重组Ⅰ型人源化胶原蛋白“福活因子”的生物合成及其结构表征研究

目的:筛选获得含胶原蛋白保守序列hCol.1基因的重组人源化Ⅰ型胶原蛋白高效表达基因工程菌和高产创新融合蛋白,并通过检测其理化特征验证表达产物。方法:将His6-SUMO-hCol.1重组基因大肠杆菌高密度发酵后经镍亲和层析和离子交换层析两步纯化浓缩获得重组蛋白,检测理化测试特征。结果:测序证明克隆基因与hCol.1序列高度一致,Blast比对蛋白序列与人Ⅰ型胶原蛋白高度同源,折叠结构与人Ⅲ型胶原蛋白高度类似。表观分子量55~60kD,产量36.4mg/L,纯度>95%。等电点检测、氨基酸组成和圆二色谱等实验结合高级结构预测分析,证明其理化性状与蛋白结构符合胶原蛋白特征。结论:成功将人Ⅰ型胶原蛋白保守功能结构域hCol.1与SUMO等肽段重组融合表达并命名为福活因子(FHTFF),筛选出基因工程菌pET21a(+)-FHTFF/BL21,纯化产物“福活因子”的理化特性、序列和结构与人Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白肽段高度相似,属于重组人源化胶原蛋白新生物材料。

透明质酸联合注射血小板血浆及A型肉毒毒素对猪真皮Ⅰ型胶原蛋白表达的影响

目的探讨透明质酸联合A型肉毒毒素(botulinum toxin type-A,Botox A)和富含血小板血浆(platelet rich plasma,PRP)进行猪真皮内注射,检测真皮层成纤维细胞数目及Ⅰ型胶原蛋白mRNA分泌代谢的变化。方法采用巴马猪建立动物模型,使用交联透明质酸(cross-linked hyaluronic acid,HA)和非交联透明质酸(non-cross-linked hyaluronic acid,N-HA)分别与Botox A、PRP联合作为实验组(HA组、HA+Botox A组、HA+PRP组、N-HA组、N-HA+Botox A组、N-HA+PRP组),并与生理盐水组和正常组比较。于注射第1和4周后,通过组织切片染色、实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)等方法,定性定量观察、比较真皮层成纤维细胞数量变化,真皮层Ⅰ型胶原蛋白mRNA分泌表达变化。结果HA组的成纤维细胞数量、Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达量在第1周和第4周时比N-HA组高,并且HA+PRP组的成纤维细胞数量、Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达水平显著高于同期HA+Botox A组、生理盐水组和正常组(P<0.05)。结论应用HA与PRP联合注射更易促进成纤维细胞的增殖和Ⅰ型胶原蛋白mRNA的表达,其主要机制可能是通过改变细胞外基质的理化性质进而促进真皮层细胞因子的合成,从而影响胶原合成。

抗TGF-β2抗体对滤过泡瘢痕成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响

目的观察抗转化生长因子-β2(TGF-β2)抗体对体外培养的滤过泡成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响。方法利用手术修复人眼小梁切除术后失败滤过泡修复时切除下来的瘢痕组织进行组织块培养,获得成纤维细胞(FB)。将0、0.01、0.1、1μg/mL抗TGF-β2抗体作用于FB24h以及0.14μg/mL(半数抑制率质量浓度,IC50)抗体作用0、24、48、72h,通过生物化学显色法、RT-PCR法检测抗TGF-β2抗体对成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达量。结果在FB中加入0、0.01、0.1、1μg/mL抗TGF-β2抗体作用24h及IC50质量浓度处理0、24、48、72h,结果显示随着抗TGF-β2抗体质量浓度增加及作用时间延长,Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达依次减少,羟脯氨酸(HPr)及胶原含量逐渐降低(P<0.05)。结论抗TGF-β2抗体能减少Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达及合成。

