抑霉唑、咪鲜胺及其代谢物在荔枝贮藏保鲜中的残留动态及安全评价

为评估抑霉唑和咪鲜胺在荔枝全果、果皮和果肉的残留情况及膳食风险,本研究建立了同时测定抑霉唑、咪鲜胺及其代谢物含量的气相色谱-串联质谱法。该方法检测抑霉唑、咪鲜胺、咪唑乙醇和2,4,6-三氯苯酚的方法检出限(LOD)分别为2.0、3.0、6.0、0.3μg/kg;定量限(LOQ)分别为6.0、10.0、20.0、1.0μg/kg;在荔枝全果、果皮和果肉中的添加回收率为78.9%~107%、RSD为2.6%~5.8%。保鲜实验结果表明,抑霉唑、咪鲜胺浸果浓度越高残留量越高,残留物随贮藏时间延长由果皮逐渐迁移到果肉中。全果和果皮中抑霉唑、咪鲜胺的残留量随贮藏时间延长不断降低,果肉则于浸泡后第7 d达到最大值再逐渐消解。代谢咪唑乙醇和2,4,6-三氯苯酚随着贮藏时间增加不断升高。用质量浓度为500 mg/L的抑霉唑、咪鲜胺溶液分别浸泡保鲜,安全间隔期14 d内荔枝咪鲜胺的慢性、急性膳食摄入风险在可接受的范围内。

抗抑霉唑葡萄白腐病菌的适合度及与三唑类杀菌剂的交互抗性研究

以对抑霉唑不同敏感性的葡萄白腐病菌菌株为试材,研究抗抑霉唑菌株的适合度及抑霉唑与常用三唑类杀菌剂的交互抗性。结果显示,在菌丝生长速率、产孢量、致病力方面,部分抗性菌株显著高于敏感菌株,但致病力与菌株的EC_(50)值无显著相关性。37个葡萄白腐病菌菌株对抑霉唑、丙环唑、苯醚甲环唑、氟硅唑的平均EC_(50)值分别为16.5339、1.1159、2.2293、1.6481μg·mL^(-1),抑霉唑与丙环唑、苯醚甲环唑、氟硅唑的EC_(50)对数值之间的相关系数分别为0.6572、0.5261、0.5106,表明抑霉唑与丙环唑存在正交互抗性,与苯醚甲环唑、氟硅唑无显著交互抗性。本研究表明,对抑霉唑产生抗性的葡萄白腐病菌菌株具有较强的适合度,存在形成优势群体的潜在性,因此,用抑霉唑防治葡萄白腐病时,应尽量避免与丙环唑混合使用,以延缓其抗药性的发展。

基于手性固定相-GC-MS的抑霉唑光学纯度分析研究

针对手性农药广泛使用、手性安全日益关注的现实问题,基于手性固定相-GC-MS构建抑霉唑光学纯度的快速分析方法。应用经过改性的二甲基硅基-β-环糊精CYCLOSIL-B手性色谱柱,基于气相色谱-质谱联用技术,对手性农药抑霉唑进行了对映异构体的分析,且在15.625~500μg·mL^(-1)的线性范围良好。同时用小鼠血浆初步验证了抑霉唑的血浆蛋白结合率实验,结果表明,其对映异构体的血浆蛋白结合率有所不同,分别为76.02%和81.41%,在生物体内存在的立体选择性差异。对抑霉唑提供了一种快速、高效、简便的光学纯度的分析方法,为农药的高效利用及手性安全提供了一定条件。

