β_3肾上腺素受体自身抗体在扩张型心肌病患者中的检测及临床意义

[目的]检测扩张型心肌病(CDM)患者血清中β3肾上腺素受体(β3AR)自身抗体,并分析其类型和可能的医学意义。[方法]以合成的人β3AR细胞外第一、二、三环肽段作为抗原,应用酶联免疫吸附实验,检测临床甄选的60例CDM患者及103例正常对照者血清中β3AR自身抗体。[结果]DCM患者血清中β3AR细胞外第一环和第二环的IgG类自身抗体阳性率(30.0%和41.7%)及抗体水平(0.46±0.08和1.17±0.17)均显著高于正常对照者,且与心功能有关;β3AR细胞外第二环IgM类自身抗体阳性率(50.0%)也显著高于正常人,但与心功能无关。β3AR细胞外第二环的自身抗体水平明显高于第一环和第三环的自身抗体。而IgG类自身抗体水平明显高于IgM类。[结论]β3AR自身抗体,尤其是β3AR细胞外第二环的IgG类自身抗体可能作为重要的功能性抗体,参与DCM的病理生理过程。

不同原发疾病所致心衰患者中β_3肾上腺素受体自身抗体的检测意义

目的检测不同原发疾病所致心衰患者血清中的β_3肾上腺素受体自身抗体(β_3-AAB)的类别,并分析其可能的医学意义。方法以合成的β_3肾上腺素受体细胞外第二环肽段作为抗原,应用酶联免疫吸附实验,检测临床甄选的160例扩心病、冠心病、高心病和风心病所致心衰病患者及100例健康正常对照者血清中IgG和IgM类β_3-AAB的阳性率及抗体水平,并分析它们对患者心功能的影响。结果部分心衰患者和正常对照血清中存在Igc和/或IgM类β_3-AAB。扩心病所致心衰患者血清中,IgG类β_3-AAB的阳性率和抗体水平均显著高于正常对照(40.0% vs 8.0%,P<0.01和1.18±0.29 vs 0.92±0.20,P<0.05);IgM类β_3-AAB阳性率也显著高于正常人(53.3% vs 12.0%,P<0.01),但其抗体水平与正常对照相比差异无统计学意义(0.52±0.08 vs 0.52±0.09,P>0.05)。冠心病所致心衰患者血清中,IgG类β_3-AAB阳性率也显著高于正常人(25.6% vs 8.0%,P<0.01),但其抗体水平与正常对照相比差异无统计学意义(1.02±0.17 vs 0.92±0.20,P>0.05)。而高心病和风心病所致心衰患者血清中,IgG类β_3-AAB的阳性率(20.0%和30.0%)和抗体水平(0.96±0.11和0.96±0.19)以及IsM类β_3- AAB的阳性率(16.7%和20.0%)和抗体水平(0.51±0.05和0.48±0.04)与相应正常对照比较,差异无统计学意义(P>0.05)。正常对照Igc类β_3-AAB水平明显高于IgM类(0.92±0.20 vs 0.52±0.09,P<0.01),各心衰组有相同的规律。IgG类β_3-AAB对心衰患者左室射血分数有显著影响(F=6.178,P=0.014),进一步分析发现,扩心病患者Igc类β_3-AAB阳性者心脏左室射血分数明显高于阴性者(25.1±2.9 vs 15.5±1.6,P<0.01)。结论IgG类β_3-AAB可能是重要的功能性抗体,主要参与扩心病患者心衰的病理生理过程。

心力衰竭发展过程中β_3肾上腺素受体自身抗体的产生及意义

目的为加深对心力衰竭自身免疫机制的理解,研究了在心力衰竭发生发展过程中β3肾上腺素受体(β3AR)自身抗体的产生及其意义。方法采用腹主动脉缩窄法制备心力衰竭大鼠模型,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测大鼠血清中针对β3AR细胞外第2环的自身抗体,并观察了其生物效应。结果①实施腹主动脉缩窄术4周后,心力衰竭模型组大鼠心脏质量与体质量的比值明显增加,8周后心功能各项指标显著降低,并随时间进一步加重,光镜下显示心肌呈多灶性变性病变,发生严重胶原纤维化,胶原容积分数显著增加,表明心力衰竭模型制备成功;②心力衰竭模型大鼠血清中β3AR自身抗体水平(吸光度值)在术后4周即明显升高,至8周时达峰值,保持至12周后,该抗体水平又开始下降。这表明在心力衰竭发展过程中,机体可产生β3AR自身抗体,并呈现产生、维持和自然消退的自我消长变化规律;③β3AR自身抗体对乳鼠心肌细胞跳动频率有明显的抑制效应,该效应可被非特异性βAR拮抗剂bupranolol所阻断,但不能被特异性β1AR和β2AR拮抗剂nadolol所阻断,说明该负性变时效应主要是通过β3AR介导的。结论在心力衰竭过程中产生的β3AR自身抗体可能对心力衰竭的发展有重要的病理生理作用。