抗肝纤冲剂对肝纤维化小鼠Ⅰ型胶原蛋白表达的影响

目的:探讨抗肝纤冲剂对猪血清所致的免疫损伤肝纤维化小鼠肝组织Ⅰ型胶原(ColⅠ)蛋白表达的影响,阐明抗肝纤冲剂对肝纤维化小鼠的治疗作用。方法:将75只雌性Balb/c小鼠分为5组,每组15只:正常对照组,肝纤维化模型组,秋水仙碱组,抗肝纤冲剂低剂量组,抗肝纤冲剂高剂量组。除正常对照组外,其余各组均采用腹腔注射猪血清的方法制备肝纤维化小鼠模型。造模的同时分别用药物对小鼠进行干预治疗7周。7周末处死小鼠,取肝组织,经固定、切片、HE染色,光镜下观察。其他肝组织用于实时定量PCR和Western blotting检测。结果:肝组织病理学结果显示,抗肝冲剂治疗组与模型组比较,肝组织的炎症减轻;抗肝纤冲剂低剂量组与肝纤维化模型组比较,肝组织中的ColⅠa2在mRNA表达水平显著降低(P<0.01);Western blotting检测结果显示,抗肝纤冲剂高剂量组的肝组织中ColⅠa1的表达也显著减少。结论:抗肝纤冲剂可以显著减少免疫损伤肝纤维化小鼠肝组织ColⅠ的表达,提示抗肝纤冲剂对肝纤维化小鼠的具有较明显的治疗作用。

心脏瓣膜置换术后患者的血清Ⅰ型胶原蛋白多肽、环氧合酶-2表达及其与预后的相关性

目的探讨心脏瓣膜置换术后患者血清Ⅰ型胶原蛋白多肽(procollagen type Ⅰ polypeptide,PICP)、环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达及其与患者预后的相关性。方法收集2015年12月至2018年12月期间在广西壮族自治区南溪山医院接受心脏瓣膜置换术的患者为研究对象(100例)。分别于术前、术后1 d、术后1周、术后2周,采用生化分析仪检测患者血清天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、α羟丁酸脱氢酶(α-hydroxybutyrate dehydrogenase,α-HBD)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzymes,CK-MB)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、肌酸激酶(creatine kinase,CK)浓度;采用超声心动图诊断仪测量心功能指标:左心室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、左心室缩短分数(left ventricular fractional shortening,LVFS);酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清PICP、COX-2浓度。采用Pearson法分析血清PICP、COX-2浓度与各指标之间的相关性。根据随访情况将患者分为预后良好组和预后不良组,采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析术后2周血清PICP、COX-2浓度对患者预后的预测价值。结果与术前比较,术后1 d患者血清PICP、COX-2、CK、CK-MB、LDH、α-HBD、AST浓度显著升高,LVEF、LVFS浓度显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与术后1 d相比,术后1周、术后2周患者的PICP、COX-2、CK、CK-MB、LDH、α-HBD、AST浓度显著降低,且术后2周显著低于术后1周,LVEF、LVFS显著上升,且术后2周高于术后1周,差异有统计学意义(P<0.05)。患者血清PICP、COX-2浓度均与CK、CK-MB、LDH、α-HBD、AST浓度呈正相关,与LVEF、LVFS呈负相关(P<0.05),且PICP、COX-2二者呈正相关(r=0.489,P<0.05)。预后不良组患者术后2周血清PICP、COX-2浓度均明显高于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清PICP、COX-2浓度以及二者联合预测患者预后的曲线下面积(AUC)分别为0.791、0.717、0.855,敏感度分别为80.36%、55.36%、83.93%,特异度分别为75.00%、86.36%、72.73%。结论心脏瓣膜置换术后患者血清PICP、COX-2浓度显著高于术前,但随术后随时间延长逐渐下降,与患者心功能指标和心肌酶谱具有相关性,有望成为判断患者预后的血清学指标。

糖尿病合并骨折患者糖化血红蛋白Ⅰ型前胶原N端前肽与骨密度的相关性分析

目的探究糖尿病合并骨折患者糖化血红蛋白(HbA_(1)c)、Ⅰ型前胶原N端前肽(PINP)与骨密度的相关性。方法选取我院于2020年4月至2022年7月收治的2型糖尿病合并骨折患者60例,按骨密度将患者分为3组:骨量正常组(n=17)、骨量减少组(n=25)、骨质疏松组(n=18)。同期测定3组患者的一般资料和HbA_(1)c、PINP水平,对上述指标进行组间比较并进行相关性分析。结果3组患者的一般资料相比,差异无统计学意义(P>0.05);HbA_(1)c、PINP的比较,骨量减少组显著高于骨量正常组(P<0.05),骨质疏松组显著高于骨量减少组及骨量正常组(P<0.05);HbA_(1)c、PINP水平与骨密度呈负相关关系(P<0.05),骨密度越低,HbA_(1)c、PINP水平越高。结论HbA_(1)c、PINP水平对患者病情有重要的提示作用。