基于表面增强拉曼光谱技术的柑橘表皮咪鲜胺和抑霉唑农药残留检测

咪鲜胺和抑霉唑是柑橘类水果常用的保鲜剂,二者混用可有效降低致病细菌抗药性,达到更好的保鲜效果,但农残过量会影响食用者健康。基于表面增强拉曼光谱技术,以丑橘为基质,咪鲜胺和抑霉唑混合农药为研究对象,结合化学计量学方法,建立一种快速准确检测柑橘表皮农药残留的方法。为了对比金、银溶胶的增强效果,分别将金、银溶胶用于浓度为10 mg·L^(-1)的咪鲜胺、抑霉唑标准溶液及橘皮萃取液中的混合农药,采集其拉曼光谱。结果表明,咪鲜胺和抑霉唑的单独标准溶液中金溶胶较优,在橘皮萃取液中的混合农药溶液中银溶胶效果更佳。为了获得最佳增强效果,通过不同比例试验对比,最终确定溶胶增强基底与两种农药标准溶液体积比为1∶1,团聚剂NaCl浓度为1 mol·L^(-1)。按照浓度从高到低的方向,分别采集咪鲜胺标准溶液及抑霉唑标准溶液在不同浓度情况下的光谱,检出限分别低于1和0.5 mg·L^(-1),达到国标规定的最大残留限5 mg·L^(-1)。在咪鲜胺和抑霉唑混合农药的定量分析实验中,以橘皮萃取液为基质,用增强效果较好的银溶胶作为增强基底,采集含有梯度浓度的咪鲜胺和抑霉唑混合农药(5~42 mg·L^(-1))的表面增强拉曼光谱,采用多种预处理方法优化光谱数据,对比支持向量回归(SVR)、灰狼算法优化的支持向量回归(GWO-SVR)、粒子群算法优化的支持向量回归(PSO-SVR)、遗传算法优化的支持向量回归(GA-SVR)四种回归模型的建模效果选择最佳算法建立定量模型。结果表明:通过一阶微分预处理方法,选取829和1168 cm^(-1)处的特征峰强度建立灰狼算法优化的支持向量机回归(GWO-SVR)模型得到的预测效果最佳,其校正相关系数(R_(C))为0.978,校正集均方根误差(RMSEC)为1.655 mg·L^(-1),预测相关系数(R_(P))为0.967,预测集均方根误差(RMSEP)为2.227 mg·L^(-1)。研究结果表明,该方法可对柑橘表皮咪鲜胺和抑霉唑混合农药进行定性与定量检测,可为柑橘农残检测提供新思路。

抑霉唑在草莓生长过程中对映体选择性降解行为

采用优化的QuEChERS样品前处理技术和超高效液相色谱-串联质谱仪(UPLC-MS/MS),建立了测定草莓中手性农药抑霉唑对映体的分析方法。样品用乙腈提取,N-丙基乙二胺(PSA)和石墨化碳黑(GCB)净化,经手性色谱柱Lux Cellulose-2拆分后,用UPLC-MS/MS进行测定,基质外标法定量分析。结果表明,手性农药抑霉唑对映体在2.5~1000μg·L^(-1)范围内线性关系良好(R^(2)>0.99),方法定量限(LOQ)为5μg·kg^(-1),3个添加水平(5、50、1000μg·kg^(-1))下(S)-(+)-和(R)-(-)-抑霉唑对映体在草莓基质中的平均回收率分别为94.6%~119.7%和86.6%~117.3%,相对标准偏差分别为2.0%~8.3%和5.0%~9.6%。抑霉唑两对映体在草莓生长中的降解符合一级动力学方程,(S)-(+)-抑霉唑半衰期6.54 d,(R)-(-)-抑霉唑半衰期7.07 d。本研究从对映体的角度研究了抑霉唑在草莓中的降解,可为手性农药对映体的环境行为研究提供基础数据。

杀菌剂中抑霉唑含量的离子对高效液相色谱分析

选用庚烷磺酸钠作离子对试剂 ,拟定了杀菌剂中抑霉唑及其硫酸盐的反相离子对HPLC测定方法。讨论了离子对的形成过程 ,pH值对离子对形成的影响 ,推导了流动相pH值计算公式 ,估算了流动相的pH值范围 ,确定了色谱柱为EclipseXDB C815 0mm× 4 .6mm ,流动相为甲醇 :含 12mmol/L庚烷磺酸钠的 2 5mmol/L磷酸盐缓冲溶液 (pH≈ 2 .8) =6 2∶38(V/V) ,测定波长为 2 2 5nm的分析条件。方法的检出限为 7.1× 10 -4μg ;线性范围为 8.0× 10 -3 ～ 4 .0 μg ,实验结果线性关系良好 ;相关系数r =0 .9998。方法用于杀菌剂样中抑霉唑及其硫酸盐的测定 ,回收率 99.7% 。

研究揭示环境生物对抑霉唑高毒低效体污染的靶向消除机制

中国农业科学院烟草研究所烟草病虫害防控创新团队研究发现,手性杀菌剂抑霉唑右旋体的生物毒性显著高于左旋体,但通过土壤功能微生物联合蚯蚓可实现对右旋体污染的靶向消除。相关研究成果发表在《有害物质杂志》。

高效液相色谱法同时测定甜瓜样品中的抑霉唑和噻菌灵

提出了一种用高效液相色谱法 (HPLC)同时测定甜瓜样品中的抑霉唑和噻菌灵残留量的方法。用乙酸乙酯作提取剂提取甜瓜样品 ,通过一个净化步骤分离样品中共提取组分。采用InertsilC8 3色谱柱 (15 0mm× 4 .6mm ,5 μmi.d ,) ,流动相为乙腈∶水 =75∶2 5 ,外标法定量 ,方法的检出限噻菌灵为 0 .70ng ,抑霉唑为1.5 3ng ;回收率为 87.5 %～ 98.0 % ;相对标准偏差为 1.5 %～ 4 .2 %。本法用于甜瓜样品中抑霉唑、噻菌灵含量的测定 ,获得了满意的结果。

