶的抑酶效应。方法 :分别以L B作图法求取米氏常数 (Km)和最大反应速度 (Vmax) ,以Dixon作图法求取抑制常数 (Ki)。结果 :SHV 2 ,4 ,5对头孢噻肟有水解作用 ,Km 分别为5,4 ,8μmol·L- 1,相对最大水解速度分别为 4 .9% ,8.4 % ,7.8%。表明头孢噻肟对SHV 2 ,SHV 4 ,SHV 5有较高的亲和力 (低Km) ,它对SHV 2 ,SHV 4 ,SHV 5有抑制作用 ,Ki 分别为 0 .94 ,1.0 9,1.4 7μmol·L- 1。结论 :β内酰胺酶抑制剂舒巴坦对SHV 1,2 ,4 ,5均有抑制作用 ,Ki 分别为 1.68,0 .2 ,2 .33,0 .15μmol·L- 1。

石菖蒲抑酶活性的实验研究

目的建立体外抑制乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,AchE)活性实验方法,探讨石菖蒲抑酶活性及活性部位。方法提取制备石菖蒲根和叶的乙醚、醋酸乙酯及正丁醇萃提液,以石油醚-醋酸乙酯(85∶15)为展开剂,对石菖蒲根和叶的乙醚萃提液层析分离后进行抑制AChE活性试验,采用分光光度法分别测定石菖蒲根和叶醋酸乙酯及正丁醇萃提液的AChE抑制率。结果石菖蒲根和叶的挥发油在薄层板显示有显著抑酶斑点,石菖蒲根和叶的乙醚萃提液薄层色谱中与α-细辛醚和细辛醚对应的显著抑酶斑点比移值为Rf0和Rf(0.64±0.01)[t=(17±2)℃];石菖蒲根和叶的醋酸乙酯及正丁醇萃提液酶抑制率分别为39.17%,18.45%,24.33%和1.74%;石菖蒲根的水溶液无明显抑酶斑点但测定仍有较弱酶抑制率,石菖蒲叶的水溶液无抑酶斑点且两者均显示蓝色斑点。结论石菖蒲根和叶的挥发油具较强抑制AChE活性,其中α-细辛醚为强抑酶活性成分,石菖蒲根醋酸乙酯和正丁醇萃提液抑酶活性分别较石菖蒲叶强,石菖蒲根水溶液有微弱抑酶活性而叶的水溶液无抑酶活性,但两者的水溶液均有酶促作用的成分。该法作为一种体外抑酶(AchE)活性实验,结果与文献报道的体内抑酶实验一致。

头孢哌酮/他唑巴坦(CFP/TAZ)对β-内酰胺酶稳定性及抑酶增效作用研究

目的:研究头孢哌酮/他唑巴坦(cefoperazone/tazobactam CFP/TAZ 4:1)对β-内酰胺酶稳定性及抑酶增效作用。方法:以生物法测定酶对抗生素的相对水解率,及抑酶保护率,并与同类复方制剂头孢哌酮/舒巴坦（CFP/SBT）和哌拉西林/他唑巴坦（PIP/TAZ）进行比较。结果:头孢哌酮/他唑巴坦（4:1配比）使单头孢哌酮水解率由100％降至16％,抑酶保护率由0％增至84.0％。头孢哌酮/他唑巴坦4:1时相对水解率16％低于同类复方制剂头孢哌酮/舒巴坦1:1和哌拉西林/他唑巴坦8:1,它们分别为19.5％、18.8％,但无统计学意义（P>0.05）。头孢哌酮/他唑巴坦4:1时的抑酶保护率84％高于同类复方制剂头孢哌酮/舒巴坦1:1,后者为80.5％,但无统计学意义（P>0.05）。

克拉维酸与阿莫西林不同配比时的抑酶率

为了降低复方制剂的生产成本，研究了克拉维酸（CA）与阿莫西林（Amox）不同配比之复方制剂的体外抑酶率。发现当CA与Amox的比率由1变化到1／10时，其抑酶率降低较少；而当该比率由1／10变化到1／50时，抑酶率则显著降低。建议开发较低CA含量的制剂。

法罗培南对质粒介导β-内酰胺酶的稳定性及抑酶作用研究

目的研究青霉烯类抗生素法罗培南对14种标准β-内酰胺酶(TEM-1、TEM-2、TEM-3、TEM-5、SHV-1、SHV-2、SHV-4、SHV-5、PSE-1、PSE-2、PSE-3、OXA-1、OXA-2和OXA-3)的稳定性及抑酶作用。方法采用紫外分光光度法,以其它β-内酰胺抗生素(亚胺培南、美罗培南、头孢噻啶、头孢西丁、头孢呋辛、头孢噻肟、头孢哌酮、氨曲南、克拉维酸、舒巴坦、三唑巴坦)为对照。结果所有抗生素对超广谱β-内酰胺酶(TEM-3、TEM-5、SHV-2、SHV-4和SHV-5)的IC50低于1.9μmol/L;但对广谱酶TEM-1、TEM-2和SHV-1的IC50超过100μmol/L。法罗培南对OXA-1、OXA-2和OXA-3的IC50低于1.0μmol/L。法罗培南、亚胺培南、美罗培南和头孢西丁对14种标准β-内酰胺酶均稳定。结论法罗培南对14种β-内酰胺酶的抑制作用强于亚胺培南和美罗培南。

