抗β_2GPI/β_2GPI复合物激活THP-1细胞表达炎性相关因子

目的探讨抗β2糖蛋白I(抗β2GPI)自身抗体与β2糖蛋白I(β2GPI)复合物刺激单核细胞株THP-1表达炎性因子IL-6、IL-8、TNF-α及可能机制。方法用荧光定量PCR法检测抗β2GPI/β2GPI复合物刺激THP-1细胞不同时间(0.5、1、1.5、2、6 h)后IL-6、IL-8、TNF-αmRNA表达,用免疫荧光染色法及western blot观察THP-1细胞表达IL-6、IL-8、TNF-α蛋白的情况。荧光定量PCR及western blot观察Toll样受体4(TLR4)途径抑制物(TAK-242)干预抗β2GPI/β2GPI复合物对THP-1细胞的刺激作用。结果抗β2GPI/β2GPI复合物(100μg/mL)刺激THP-1细胞不同时间,可使细胞表达IL-6、IL-8及TNF-αmRNA水平逐渐上升,于刺激2 h时IL-6、IL-8及TNF-α达到峰值(P<0.01),免疫荧光染色及western blot证实细胞表达IL-6、IL-8及TNF-α蛋白水平也明显增加。TAK-242(5μmol/L)可显著抑制抗β2GPI/β2GPI复合物诱导的细胞IL-6、IL-8及TNF-α表达。结论抗β2GPI/β2GPI复合物通过TLR4途径,激活THP-1细胞表达炎性细胞因子IL-6、IL-8及TNF-α,参与抗磷脂综合征的病理机制。

TRAF6在抗β_2GPI/β_2GPI复合物诱导THP-1细胞表达组织因子时的活化

目的:探讨肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)在抗β2GPI/β2GPI复合物诱导单核细胞株THP-1表达组织因子(TF)中的作用。方法:采用一定剂量抗β2GPI/β2GPI复合物刺激THP-1细胞一定时间,收集细胞总RNA及总蛋白,实时定量PCR检测细胞TF mRNA水平,发色底物法检测细胞TF活性;RT-qPCR及Western blot分别检测细胞TRAF6mRNA和蛋白表达情况;进一步采用蛋白酶体抑制剂MG-132,观察是否能够干预抗β2GPI/β2GPI复合物对细胞的刺激效应。结果:抗β2GPI/β2GPI复合物(100 mg/L)能够刺激THP-1细胞表达TF mRNA及活性,与对照相比差异显著(P<0.05);使细胞TRAF6 mRNA和蛋白表达均增加,并显示时间相关性,分别在刺激15 min和30 min时表达至高峰;MG-132(5μmol/L)明显抑制抗β2GPI/β2GPI复合物(100 mg/L)对THP-1细胞TRAF6 mRNA和蛋白的刺激效应及TF的诱导表达。结论:抗β2GPI/β2GPI复合物诱导THP-1细胞表达TF过程中,TRAF6被激活并发挥重要作用。

β_2GPI/抗β_2GPI抗体复合物激活THP-1细胞内TRIF途径

目的:观察β2GPI/抗β2GPI抗体复合物能否激活单核细胞株THP-1的TRIF途径,以探讨TRIF依赖途径在抗磷脂综合征(APS)发病机制中的作用。方法:采用一定剂量β2GPI/抗β2GPI抗体复合物刺激THP-1细胞一定时间,收集细胞总RNA及总蛋白,荧光定量PCR(RT-PCR)检测细胞TRIF mRNA水平,Western blot检测细胞TRIF蛋白表达情况;进一步观察TLR4途径抑制剂-TAK-242是否干预β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对TRIF的诱导表达以及相关细胞因子IL-6、IL-8、TNF-α的表达。结果:β2GPI/抗β2GPI抗体复合物(100 mg/L)能够诱导THP-1细胞表达TRIF(mRNA及蛋白),并显示时间效应,分别于刺激1 h和2 h时TRIF mRNA及蛋白表达至高峰。TAK-242(5μmol/L)能够明显抑制β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对THP-1细胞TRIF的诱导表达,同时抑制IL-6、IL-8、TNF-α等炎症因子的表达。结论:TRIF依赖的TLR4途径参与了β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对THP-1细胞的激活,提示其在抗磷脂综合征的病理机制中发挥一定作用。