抗纤复方含药血清对HSC-LI90细胞Ⅰ型、Ⅳ型前胶原和基质金属蛋白酶基因表达的影响

目的:探讨抗纤复方含药血清对肝星形细胞(HSC)L190细胞(HSC-LI90)Ⅰ型、Ⅳ型前胶原和基质金属蛋白酶基因表达的影响。方法:以0.5、2.0、4.0g/kg等不同剂量抗纤复方灌胃,制备大鼠的含药血清,作用HSG-LI90细胞48小时,应用Northem印迹杂交的方法,检测Ⅰ型、Ⅳ型前胶原、基质金属蛋白酶-2及膜型基质金属蛋白酶基因的表达,并用酶图法检测基质金属蛋白酶-2的活性。结果:抗纤复方含药血清能抑制HSC-LI90细胞Ⅰ型、Ⅳ型前胶原、增加模型基质金属蛋白酶基因表达,对基质金属蛋白酶-2基因表达及活性无影响。结论:抗纤复方能下调Ⅰ型、Ⅳ型胶原的合成,增加模型基质金属蛋白酶基因的表达。

萆薢分清颗粒对单侧输尿管梗阻肾纤维化大鼠mTOR、α-SMA、Col-Ⅰ蛋白表达影响研究

目的 观察萆薢分清颗粒对单侧输尿管梗阻大鼠肾纤维化相关蛋白雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)的影响,探讨萆薢分清颗粒的肾脏保护作用。方法 取60只SPF级雄性SD大鼠,从中随机取10只作为空白组,其余50只大鼠采用单侧输尿管梗阻术构建肾纤维化模型。将造模成功大鼠随机分为模型组、氯沙坦组及萆薢分清高、中、低剂量组,每组10只,萆薢分清高、中、低剂量组分别给予13.12 mL/(kg·d)、6.56 mL/(kg·d)、3.28 mL/(kg·d)萆薢分清颗粒溶液灌胃,氯沙坦组给予氯沙坦2.62 mL/(kg·d)灌胃,空白组和模型组给予等量生理盐水灌胃,均1次/d,连续灌胃4周。末次灌胃结束后检测尿白蛋白与尿肌酐的比值(ACR)、24 h尿蛋白量及血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)水平,HE染色、Masson染色观察肾脏病理形态,免疫组化法及Western blot法分别检测大鼠肾脏组织中mTOR、α-SMA、Col-Ⅰ表达情况。结果 与空白组比较,模型组大鼠ACR、24 h尿蛋白量及SCr、BUN水平均明显升高(P均<0.05);肾脏发生明显纤维化病变;肾组织中mTOR、α-SMA、Col-Ⅰ阳性表达平均光密度值和蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05)。与模型组比较,氯沙坦组与萆薢分清高、中剂量组大鼠ACR、24 h尿蛋白量及SCr、BUN水平均明显降低(P均<0.05);肾纤维化病变较轻;肾组织中mTOR、α-SMA、Col-Ⅰ阳性表达平均光密度值和蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05)。结论 萆薢分清颗粒可减轻单侧输尿管梗阻大鼠肾纤维化,保护残存肾功能,机制可能与下调mTOR、α-SMA、Col-Ⅰ表达有关。