碳青霉烯抗生素对质粒介导β-内酰胺酶的稳定性及抑酶效应研究

用紫外分光光度法 ,以其它 β 内酰胺抗生素为对照 ,研究碳青霉烯类抗生素亚胺培南、美洛培南和帕尼培南对 14种标准 β 内酰胺酶 (TEM 1,TEM 2 ,TEM 3 ,TEM 5 ,SHV 1,SHV 2 ,SHV 4,SHV 5 ,PSE 1,PSE 2 ,PSE 3 ,OXA 1,OXA 2 ,OXA 3 )的稳定性及抑酶作用。亚胺培南、美洛培南、帕尼培南和头孢西丁对 14种标准 β 内酰胺酶均高度稳定。所有抗生素对超广谱 β 内酰胺酶 (TEM 3、TEM 5、SHV 2、SHV 4、SHV 5 )的IC50 低于 3 μmol/L ;但对广谱酶 (TEM 1,TEM 2 ,SHV 1,OXA)的IC50 超过 10 0 μmol/L。整体上美洛培南对 14种 β 内酰胺酶的抑制作用强于亚胺培南和帕尼培南。

肺炎克雷伯氏菌AmpC β-内酰胺酶动力学及抑酶效应的研究

对肺炎克雷伯氏菌 99- 799株产生的 Amp C型β-内酰胺酶利用分光光度法进行了酶动力学及酶抑制剂抑酶效应的研究。分别以 L - B作图法求取米氏常数 (Km)和最大反应速度 (Vmax) ,以 Dixon作图法求取抑制常数 Ki,以半对数作图法求取酶活性被抑制 5 0 %时的抑制剂浓度 IC50 。结果表明 ,Amp C酶对头孢噻啶、头孢噻吩和头孢哌酮的 Km 及 Vmax/ Km 值较苯唑西林、头孢噻肟、头孢他啶、头孢西丁和氨曲南的值大 ,说明Amp C酶对头孢噻啶、头孢噻吩和头孢哌酮具有较低的亲和力和较高的水解效率。此外 ,克拉维酸、舒巴坦和三唑巴坦 3种β-内酰胺酶抑制剂对 Amp C酶的抑制效力均很差 ,尤其是克拉维酸作用很弱。

噻吩骈嘧啶二酮衍生物的合成及其抑酶活性

为了寻找新的磷酸二酯酶(PDE)抑制剂,以茶碱为先导化合物,氰乙酸和氨基甲酸乙酯为原料,经中间体N-取代-5-氰基脲嘧啶,合成了12个噻吩骈[3,4-d]嘧啶-2,4-二酮类化合物。它们对PDE有不同程度的抑制活性,其中3-甲基-1-邻甲基苯基-5-氨基噻吩骈[3,4-d]嘧啶-2,4-二酮活性较强。

利用壳聚糖亲和层析提取抑酶肽的研究

采用化学改性的壳聚糖为载体,共价法偶联胰蛋白酶,制成抑酶肽亲和吸附剂,将其直接亲和层析牛肺提取液,分离、纯化高比活力的抑酶肽。抑酶肽抑制比活力为71 428 BAEE.mg-1,酶活性回收率为62.5%。该方法质量稳定,成本较低,吸附剂机械强度高,抗污染能力较强,非特异性吸附较小,可反复使用,价格低廉,适于应用。

头孢噻肟与他唑巴坦不同配比时的抑酶率

目的:研究头孢噻肟(CTX)与他唑巴坦(TZB)不同配比之复方制剂的体外抑酶率.方法:将CTX与TZB按不同比例配制,采用琼脂扩散法测量抑菌圈.结果:当CTX与TZB的比率在1:1～6:1之间时,对ESBLs的抑制可达80%以上.当CTX/TZB的配比在8:1以上时,对ESBLs的抑制不足30%.结论:合适的配比有利于在提高抗菌药抗菌效率的同时,降低其成本.

2─［（4S，5R）─4─酰胺基─5─甲基─3─氧代─2─异口恶唑烷基］─5─氧代─2─四氢呋喃甲酸钠的抑酶和抗菌活性研究

用生物方法测定１２个和１８个ｌａｃｔｉｖｉｃｉｎ衍生物的抑酶和抑菌活性。结果显示有１１个化合物对腊样芽孢杆菌产生的β－内酰胺酶和铜绿假单胞菌产生的β－内酰胺酶（ＰＳＥ１）均具有一定的抑制活性。１８个化合物对临床分离的２０株致病菌有不同程度的抗菌活性。