mTOR活化对抗β_2GPI抗体/β_2GPI复合物诱导THP-1细胞组织因子表达的影响

目的探讨雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在抗β_2糖蛋白I(β_2GPI)/β_2GPI复合物诱导THP-1细胞组织因子(TF)表达中的作用。方法用抗β_2GPI抗体/β_2GPI和β_2GPI/Ig G-APS处理THP-1细胞,mTOR抑制剂雷帕霉素(100 nmol/L)进行干预实验;收集细胞总RNA和蛋白质,实时定量PCR(RT-q PCR)和TF活性试剂盒分别检测THP-1细胞中TF mRNA表达水平及其活性,western blot检测THP-1细胞中mTOR、磷酸化mTOR(p-mTOR)、p38、p-p38、ERK1/2、p-ERK1/2、JNK、p-JNK、NF-κB p65和p-NF-κB p65的表达情况。结果抗β_2GPI抗体/β_2GPI和β_2GPI/Ig G-APS复合物均能明显增加THP-1细胞TF mRNA和TF活性以及mTOR磷酸化水平(P均<0.05);雷帕霉素能明显降低抗β_2GPI抗体/β_2GPI和β_2GPI/Ig G-APS诱导THP-1细胞TF的表达水平以及mTOR磷酸化的效应(P均<0.05),也能明显地削弱p38、ERK1/2和NF-κB p65的磷酸化水平(P均<0.05),而对JNK的磷酸化水平无抑制效应(P>0.05)。结论抗β_2GPI抗体/β_2GPI复合物能够刺激THP-1细胞mTOR的活化,并能影响TF的表达。

几种肾脏疾病中抗β_2GPI抗体的检测

目的 探讨抗 β2 GPI抗体 (aβ2 GPI)与几种肾脏疾病的相关性。方法 选择 6 9例肾脏病患者及 4 0例正常对照 ,用ELISA进行aβ2 GPI及抗心磷脂抗体 (ACA)检测。结果 肾脏疾病患者aβ2 GPI和ACA阳性率均高于正常对照组 (P <0 .0 5 ) ,肾脏病患者中aβ2 GPI和ACA呈正相关性 (r=0 .6 89,P <0 .0 5 )。结论 aβ2 GPI和ACA很可能针对同一种抗原 ,而且与慢性肾炎、肾病综合征、狼疮性肾炎等肾脏疾病有相关性 ,推测aβ2 GPI可能在肾脏病患者高凝状态的形成中起重要作用。

抗β_2GPI抗体与抗磷脂抗体综合征的相关性研究

目的：探讨αβ２ＧＰＩ在抗磷脂抗体综合征中诱导抗体产生的机制。方法：随机抽取活动期ＳＬＥ患者６０例，采用ＥＬＩＳＡ法测定血清中αβ２ＧＰＩ。结果：发现与正常对照组相比ＳＬＥ组αβ２ＧＰＩ水平明显升高（Ｐ＜０００１）。以ｘ＋３ｓ为正常值上限，阳性率高达９５％，显示αβ２ＧＰＩ与ＳＬＥ有显著相关性。结论：αβ２ＧＰＩ是抗磷脂肮体综合征的重要标志。