气相色谱法测定水果和蔬菜中异丙威、嘧霉胺、抑霉唑残留量

介绍了应用配有FTD/NPD/检测器的气相色谱仪测定水果和蔬菜中异丙威、嘧霉胺、抑霉唑残留量的方法。样品用乙酸乙酯提取,经过硅胶柱净化,旋蒸定容后上机。以GC-FTD(NPD)测定,外标法定量。嘧霉胺、异丙威、抑霉唑分别在一定范围内,质量浓度与峰高(峰面积)呈良好的线性关系。方法准确,重现性、精密度好,杂质干扰少。方法检出限嘧霉胺0.005mg/kg,异丙威0.01mg/kg,抑霉唑0.01mg/kg。

荔枝中抑霉唑和嘧霉胺残留量的超高效液相色谱-串联质谱法同时测定

建立了超高效液相色谱-串联质谱法同时测定荔枝中抑霉唑和嘧霉胺的方法,对提取试剂、流动相、质谱条件进行了研究,并对抑霉唑和嘧霉胺可能的断裂机理进行了推测。待测样品直接用乙腈提取,采用电喷雾离子源(ESI)、多反应监测正离子模式扫描,外标法定量。抑霉唑、嘧霉胺的质量浓度在1.00～20.0μg/L范围内与峰面积呈良好线性,方法的检出限为0.005mg/kg;添加水平为0.005、0.010、0.020mg/kg时抑霉唑和嘧霉胺的平均回收率分别为91%～96%和83%～90%,相对标准偏差分别为6.5%～8.4%和9.5%～11.1%。该方法快速、简便、准确,可用于荔枝中抑霉唑和嘧霉胺残留量的定性与定量检测。

固相萃取-反相高效液相色谱法测定红毛丹中抑霉唑的残留动态

建立固相萃取-反相高效液相色谱法测定红毛丹中抑霉唑的残留动态分析的方法。色谱柱为Shim-pack VP-ODS(150mm×4.6mm,5μm),检测波长229nm,流动相为甲醇-离子对溶液(75:25,V/V),流速0.85mL/min,进样量20μL。抑霉唑在15.0～960.0μg/L(r=0.9994)范围内与峰面积呈良好线性关系,检出限为5μg/L,抑霉唑回收率为86.4%～104.5%,相对标准偏差0.84%～2.87%。同时,还对抑霉唑由红毛丹皮向肉的迁移,在红毛丹体上的降解动态进行分析。该方法操作简便快速,可作为红毛丹中抑霉唑含量监测的方法。

粮谷中抑霉唑残留的气相色谱法测定

报道了气相色谱法测定粮谷中抑霉唑残留的方法。选取稻谷、小麦、燕麦和黍（大黄米）4种粮谷产品为研究对象，考察了不同类型检测器、不同提取体系、不同淋洗曲线和不同离心时间的破乳效率对抑霉唑测定的影响。试样以正己烷-乙酸乙酯（体积比1：1）提取，经毛细管气相色谱柱HP-5（30m×0．25mm×0．25μm）分离，μ-ECD检测器测定。方法检出限为0．005mg／kg（S／N=3）。添标水平为0．01、0．05、0．25和0．50mg／kg时平均回收率为82％-111％，相对标准偏差为5．5％-11．5％。线性范围为0.05—1．0mg／L（r^2=0.9994）。该方法快速、灵敏、准确，适合粮谷中抑霉唑残留的测定。

离心破乳-气相色谱法测定黑米中残留抑霉唑的研究

报道了离心破乳．气相色谱法测定黑米中残留抑霉唑的方法。考察了不同离心速率、不同离心时间的破乳效率。试样以V（正己烷）：V（乙酸乙酯）=1：1提取，经毛细管气相色谱柱HP．5（30m×0．25mm×0．25um）分离，u-ECD检测器测定。方法检出限为1．0×10^-3mg／kg（S／N=3）。在添标水平0．05、0．25和0．50mg／kg时的平均回收率为92．3％～104．3％，相对标准偏差为6．9％～9．3％。线性范围为0．02～1．0mg／L（r^2=0．9994）。方法适合黑米中残留抑霉唑的测定。

杀菌剂抑霉唑在梨子中残留动态分析

提出了通过液-液萃取，而后用气相色谱方法测定梨中抑霉唑残留量的方法。对已报道的样品提取、纯化方法进行了改进。本试验以丙酮作提取剂，经乙酸乙酯萃取，用高灵敏度气相色谱μ-ECD检测器测定。方法检出限为0．01mg／kg，平均回收率为80．5％～111．8％，相对标准偏差为0．3％～3．3％。该法可用于梨肉和梨皮中抑霉唑残留量的测定。同时，还对抑霉唑由梨皮向梨肉的迁移，在梨体上的降解等动态进行了测定。