儿童心衰患者血清抗β_3肾上腺素受体自身抗体对乳鼠心肌细胞跳动频率的影响

目的观察儿童心力衰竭患者血清中抗β3肾上腺素受体(β3AR)自身抗体对乳鼠心肌细胞跳动频率的影响。方法①以人β3AR细胞外第二环176-202氨基酸残基序列的合成肽段作为抗原,采用ELISA筛选正常儿童和心衰儿童血清中抗β3AR自身抗体。用亲和纯化法提纯抗β3AR自身抗体阳性血清中的IgG。②设立β3AR激动剂BRL37344、β3AR自身抗体阳性血清IgG、β3AR自身抗体阳性血清IgG+β1AR、β2AR阻断剂Nadolol、β3AR自身抗体阳性血清+非特异性βAR阻断剂Bupranolol、β3AR自身抗体阳性血清+β3AR抗原、阴性对照IgG以及空白对照各组观察该抗体对乳鼠心肌细胞跳动频率的影响。结果①心衰儿童血清中抗β3AR自身抗体的阳性率为30%(15/50),明显高于正常同质儿童的12%(6/50,P<0·05);②该抗体可以使培养的乳鼠心肌细胞跳动频率下降[由(128.0±10.86)次/min下降为(64.7±8.72)次/min,P<0·01];③该作用不能被β1、β2受体阻断剂Nadolol阻断,但可被非特异性β受体阻断剂Bupranolol或β3AR细胞外第二环抗原肽段阻断;④该抗体的负性变时效应在观察时间内(6h)无衰减。结论儿童心衰患者血清中含有较高滴度的抗β3AR自身抗体并具有负性变时效应,且该抗体的负性变时效应具有不脱敏现象。

β1及β3肾上腺素受体自身抗体在缺血性心肌病心衰中的临床研究

目的 观察β1及β3肾上腺素受体自身抗体（β1-AA及β3-AA）在缺血性心肌病心衰不同时期的分布特点,探讨琥珀酸美托洛尔缓释片对不同抗体分布特点患者的疗效.方法 选择缺血性心肌病患者60例为心力衰竭组,健康对照组50例.分别于入院即刻测定两组血浆中β1-AA、β3-AA、氮末端脑钠肽前体（NT-proBNP）水平,入院后24 h内行心脏超声检查,测量左心室舒张末期内径（LVIDd）和左心室射血分数（LVEF）.心力衰竭组在琥珀酸美托洛尔缓释片治疗后7d、3个月再次测量血浆中β1-AA、β3-AA、NT-proBNP水平及LVIDd和LVEF等值;出院后1年随访其是否发生心血管事件（包括急性心力衰竭、恶性心律失常、死亡等）.结果 心衰组β1-AA/β3-AA值小于对照组[（1.53±0.33）ng/L比（1.76±0.68）ng/L,P＜0.05].心功能Ⅳ级的缺血性心肌病急性发作期患者β1-AA/β3-AA较心功能Ⅲ级患者低[（1.51±0.43）ng/L比（1.55±0.23）ng/L,P＜0.05）.随着心功能得到改善,β1-AA、β3-AA均有所下降,且二者比值短期内升高,后又有下降趋势（P＜0.05）.出院后1年时间内,与未发生心血管事件的患者相比,发生心血管事件患者的后期β1-AA/β3-AA、服用β受体阻滞剂时间/病史均较低（P＜0.01）.用全模型多元Logistic回归分析,后期β1-AA/β3-AA、服用β受体阻滞剂时间/病史为缺血性心肌病患者独立预后指标（P＜0.01）.结论 β1-AA/β3-AA失调与缺血性心肌病心力衰竭之间存在联系,可用于临床指导β受体阻滞剂治疗缺血性心肌病心力衰竭.