EGCG干预抗β_2GPI/β_2GPI复合物对THP-1细胞的诱导活化作用

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)干预抗β2GPI/β2GPI复合物诱导人急性单核细胞白血病细胞系(THP-1细胞)活化的作用。方法用一定剂量的EGCG、脂多糖(LPS)、抗β2GPI/β2GPI复合物等不同刺激物处理THP-1细胞,实时荧光定量PCR检测细胞组织因子(TF)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达;发色底物法检测TF活性;ELISA测定TNF-α蛋白的表达。结果 50 mg/L EGCG能抑制抗β2GPI/β2GPI复合物刺激的THP-1细胞TF mRNA和活性的表达(t值为6.97、3.89,P均<0.05),同时下调该复合物诱导的THP-1细胞TNF-αmRNA和蛋白质的表达水平(t值为3.23、4.65,P均<0.05)。结论 EGCG可干预抗β2GPI/β2GPI复合物诱导THP-1细胞TF及TNF-α的表达,抑制THP-1细胞活化。

自身抗体的辅助因子β_2GPI分离纯化、鉴定及抗体的制备

人们新近研究发现─种血浆糖蛋白β_２ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎＩ（β_２ＧＰＩ）参与抗磷脂抗体（ＡＣＬ）与心磷脂（ＣＬ）的结合反应，要深入研究β_２ＧＰＩ与ＡＣＬ、ＣＬ三者的关系和ＡＣＬ在血栓形成发病机理中的作用，首先需将其进行分离、纯化、鉴定。用高氯酸沉淀正常人血清弃杂蛋白，再经过ＤＥＡＥ纤维素离子交换，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶过滤和ＰｒｏｔｅｉｎＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ，Ｈｅｐａｒｉｎ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ二步亲和层析分离纯化了β_２ＧＰＩ，用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳鉴定其分子量为５０ｋＤ，凝胶扫描其纯度为９３．４４％，等电点６．１～６．５，氨基酸组成比例分析纯化样品与标准品β_２ＧＰＩ相符。进─步将纯化鉴定的样品β_２ＧＰＩ与佐剂混匀，免疫新西兰兔，成功地制备了抗β_２ＧＰＩ抗体，用对流免疫电泳鉴定制备的抗体可与纯化的样品、β_２ＧＰＩ标准品形成反应沉淀线，制备的抗体效价大于１∶３２。研究意义在于探讨用免疫生化的方法分离心磷脂，纯化了β_２ＧＰＩ，成功地制备了抗β_２ＧＰＩ抗体，为深入研究β_２ＧＰＩ、ＡＣＬ在血栓形成发病机理中的作用创造了良好的工作基础。

PDTC和姜黄素对抗β_2GPI抗体诱导小鼠表达组织因子的影响

目的:本研究拟探讨PDTC和姜黄素对抗β_2GPI抗体诱导小鼠组织因子(Tissue factor,TF)表达的影响。方法:BALB/c小鼠先用PDTC[100 mg/(kg·d)]或/和姜黄素[50 mg/(kg·d)]预处理2 h,再进行腹腔注射anti-β_2GPI(500μg/只),取小鼠腹腔巨噬细胞、双侧颈动脉和胸主动脉,超声裂解,收集细胞总RNA和蛋白,实时定量PCR(Real-time q PCR)检测细胞TF mRNA水平,TF活性试剂盒检测TF活性,Western blot方法检测NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65、c-Jun和磷酸化pc-Jun的表达情况。结果:抗β_2GPI抗体能够诱导小鼠腹腔巨噬细胞TF的表达及NF-κB p65和c-Jun/AP-1的磷酸化,与对照相比差异有统计学意义(P<0.05 vs NR-Ig G);PDTC和姜黄素均能抑制抗β_2GPI抗体诱导小鼠TF的表达以及NF-κB p65和cJun/AP-1的磷酸化效应(P<0.05 vs anti-β_2GPI),但是二者没有协同作用。结论:PDTC和姜黄素均能影响抗β_2GPI抗体诱导小鼠TF的表达,表明其具有防治血栓形成的潜力。