浙江衢州地区柑橘绿霉病菌对抑霉唑和多菌灵的抗性水平及其分子机制

研究了采自浙江衢州地区,包括柯城区、衢江区和开化县12个贮藏库的70个柑橘绿霉病菌Penicillium digitatum菌株对抑霉唑和多菌灵的抗性频率、抗性水平及其抗性分子机制。结果表明:柯城区和衢江区的抑霉唑抗性菌株(最低抑制浓度MIC≥0.5μg/mL)的比例分别为77.1%和62.5%,两地抗性菌株的平均EC50值分别为2.07±1.04μg/mL和2.35±0.73μg/mL,分别是当地敏感菌株EC50值的41.4和47.0倍;而采自开化县的菌株均对抑霉唑敏感(MIC≤0.1μg/mL),平均EC50值为0.04±0.02μg/mL。柯城区和衢江区的多菌灵抗性菌株(MIC≥10μg/mL)的比例分别为54.3%和54.2%,而开化县的抗性菌株比例仅为9.1%。即来自柯城和衢江两个柑橘主产区的绿霉病菌群体对抑霉唑和多菌灵的抗性频率均远高于非柑橘主产区的开化县群体,说明抗药性群体的形成与药剂使用历史有关。进一步研究发现,衢州地区柑橘绿霉病菌对抑霉唑的抗性均属于IMZ-R3型,即与抑霉唑靶标基因CYP51B启动子区的插入突变有关,而对多菌灵的抗性则与β-微管蛋白基因的992位核苷酸点突变(T→A)导致对应的200位点的氨基酸突变(F→Y)有关。

500g/L抑霉唑乳油对柑橘青霉和绿霉病菌的抑制作用与防治效果

试验结果表明，500g／L抑霉唑乳油对柑橘青霉病菌和绿霉病菌的抑制中浓度（EC50）分别为0.0136mg／kg和0.0129mg／kg。用400～800mg／kg的抑霉唑药液浸果1min，捞起晾干，装箱入库常温贮藏，药后60d，对柑橘青霉、绿霉病的防效达93．11％～96．48％，极显著高于70％甲基硫菌灵用600mg／kg处理的防效（84．30％），且对贮藏期的柑橘没有药害，对果实的色泽和口味没有明显的影响。

5种抑霉剂对储藏片烟霉菌的抑制效果

根据药剂有效作用浓度的不同和对霉菌作用方式的差异,用5种抑霉剂对引起储藏片烟霉变的6种霉菌进行处理。结果表明,5种抑霉剂对霉菌的发生都有一定的抑制作用,其中富马酸二甲酯对霉菌的菌丝生长、孢子萌发和芽管伸长的抑制作用最强,抑制效果最好,丙酸、乳酸、苯甲酸和对羟基苯甲酸甲酯防效则次之。

改进的QuEChERS-气相色谱法测定果蔬保鲜剂抑霉唑残留

建立果蔬保鲜剂抑霉唑残留的改进QuEChERS快速提取净化方法及气相色谱检测方法。样品用含1%乙酸的乙腈溶液提取,氯化钠和无水硫酸镁盐析后,取上清液,加入N-丙基乙二胺(PSA)与十八烷基硅胶键合相(C18)吸附剂净化,用配有电子捕获检测器的气相色谱测定,外标法定量。抑霉唑在0.2～5.0mg/L(r=0.9994)范围内与峰面积呈良好线性关系;方法检出限(RSN≥3)为0.02mg/kg;回收率为74.3%～86.7%;相对标准偏差小于10%。该方法操作简便、准确,并且成本较低,适用于果蔬保鲜剂抑霉唑残留的测定。

气相色谱法测定水果和蔬菜中嘧霉胺·氟硅唑·抑霉唑残留量

介绍了应用配有FTD/NPD/检测器的气相色谱仪测定水果和蔬菜中嘧霉胺、氟硅唑、抑霉唑残留量的方法。样品用乙酸乙酯提取,经过硅胶柱净化,旋蒸定容后上机。以GC-FTD(NPD)测定,外标法定量。嘧霉胺、氟硅唑、抑霉唑分别在一定范围内,质量浓度与峰高(峰面积)呈良好的线性关系。方法准确,重现性、精密度好,杂质干扰少。方法检出限嘧霉胺0.005mg/kg,氟硅唑0.01mg/kg,抑霉唑0.01mg/kg。

抑霉唑的合成研究

以间二氯苯和咪唑等为原料，经过酰化、还原、烷基化反应制备了杀菌剂抑霉唑。其化学结构经￣１ＨＮＭＲ确认。