抗β3肾上腺素能受体抗体对心力衰竭大鼠模型心功能的保护作用

目的:研究抗β3肾上腺素能受体抗体对心力衰竭大鼠模型心功能的保护作用。方法:选择雄性SD大鼠作为实验动物,采用异丙肾上腺素腹腔注射的方法建立心力衰竭大鼠模型,IgG组给予IgG注射治疗、β3-AA组给予β3-AA注射治疗。检测大鼠血清中β3-AA含量、左心室射血功能和肥厚情况、心肌组织和血清中中左心室重构分子的含量。结果:(1)β3-AA含量:注射β3-AA后10d、20d、30d、40d和50d时,β3-AA组大鼠血清中β3-AA含量均高于IgG组;(2)心功能指标:IgG组大鼠的LVSP、±dp/dtmax均低于Sham组,LVEDP、LVW/BW高于Sham组;β3-AA组大鼠的LVSP、±dp/dtmax均高于IgG组,LVEDP、LVW/BW低于IgG组;(3)心室重构分子:IgG组大鼠血清中血管紧张素Ⅱ、醛固酮的含量以及心肌组织中I型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白、ADMA10、ADAM17的含量高于Sham组;β3-AA组大鼠血清中血管紧张素Ⅱ、醛固酮的含量以及心肌组织中Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白、ADMA10、ADAM17的含量低于IgG组。结论:抗β3肾上腺素能受体抗体能够改善心力衰竭大鼠模型的心室射血功能、减轻心室肥厚和重构,具有明确的心功能保护作用。

免疫大鼠血清中抗β1、β3肾上腺素受体及M2乙酰胆碱受体抗体IgG亚类的分布

目的明确免疫大鼠血清中抗β1、β3肾上腺素受体及M2乙酰胆碱受体抗体的IgG亚类，为进一步研究此类抗体的作用机制提供实验依据。方法以合成的大鼠β1、β3肾上腺素受体和M2乙酰胆碱受体细胞外第二环肽段为抗原分别主动免疫Wistar大鼠，应用免疫球蛋白纯化技术特异性提纯其血清中IgG类抗体，应用BCA进行蛋白定量，调整血清中蛋白量一致，用SA—ELISA法检测抗β1、β3肾上腺素受体和M2乙酰胆碱受体抗体的IgG亚类。结果免疫组中属于IgG2a亚类的抗β1肾上腺素受体抗体的A值为（0．45±0．01），明显高于对照组（0．08±0．003，P〈0．05）；免疫组中属于IgG2b亚类的抗艮肾上腺素受体抗体的A值为（0．59±0．02），显著高于对照组（0．2±0．02，P〈0．05）；免疫组中属于IgG2a亚类的抗M2乙酰胆碱受体抗体的A值为（0．56±0．04），显著高于对照组（0．12±0．01，P〈0．05）。结论免疫大鼠血清中抗β1肾上腺素受体抗体和抗M2乙酰胆碱受体抗体主要属于IgG2a亚类，抗β3肾上腺素受体抗体主要属于IgG2b亚类。

心力衰竭患儿血清β3受体自身抗体水平对离体成鼠心肌细胞的负性变力作用

目的探讨心力衰竭患儿血清抗β3肾上腺素受体(β3AR)自身抗体水平对离体成年大鼠心肌细胞收缩效应的影响。方法采用ELISA筛查心力衰竭和健康儿童血清抗β3AR自身抗体,利用亲和层析法提纯抗β3AR自身抗体阳性血清免疫球蛋白G(IgG);利用动缘探测系统观察提纯的抗β3AR自身抗体阳性IgG对离体成年大鼠心肌细胞收缩效应的影响。结果50例心力衰竭患儿血清抗β3AR自身抗体的阳性率和平均几何滴度为分别30%(15/50例)和1∶(48.32±2.58),明显高于健康儿童[12%(6/50例),P<0.05;1∶(13.72±1.49),P<0.001];与对照组比较,该抗体可降低成年大鼠心肌细胞最大收缩幅度/初长度(3.86±0.31)%、最大收缩速率[(-0.47±0.07)μm/s]和最大舒张速率[(0.17±0.02)μm/s](Pa<0.001)。该作用不能被纳多洛尔阻断,但可被布拉洛尔或β3AR细胞外第二环合成抗原阻断。结论心力衰竭患儿血清抗β3AR细胞外第二环自身抗体的阳性率和平均几何滴度均明显高于健康儿童,且该自身抗体具有类似β3AR激动剂样负性变力效应。