pH对β-内酰胺酶抑制剂抑酶作用的影响

选择舒巴坦 (sulbactam )和克拉维酸 (clavulanic acid)为研究对象 ,考察在不同 p H条件下 (6 .0、7.0、8.0 )两者对三种 β-内酰胺酶 (TEM- 2、SHV- 1、OXA- 3)抑酶作用的变化。结果表明 ,克拉维酸对三种酶的抑制效力均较好 ,舒巴坦对 OXA- 3酶的抑制效力远较其它两种酶差 ,且舒巴坦对 p H的敏感性强于克拉维酸 ,其在不同 p H条件下的抑制效力差异较大 ,说明克拉维酸的抑酶效力在不同 p H条件下较舒巴坦稳定。但总体上两者在低 p H条件下的抑酶效力均低于高 p H时。另外 ,从时间进程上看 ,舒巴坦和克拉维酸的抑制作用具有时间依赖性 ,酶与抑制剂预先行短时间孵育能增强抑制效力 ,但进一步延长孵育时间反而可使抑制效力降低。对以上酶抑制剂的 p H依赖性和时间依赖性用反应旁路假说进行了分析讨论。试验结果提示在 β-内酰胺酶的研究开发过程中应充分考虑其以上性质的临床意义。

壳聚糖微球亲和层析提取抑酶肽的研究

建立了一种高效、实用的抑酶肽制备技术。采用牛肺为原料,利用改性壳聚糖载体,共价偶联胰蛋白酶,亲和层析牛肺提取液,2步制得高比活抑酶肽。抑酶肽抑制比活力为71428 BAEE/mg,酶活性回收率为73.5%。该方法质量稳定,成本较低,吸附剂机械强度高,抗污染能力较强,可反复使用,适宜应用。

从抑酶药治疗急性胰腺炎的现状展望中药的作用前途

胰蛋白酶原激活，被认为是急性胰腺炎（ＡＰ）发病的关键，而严重ＡＰ病人可死于与其后发生的全身激活的蛋白酶级联反应密切相关的并发症，因此早期抑制胰蛋白酶活性的治疗极为重要。研究现状针对抑制胰蛋白酶活性来减少ＡＰ死亡率的实验治疗与临床治疗的研究报告至今也不...

SHV型β-内酰胺酶动力学及抑酶效应的研究

采用分光光度法研究革兰氏阴性菌产生的2种SHV型β-内酰胺酶的动力学。分别以L-B作图法求取Km和Vmax,以Dixon作图法求取Ki。结果表明:除SHV-1对第三代头孢菌素头孢噻肟没有水解作用外,SHV型β-内酰胺酶对青霉素类、第一代、第二代、第三代头孢菌素均有不同程度水解作用。头孢噻肟对SHV-2、有较高的亲和力（低Km）,但Vmax均不超过15％。抑酶实验结果证明头孢噻肟对SHV-2、有抑制作用,β-内酰胺酶抑制剂舒巴坦对SHV-1,2均有抑制作用。SHV型酶的最适pH值为6.6～7.4;最适反应温度是34℃～40℃。

二氢吲哚类化合物的合成及其抑酶活性

本文报道了一系列二氢吲哚衍生物的合成,并测定其抑制胆碱酯酶活性,发现二氢吲哚环被二氢吲哚酮结构所取代,3位季碳被仲碳原子所取代,5位以可能有抑制酶活性的环磷酰基或磺酰基代替二甲氨甲酰基,均使抑酶活性几乎完全消失。在合成过程中,使1位N-烃化或5位O-酰化选择性地进行。

一种氨肽酶N抑制剂抑酶活性检测试剂盒的开发

目的开发一种能准确、特异地评价目标化合物对人氨肽酶N的抑酶活性检测试剂盒。方法验证试剂盒准确度、精密度、稳定性等性能指标,同时通过与同类的传统试剂盒进行米氏常数的评价确认该试剂盒的灵敏度。结果精密度验证,试剂盒的CV=4.29%符合CV<15%的要求;准确度验证中,标准化残差δ^(*)=1.747落在(-2,2)区间以内,在95%置信度内是正常实验点,数据准确可靠;酶源稳定性良好;线性范围宽,96孔板中氨肽酶N在加入量120 μL时还能呈现良好的线性关系;该试剂盒米氏常数低于传统试剂盒,说明灵敏度高。结论所开发的试剂盒主要的性能指标表现良好,能准确测定化合物对人源氨肽酶N的抑酶活性,其检测成本和可靠性优于现有上市产品,具有推广应用及开发价值。

罗氟司特类似物的合成及抑酶活性

目的:为了寻找活性更好的磷酸二酯酶Ⅳ(PDEⅣ)抑制剂,对罗氟司特进行结构改造。方法:保留环丙基甲氧基和二氟甲氧基的结构,以2-氨基-5-硝基苯酚(1)为起始原料,制备关键中间体3-环丙基甲氧基-4-二氟甲氧基苯胺(4),设计合成一系列新型罗氟司特类似物。通过1H NMR、MS对化合物进行表征,并对合成的目标化合物进行了初步的抑酶活性测试。结果:9种目标化和物质谱均发现分子离子峰,目标化合物7i和7e的IC50小于1.5,显示出了一定的抑酶活性。结论:为进一步为探索新型PDEⅣ抑制剂提供了一定的理论依据。