抗β_2GPI抗体对系统性红斑狼疮患者血栓形成的影响

目的:探讨抗β2GPI抗体对系统性红斑狼疮患者血栓形成的作用及对疾病诊断的临床意义。方法:选取系统性红斑狼疮(SLE)并发血栓患者20例,单纯SLE患者30例,正常对照23例,采用AggRAM-四通道血小板聚集仪检测血小板聚集率,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗β2GPI抗体。结果:SLE血栓组患者和SLE非血栓组患者抗β2GPI抗体滴度和抗体阳性率都显著高于正常对照组(P<0.05),并且SLE血栓组患者抗β2GPI抗体滴度和抗体阳性率高于SLE非血栓组患者;SLE血栓组患者血小板聚集率比SLE非血栓组和正常对照组显著升高(P<0.05),SLE非血栓组患者血小板聚集率和正常对照组没有统计学差异;所有SLE患者中抗β2GPI抗体阳性组比抗体阴性组血小板聚集率升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:抗β2GPI抗体和血小板聚集率升高可为SLE患者继发血栓性疾病提供辅助诊断;抗β2GPI抗体促进SLE患者血小板聚集率上升,加速SLE患者血栓形成。

抗β_2GPI抗体测定在系统性红斑狼疮患者中的临床意义

目的探讨抗β2糖蛋白I抗体(aβ2GPI)在系统性红斑狼疮(SLE)诊治中的临床意义及与疾病活动性的关系。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定68例SLE患者及23例健康对照者血清中aβ2GPI浓度,同时记录SLE患者各项实验室指标和其他自身抗体的水平。对照分析aβ2GPI阳性与阴性患者实验室检测指标结果的差异。结果SLE患者中,aβ2GPI抗体阳性率为25%(17/68),健康对照组中未检出aβ2GPI。患者的SLE疾病活动性指数(SLEDAI)与aβ2GPI抗体浓度无相关性。aβ2GPI阳性SLE患者血小板减少、凝血酶原时间(PT)延长的发生率高于aβ2GPI阴性组(<0.05)。aβ2GPI检测结果与aCL检测结果间存在正相关性。结论部分SLE病例中可检出抗β2GPI抗体。抗β2GPI抗体浓度与SLE疾病活动性无明显相关。抗β2GPI抗体与SLE患者发生血小板减少、凝血酶原时间延长等事件相关。

MAPKs在anti-β_2 GPI/β_2 GPI刺激THP-1细胞表达TF过程中的作用探讨

目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinases,MAPKs)在anti-β2 GPI/β2 GPI复合物诱导单核细胞株THP-1表达组织因子(TF)中的活化及其作用。方法:利用荧光定量PCR(Real-time PCR)、TF活性试剂盒等分别检测anti-β2 GPI/β2 GPI复合物诱导THP-1细胞表达TF mRNA及TF活性,Western blot检测细胞表达p38、磷酸化-p38(p-p38)、ERK1/2、磷酸化-ERK1/2(p-ERK1/2)、JNK、磷酸化-JNK(p-JNK)的情况。进一步采用p38、ERK1/2、JNK抑制剂(SB203580、U0126、SP600125)观察是否能阻断anti-β2 GPI/β2 GPI复合物诱导THP-1细胞表达TF。结果:Anti-β2 GPI/β2 GPI复合物(100μg/ml)能够显著增强THP-1细胞表达TF,并使p-p38、p-ERK1/2、p-JNK水平显著升高(P<0.05 vs control);其引发的MAPKs磷酸化具有时间效应性,均在刺激30分钟时达到高峰;对应的特异抑制剂SB203580(10μmol/L)、U0126(5μmol/L)、SP600125(90 nmol/L)单独或合并处理THP-1细胞后,anti-β2 GPI/β2 GPI复合物诱导细胞TF mRNA表达及TF活性的效应明显被阻断(P<0.01 vs control)。结论:Anti-β2 GPI/β2 GPI复合物诱导THP-1细胞表达TF过程中,MAPKs被激活进而发挥重要作用。

oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物促进人脐静脉内皮细胞黏附分子表达的机制

目的探讨氧化型低密度脂蛋白/β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体(oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体)复合物对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达黏附分子的影响,以及Toll样受体4(TLR4)信号通路在其中发挥的作用。方法用单纯培养基、oxLDL、oxLDL/β2GPI复合物、oxLDL/抗β2GPI抗体复合物、oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物、LPS分组刺激HUVEC,收集总RNA和蛋白,利用实时定量PCR和Western blot法检测细胞间黏附分子1(ICAM-1)、血管黏附分子1(VCAM-1)和冯·维勒布兰德因子(v WF)的mRNA和蛋白水平;采用TLR4阻断剂TAK-242(5μmol/L)或p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)阻断剂SB203580(10μmol/L)预处理的方式,探索阻断TLR4通路后,oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对HUVEC黏附分子表达的影响,通过THP-1细胞黏附实验检测oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对HUVEC黏附能力的影响。结果与培养基对照组相比,oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物能够显著提高HUVEC的ICAM-1、VCAM-1和v WF表达,并且能够增强HUVEC对THP-1细胞的黏附,TAK-242或SB203580处理能够抑制该过程。结论 oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物能够增强HUVEC的黏附分子表达和对THP-1细胞的黏附,TLR4和p38MAPK与该过程密切相关。

抗β2GPI抗体促进载脂蛋白E缺陷小鼠血管炎症及血栓相关分子的表达

目的探讨抗β2糖蛋白I(β2GPI)抗体在载脂蛋白E缺陷(ApoE^(-/-))小鼠表达动脉粥样硬化相关炎症因子和血栓相关分子过程中的作用。方法将ApoE^(-/-)小鼠实施颈动脉套环手术后,随机分为生理盐水组、100μg抗β2GPI抗体组、100μg同源对照抗体(兔IgG)组以及100μgβ2GPI/抗β2GPI抗体复合物组。各组均给以高脂饮食,且每7 d腹腔注射1次相应刺激剂,6周后处死小鼠。采用HE染色观察套环侧颈动脉阻塞情况,并以免疫组织化学染色检测套环侧颈动脉TLR4、组织因子(TF)和冯·维勒布兰德因子(vWF)的表达。采用实时荧光定量PCR检测主动脉的白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA水平。结果 HE染色结果显示抗体组阻塞最为明显,免疫组织化学染色结果显示抗体组套环侧颈动脉TLR4、TF和vWF表达上调,抗体组主动脉IL-1β和TNF-α的mRNA水平明显高于其他3组。结论抗β2GPI抗体通过上调小鼠动脉血管表达炎症因子IL-1β和TNF-α,血栓相关分子TF和vWF以及TLR4的表达,促进动脉粥样斑块形成。

抗β_2糖蛋白Ⅰ型抗体与急性冠脉综合征相关性研究

目的:探讨抗β2糖蛋白I型抗体(抗β2 GPI抗体)与急性冠脉综合征(ACS)的临床相关性。方法:采用酶联免疫吸附法检测168例ACS患者血清中抗β2 GPI抗体的浓度水平,同时进行冠脉造影术检查,并对罪犯血管进行血管重建。根据抗体浓度水平分为高、中、低浓度组,分析各组中抗体浓度与ACS临床分型[急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)、急性非ST段抬高型心肌梗死(NSTEMI)、中危以上不稳定型心绞痛(UA)]的相关性,随访12个月,评价抗β2 GPI抗体浓度与ACS患者的疾病严重程度及主要不良心血管事件(MACEs)的相关性。结果:ACS中STEMI、NSTEMI、UA患者抗β2 GPI抗体浓度依次是(63.4±32.6)RU/ml,(39.8±25.9)RU/ml,(22.1±10.4)RU/ml,其中STEMI患者抗体浓度较高,UA患者的抗体浓度最低。抗β2GPI抗体的高浓度组中STEMI(10/11)占90.9%,高于中浓度组(29/96)和低浓度组(1/61)(P<0.01)。随访观察12个月,随访率98%;抗β2 GPI抗体高浓度组有4例发生MACEs,发生率36.4%,显著高于中浓度组(4.2%)和低浓度组(3.5%)。多因素回归分析提示抗β2GPI抗体高浓度是预测ACS发生MACEs的独立危险因素之一。结论:抗β2 GPI抗体浓度与ACS患者疾病的严重程度及MACEs密切相关,抗β2 GPI抗体高浓度是ACS再发MACEs的独立危险因素之一。

oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物促进A7r5细胞趋化和迁移及脂质累积

目的探讨氧化型低密度脂蛋白/β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体(oxLDL/β2GPI/β2GPI-Ab)复合物对A7r5大鼠胸主动脉平滑肌细胞迁移、趋化和脂质累积的影响,以及Toll样受体4(TLR4)在其中的作用。方法体外传代细胞株,分别以oxLDL、oxLDL/β2GPI复合物、β2GPI、抗β2GPI抗体、β2GPI/β2GPI-Ab复合物、oxLDL/β2GPI/β2GPI-Ab复合物刺激经TLR4阻断剂TAK-242预处理和未经预处理的A7r5细胞。提取细胞总RNA,实时荧光定量PCR检测单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、乙酰辅酶A乙酰基转移酶1(ACAT1)的mRNA水平;收集培养上清,ELISA检测细胞上清液中MCP-1、MMP-9的蛋白水平;划痕实验观察A7r5细胞的迁移。以oxLDL、oxLDL/β2GPI/β2GPI-Ab复合物刺激经TAK-242预处理和未经处理的A7r5细胞,用胆固醇试剂盒检测细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)含量并计算胆固醇酯(CE)的含量。结果oxLDL/β2GPI/β2GPI-Ab复合物促进A7r5细胞的迁移,加速胞内胆固醇的累积,促进MCP-1、MMP-9、ACAT1的表达,而TLR4阻断剂TAK-242能够抑制上述现象。结论 oxLDL/β2GPI/β2GPI-Ab复合物能经TLR4依赖的方式促进A7r5细胞趋化、迁移和脂质累积,参与动脉粥样硬化进程。

oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物促进脐静脉内皮细胞迁移及炎症因子表达

目的探讨氧化型低密度脂蛋白/β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体(oxLDL/β2GPI/β2GPI antibody)复合物促进人脐静脉内皮细胞(HUVEC)迁移和炎症因子的表达以及与Toll样受体4(TLR4)的关系。方法 oxLDL、oxLDL/β2GPI复合物、oxLDL/抗β2GPI抗体复合物、oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物、脂多糖(LPS)等刺激物处理HUVEC,采用划痕实验观察HUVEC的迁移能力;根据实验分组,收集HUVEC的总蛋白和总RNA,实时荧光定量PCR和Western blot法检测TLR4的mRNA和蛋白表达。利用上述刺激物分别刺激经TLR4抑制剂TAK-242预处理和未经处理的HUVEC,实时定量PCR检测单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6的mRNA水平,ELISA检测细胞上清液中MCP-1、IL-1β、IL-6的蛋白水平。结果 oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物加速HUVEC迁移和诱导TLR4表达,oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物促进MCP-1、IL-1β、IL-6三种因子的mRNA和蛋白表达,TAK-242能够显著抑制该现象。结论 oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物促进HUVEC迁移和相关炎症因子的表达,该过程与TLR4密切相关。

β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对人绒毛膜细胞株JEG-3表达黏附分子及趋化因子的影响