抗β肾上腺素能药物单克隆抗体的分子解剖学

本文为巴斯德研究院生物工程研究所Johan Hoebeke教授应邀为本刊撰写的专题综述。Hoebeke教授是国际上研究β肾上腺素能受体的权威领头人。本文总结了他十年间的研究成果。作者介绍了用一株抗β肾上腺素能受体单克隆抗体对β肾上腺素能受体进行分子解剖学研究的系列结果。值得注意的是作者发现抗独特型抗体的作用不像Jerne等人所描述的那样是起“分子模拟”作用,抗独特型抗体/独特型抗体或配体/β肾上腺素能受体之间的相互作用首先要发生一种“构像诱导”效应。这为研究抗独特型抗体和药物的分子作用机制开辟了新的方向。

血清诱骗受体3γ-干扰素和抗环瓜氨酸肽抗体在风湿性关节炎患者中的表达及意义

目的:探讨血清诱骗受体3、γ-干扰素、抗环瓜氨酸肽抗体在风湿性关节炎患者中的表达及意义。方法:选择2017年2月至2017年12月我院接诊的70例风湿性关节炎患者作为观察组,并选择我院同期接受健康体检的65例健康受试者作为对照组,采集所有受试者入组后第2天清晨空腹静脉血,检测血清诱骗受体3、γ-干扰素、抗环瓜氨酸肽抗体的表达,分析血清诱骗受体3、γ-干扰素、抗环瓜氨酸肽抗体在风湿性关节炎患者中的变化及意义。结果:观察组血清诱骗受体3、γ-干扰素、抗环瓜氨酸肽抗体分别为(4631.05±3180.24) pg/m L、(1341.23±482.94) pg/m L、(86.51±6.38) U/m L,对照组分别为(481.53±150.07) pg/m L、(248.79±62.63) pg/m L、(45.41±8.35) U/m L,差异具有统计学意义(P <0.05);通过Pearson相关性分析显示,血清诱骗受体3、γ-干扰素和抗环瓜氨酸肽抗体水平呈正相关(r=0.658、0.744,P <0.05)。结论:风湿性关节炎患者中血清诱骗受体3、γ-干扰素、抗环瓜氨酸肽抗体均明显升高,且血清诱骗受体3、γ-干扰素和抗环瓜氨酸肽抗体水平均呈正相关,可辅助诊断风湿性关节炎。

心衰大鼠β_3AR自身抗体的产生与心肌重塑的关系

目的分析心力衰竭大鼠β3AR自身抗体的产生与心肌重塑的相关特点,并探讨其意义。方法采用10周龄纯种健康雄性Wistar大鼠随机分为2组:①心衰模型组(HF组):实施腹主动脉缩窄术;②伪手术对照组(sham组):仅分离腹主动脉而不结扎缩窄。手术处理前及处理后4周、8周、12周和16周时应用ELISA技术检测大鼠血清中β3AR自身抗体的含量,Western blot技术测定心肌β3AR的含量。结果①HF组大鼠在腹主动脉缩窄术处理后8周心功能明显下降,出现心肌重塑,心衰模型成功建立。②手术处理后8周、12周及16周,HF组大鼠心肌β3AR含量较同期sham组明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。③与同期sham组相比,HF组大鼠血清中β3AR自身抗体水平(OD值)在术后4周即明显升高(P<0.05),至8周时达峰值(P<0.01),并保持至12周(P<0.05);术后16周该抗体水平下降,与sham组无明显差异(P>0.05)。结论心肌重塑可能是心衰发病过程中促进β3AR自身抗体产生的因素之一。