腹股沟疝患者腹直肌后鞘Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白含量的初步分析

目的分析腹股沟疝患者腹直肌后鞘Ⅰ、Ⅲ型胶原含量及Ⅰ型/Ⅲ型胶原比例的变化。方法切取104例开腹手术患者腹直肌后鞘组织,其中合并腹股沟疝者16例,应用免疫组织化学方法(SABC法)进行染色,比较Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白含量、胶原总量及Ⅰ型/Ⅲ型胶原蛋白比例在腹股沟疝组和非腹股沟疝组间的差异。结果腹股沟疝组Ⅰ型胶原含量降低,Ⅲ型胶原含量升高,胶原总量升高,Ⅰ型/Ⅲ胶原蛋白比例降低。结论腹股沟疝患者腹直肌后鞘的Ⅰ型/Ⅲ型胶原比例下降,Ⅰ型胶原含量降低,而Ⅲ型胶原含量增高。腹股沟疝可能是系统性胶原代谢紊乱在腹股沟区的局部表现。

隔药灸与电针对克罗恩病大鼠结肠转化生长因子β1和结缔组织生长因子及Ⅰ型胶原和纤维连接蛋白表达的影响

背景:肠壁纤维化是克罗恩病的常见表现。转化生长因子β1是炎症性肠病中控制胶原合成和介导肠纤维化复杂调节机制中的重要生长因子,结缔组织生长因子是转化生长因子β特异性下游效应分子。目的:实验拟观察隔药灸与电针对克罗恩病大鼠结肠转化生长因子β1、结缔组织生长因子、Ⅰ型胶原及纤维连接蛋白表达的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-07/12在上海中医药大学实验动物中心和国家中医药管理局针灸免疫三级实验室、临床免疫三级实验室完成。材料:健康雄性SD大鼠60只,48只用于制备大鼠克罗恩病模型;三硝基苯磺酸由Sigma公司提供。方法:60只大鼠随机数字表法分为5组,模型组:不作任何治疗,作与隔药灸组相同的固定。隔药灸组:取天枢(双)、气海穴,每次每穴灸2壮,每日隔药饼灸1次,连续10d。电针组:取天枢(双)、气海穴,采用LD202H型韩氏神经穴位刺激仪电针刺激,频率2/50Hz,20min/次,1次/d,连续10d。药物组:美沙拉嗪灌胃治疗,2次/d,连续10d。正常组:无任何干预措施,作与隔药灸组相同的固定。主要观察指标:苏木精-伊红染色后光镜下观察结肠病理组织学变化;免疫组织化学方法检测结肠转化生长因子β1、结缔组织生长因子、Ⅰ型胶原及纤维连接蛋白的表达;实时荧光定量聚合酶链反应检测结缔组织生长因子mRNA的表达。结果:纳入SD大鼠60只,每组各取1只用于模型鉴定。模型组4只大鼠死亡,7只进入结果分析;其他4组随机取8只进入结果分析。①苏木精-伊红染色正常组可见正常结肠壁组织,黏膜完好;模型组溃疡形成,黏膜下层可见大量纤维组织增生而明显增宽,肉芽组织增生。隔药灸组、电针组和药物组病理组织学均较模型组改善。②与正常组比较,模型组大鼠Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白、转化生长因子β1、结缔组织生长因子蛋白表达以及结肠结缔组织生长因子mRNA表达均升高(P<0.01)。经治疗后,隔药灸组、电针组大鼠结肠Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白、转化生长因子β1、结缔组织生长因子蛋白表达均降低(P<0.05或P<0.01),但结缔组织生长因子mRNA变化不显著(P均>0.05);隔药灸组对结缔组织生长因子蛋白的下调作用较电针组更显著(P<0.01);药物组Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白、转化生长因子β1蛋白表达也显著降低(P<0.05或P<0.01),但结缔组织生长因子蛋白及mRNA变化不显著(P均>0.05)。结论:隔药灸和电针治疗能够下调克罗恩病大鼠结肠Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白、转化生长因子β1、结缔组织生长因子蛋白表达,隔药灸对结缔组织生长因子蛋白的调节作用优于电针。