目的:探讨β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体(β2GPI/抗β2GPI抗体)复合物对人绒毛膜细胞株JEG-3表达黏附分子及趋化因子的影响,分析TLR4-MyD88信号通路在其中的作用。方法:将JEG-3细胞分组刺激:抗β2GPI抗体(100μg/ml)组,β2GPI(100μg/ml)/抗β2GPI抗体(100μg/ml)复合物组,同行对照抗体(RIgG,100μg/ml)组,无血清培养基(Media)组,β2GPI(100μg/ml)组,牛血清白蛋白组(BSA,100μg/ml)。应用RT-qPCR和Western blot及ELISA检测刺激后细胞间黏附分子VCAM-1和ICAM-1以及趋化因子IL-8在mRNA和蛋白水平上的表达;RT-qPCR和Western blot检测TLR4和MyD88在mRNA和蛋白水平上的表达;应用TLR4阻断剂TAK-242预处理的方式,进一步探讨TLR4在β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对JEG-3黏附分子及趋化因子表达的影响。结果:β2GPI(100μg/ml)/抗β2GPI抗体(100μg/ml)复合物组相对于Media组能够显著提高JEG-3的VCAM-1、ICAM-1和IL-8表达,同时诱导TLR4-MyD88的表达,两组之间差异有统计学意义(P<0.01);TAK-242(5μmol/L)能够明显抑制该过程;抗β2GPI抗体(100μg/ml)单独组也能诱导TLR4-MyD88的表达。结论:β2GPI/抗β2GPI抗体复合物能够增强人绒毛膜细胞株JEG-3的黏附分子及趋化因子表达,TLR4/MyD88信号通路在其中发挥重要作用。

oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物通过激活AKT通路抑制小鼠RAW264.7细胞自噬

目的探讨氧化低密度脂蛋白/β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体(oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体)复合物对RAW264.7小鼠巨噬细胞自噬的影响及机制。方法分别用培养基、oxLDL、oxLDL/β2GPI复合物、oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物、oxLDL/抗β2GPI抗体复合物和β2GPI/抗β2GPI抗体复合物处理RAW264.7细胞。采用Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、P62的蛋白水平,采用携带双荧光蛋白和LC3基因的腺病毒(mRFP-GFP-LC3)感染巨噬细胞检测自噬体形成以及自噬流情况,采用蛋白激酶B(AKT)通路抑制剂LY294002(50μmol/L)预处理,观察AKT通路在oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物介导的RAW264.7细胞自噬中的作用。结果oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物能够降低LC3Ⅱ蛋白水平,减少自噬体数量,增加P62蛋白水平,阻断自噬流;LY294002预处理可部分恢复细胞自噬水平,改善自噬流阻断情况。结论oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物可以通过激活AKT通路抑制RAW264.7细胞的自噬。

不孕患者抗β2-GPI、A-TPO、AsAb和EMAb水平及因素

目的:探究不孕患者免疫抗体检出及相关影响因素。方法:收集2018年1月-2018年10月本院就诊的不孕女性患者61例为不孕组,61例正常生育史健康女性为对照组;分析两组抗β2糖蛋白I抗体(β2-GPI)、抗甲状腺过氧化物酶抗体(A-TPO)、抗精子抗体(AsAb)和抗子宫内膜抗体(EMAb)检出率以及影响因素。结果:在61例不孕组中,原发不孕18例(29.5%),继发不孕43例(70.5%);抗体阳性检出率不孕组β2-GPI(24.6%)、A-TPO(19.7%)、AsAb(23.0%)、EMAb(29.5%)均高于对照组(P<0.05),而原发不孕患者β2-GPI(16.4%)、AsAb(14.8%)、EMAb(19.7%)阳性检出率高于继发不孕患者(P<0.05),A-TPO阳性检出率原发与继发组比较无差异。不孕组发生排卵障碍41.0%、免疫因素29.5%、盆腔炎21.3%、输卵管病变19.7%,经logistic回归分析,上述4种病因均是女性不孕的主要危险因素。结论:女性不孕与体内抗β2-GPI、A-TPO、AsAb和EMAb抗体关系密切,对免疫性不孕病因诊断具有重要临床意义,排卵障碍、免疫因素、盆腔炎与输卵管病变是导致不孕的主要因素,临床应加以重视。