抗乙酰胆碱3受体抗体与原发性干燥综合征相关性研究

目的探讨抗毒蕈碱3型乙酰胆碱受体抗体(a-M3R)在原发性干燥综合征(p SS)中的临床意义。方法通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测p SS组(42例)和疾病对照组(系统性红斑狼疮及类风湿关节炎患者18例)、健康对照组(20例)的抗M3R抗体阳性率;并将p SS组分为抗M3R抗体阳性组和阴性组,分析p SS组中抗M3R抗体阳性患者与阴性患者在临床及免疫学等指标间的差异与关系。结果抗M3R抗体在p SS患者中的阳性率为71.43%,疾病对照组的阳性率为16.67%,健康对照组的阳性率为15.00%,p SS患者阳性率高于疾病对照组和健康对照组(P<0.05)。p SS组抗M3R抗体阳性患者Ig G、Ig A、RF值及抗SSB抗体阳性例数较阴性患者明显增高。随着唇腺病理分级增高,抗M3R OD值随之升高。p SS抗M3R阳性患者血液系统受累较阴性患者明显升高。结论抗M3R抗体对p SS有一定的辅助诊断价值;抗M3R抗体阳性的p SS患者易合并血液系统病变,唇腺组织机构破坏较重。

心力衰竭患者抗β_3肾上腺素能受体自身抗体的分布及特性

目的探讨心力衰竭(心衰)患者血清中的抗β3肾上腺素能受体(β3-AR)自身抗体的生物学效应,为临床治疗心衰提供新的思路和线索。方法(1)以人β3-AR细胞外第二环的合成肽段作为抗原,采用ELISA筛选正常人和心衰患者血清中抗β3-AR自身抗体。(2)提纯该抗体阳性的患者血清中的IgG。(3)设立各组对照观察该抗体对成年大鼠心肌细胞收缩效应的影响。(4)设立各组对照观察该抗体对乳鼠心肌细胞跳动频率的影响。结果(1)正常人抗β3-AR自身抗体的阳性率为11.0%,平均滴度为1∶14.59±1.61;心衰患者抗β3-AR自身抗体的阳性率为26.7%,平均滴度为1∶43.27±2.71;与正常人相比,P<0.05。(2)与空白对照组相比,该抗体可降低成年大鼠心肌细胞收缩幅度/初长度(3.84%±0.33%)、收缩速率(-0.47μm/s±0.07μm/s)和舒张速率(0.17μm/s±0.02μm/s),P<0.05。该作用不能被纳多洛尔(nadolol,β1-AR和β2-AR受体拮抗剂)阻断,但可被布拉洛尔(bupranolol,非特异性β受体拮抗剂)或β3抗原阻断。(3)与空白对照组(94.3次/min±10.7次/min)相比,该抗体可降低乳鼠心肌细胞跳动频率(47.1次/min±8.11次/min),P<0.05。同样该作用不能被纳多洛尔阻断,但可被布拉洛尔或β3抗原阻断。此外,该抗体的负性变时效应在观察时间内(6h)无衰减。结论心衰患者血清中含有较高滴度的抗β3-AR自身抗体并具有负性变力和变时效应,提示该抗体可能参与心衰的病理生理机制。

抗人卵巢癌/抗人CD3单链双特异性抗体介导的αβT细胞CDR3谱系漂移

目的探讨抗人卵巢癌/抗人CD3单链双特异性抗体(BHL-1)介导的αβT细胞CDR3谱系漂移,为双特异性抗体介导的T细胞免疫应答机制提供理论基础。方法采用免疫扫描谱型分析技术,分析6例正常献血员T细胞在人卵巢癌SKOV3细胞联合BHL-1刺激前后的TCR库多样性变化(CDR3谱型分布特征)及刺激后T细胞TCRα、β链CDR3优势利用情况,对克隆性增生T细胞的CDR3区进行序列分析。结果刺激前6例正常献血员TCR CDR3谱型均呈高斯分布,刺激后发生CDR3谱系漂移,部分TCR Vα、Vβ家族出现优势增生,明确了BHL-1介导下单克隆增生T细胞的α、β链CDR3序列。结论 SKOV3联合BHL-1诱导的T细胞CDR3谱系出现明显漂移,提示CDR3的选择性表达可能与BHL-1介导的特异性T细胞免疫反应有关,特异应答T细胞TCR CDR3序列的确定,将为卵巢癌的T细胞免疫治疗提供基础。

抗KDR3单克隆抗体的制备和生物活性的鉴定

目的:制备抗KDR3单克隆抗体,研究其阻断VEGF受体的作用。方法:将抗KDR3单克隆抗体腹水,采用ELISA酶免疫分析方法,测定其效价,提取ECV304细胞膜蛋白用Westernblot方法进行识别抗原的鉴定,并测定抗KDR3单克隆抗体的活性。结果:获得一株稳定分泌抗KDR3的杂交瘤细胞株,所产生抗体可阻断VEGF对人脐静脉内皮细胞系ECV304的刺激增生作用。结论:抗KDR中和抗体IMC-ICI和抗KDR3单克隆抗体同样对ECV304细胞都表现出对外源性VEGF有明显抑制作用,而且对内源性VEGF也有明显抑制作用。抗KDR3单克隆抗体在肿瘤治疗的过程中将起一定的作用。

抗β1肾上腺素受体自身抗体在高血压并左室舒张功能不全中的临床研究

目的探讨抗β1肾上腺素受体自身抗体(β1-AR-Ab)在高血压并左室舒张功能不全中的表达及临床意义。方法选取2018年4月~2018年12月就诊的原发性高血压患者及体检健康者作为研究对象,入院后行超声心动图检查,将原发性高血压合并左心室舒张功能不全并左房扩大的49例患者作为研究组,95例体检健康者作为对照组;比较2组左心室射血分数(LVEF)、左心室后壁厚度(LVPW)、室间隔厚度(IVS)、左心室舒张末期内径(LVEDd)、左心房舒张末期内径(LAEDd)、二尖瓣口舒张早期血流峰速/二尖瓣口舒张晚期血流峰速值(E/A比值)、二尖瓣口舒张早期血流峰速/二尖瓣环舒张早期运动速度值(E/e'比值)、血清β1-AR-Ab(OD值);比较2组血清β1-AR-Ab阳性(OD值>2.1)发生率,比较2组间血清β1-AR-Ab的OD值水平;计算2组E/A比值及E/e'比值,采用Logistic多元回归分析进行血清β1-AR-Ab水平与年龄、性别、血压、心率的相关性分析,利用ROC曲线评估血清β1-AR-Ab水平对高血压伴左室舒张功能不全的预测价值。结果经检测,研究组血清β1-AR-Ab阳性率显著高于对照组(P<0.05);研究组血清β1-AR-Ab水平(OD值)显著高于对照组(P<0.001);经Logistic多因素回归分析结果显示,血清β1-AR-Ab水平与年龄、性别、血压等因素无显著相关性;以E/A及E/e'比值为金标准,分析血清β1-AR-Ab水平对高血压患者左室舒张功能不全的预测价值:敏感度69.4%,特异度81.1%,AUC=0.788,与Az=0.5相比,差异有统计学意义(P<0.001)。结论血清β1-AR-Ab水平在高血压并左室舒张功能不全患者中明显升高,敏感性及特异性较高,对该类患者具有很好的临床预测价值。

正常与心力衰竭大鼠心脏抗β_1受体自身抗体生物效应的比较研究

目的 :对比观察正常与病理性心脏 β1 受体自身抗体的生物效应。方法 :分级盐析法结合离子交换层析法分离提纯正常无抗体组、β1 受体生理性抗体组及 β1 受体病理性抗体组大鼠血清中的 Ig G,应用乳鼠心肌细胞培养技术及放射免疫分析方法 ,观察各组自身抗体及 β1 受体单克隆抗体对培养乳鼠心肌细胞跳动频率和大鼠心室肌细胞c AMP产生量的影响。结果 :在正常大鼠血清中 ,抗 β1 受体自身抗体的阳性率与抗体滴度均显著低于病理性抗体组大鼠阳性血清的阳性率和抗体滴度。生理性抗体、病理性抗体和单克隆抗体均表现出激动剂样生物学效应 ,且具有浓度依赖性。但是 ,在相近抗体浓度条件下 ,生理性抗体对心率和 c

抗人CD3单链抗体四聚体基因在HeLa细胞中的表达和活性鉴定

目的 将抗人CD3单链抗体 (scFv) /人 p5 3四聚功能域融合基因转染到HeLa细胞 ,进行真核表达和活性测定。方法 将抗人CD3scFv /人 p5 3四聚功能域融合基因克隆入真核分泌表达载体 pSecTag2 B中 ,转染HeLa细胞进行表达 ,表达产物纯化后利用流式细胞仪进行活性测定。结果 表达产物经SDS PAGE和Westernblot证实 ,为Mr约35 0 0 0的特异蛋白条带。纯化后经流式细胞仪检测 ,可特异性地结合人外周血单个核细胞 (PBMCs) ,亲和力高于scFv。结论 获得了可与PBMCs特异性结合的抗人CD3scFv四聚体 。