祛瘀生肌中药对大鼠正常创面肉芽组织中Ⅰ型胶原和基质金属蛋白酶表达的影响

目的探讨祛瘀生肌中药对大鼠正常创面肉芽组织影响的差异。方法以120只大鼠皮肤全层缺损创面为模型,采用免疫组化和图像分析相结合的方法,观察生肌化瘀方及其拆方生肌方和化瘀方对创面修复不同时期肉芽组织中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase-1,MMP-1)和Ⅰ型胶原变化的影响。结果正常组Ⅰ型胶原表达水平明显延迟,MMP-1水平在创伤后3～11天里呈阶梯式增高;生肌方早期可以促进创面Ⅰ型胶原及MMP-1分泌,从创伤后3～11天一直维持在较高水平;化瘀方组MMP-1表达在前7天保持较高水平,与生肌方组比较差异有显著性(P<0.05),创伤后11天降低,显著低于正常组和生肌方组(P<0.05);生肌化瘀方小剂量组促进Ⅰ型胶原分泌有两个高峰时期,即创伤后7天和15天,与正常组比较差异有显著性(P<0.05);生肌化瘀方大剂量组在11天时MMP-1表达显著降低,明显低于正常组(P<0.05)。结论祛瘀生肌中药对实验性创面新生肉芽组织中Ⅰ型胶原及MMP-1表达的影响,可能是在创面愈合的过程中,通过抑制MMP-1的分泌,从而使创面Ⅰ型胶原的分泌增加,起到促进创面愈合的作用。

枸杞多糖含药血清对MC3T3-E1细胞内Ca^(2+)及Ⅰ型胶原蛋白合成的影响

背景:前期实验发现枸杞多糖对成年去势雌性大鼠骨质疏松有明显的骨质改善作用。目的:观察含枸杞多糖大鼠血清对成骨细胞株MC3T3-E1细胞内Ca2+及Ⅰ型胶原蛋白合成的影响。方法:将20%空白血清(对照组),5%,10%,20%含枸杞多糖血清分别加入成骨细胞株MC3T3-E1细胞培养液中,通过MTT法测定细胞增殖,激光扫描共聚焦显微镜测定胞内游离钙离子浓度,免疫细胞化学方法检测Ⅰ型胶原蛋白表达。结果与结论:与对照组比较,5%,10%含枸杞多糖血清可明显促进成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖(P<0.05,P<0.01);10%,20%含枸杞多糖血清组成骨样细胞株MC3T3-E1内细胞内Ca2+水平及Ⅰ型胶原蛋白合成明显升高(P<0.05,P<0.01)。说明含枸杞多糖血清可能通过影响细胞内Ca2+水平及Ⅰ型胶原蛋白合成防治骨质疏松症。

复元胶囊对大鼠膝骨关节炎软骨Ⅰ、Ⅱ型胶原及蛋白多糖的影响

目的观察复元胶囊对大鼠膝骨关节炎(OA)软骨Ⅰ、Ⅱ型胶原及蛋白多糖的影响,探讨其保护关节软骨的作用机理。方法采用Hulth法建立OA模型,随机分为6组:正常组、模型组、四环素组及复元胶囊低、中、高剂量组。各药物组分别给不同剂量药物灌胃每天1次,持续12周。免疫组化检测软骨Ⅰ、Ⅱ型胶原表达,甲苯胺蓝染色软骨蛋白多糖含量。结果复元胶囊各组软骨Ⅱ型胶原及蛋白多糖显著高于模型组(P<0.01),而Ⅰ型胶原低于模型组(P<0.05)。结论复元胶囊能增加大鼠膝骨关节炎软骨中Ⅱ型胶原表达及蛋白多糖水平,同时降低Ⅰ型胶原表达,对维持正常胶原表型、保护关节软骨有一定的作用。

Ⅰ型胶原蛋白对骨矿化机制的影响

骨质疏松（OP）是以低骨量和骨组织显微结构退变为特征的一种全身性骨骼疾病,伴有骨脆性增加,易于发生骨折。骨强度的问题是引起OP骨折危险性增加重要因素之一,骨强度反映骨骼的两个主要方面是骨矿密度和骨质量。

软骨损伤后Ⅰ、Ⅱ型胶原蛋白的表达

背景:目前Ⅰ型胶原蛋白与骨关节炎间的关系尚未被完全揭示,Ⅰ型胶原蛋白的表达模式亦未知,缺乏相关的研究来探讨上述问题。目的:观察软骨退变过程中Ⅰ型胶原蛋白表达的模式,为进一步研究Ⅰ型胶原蛋白与骨关节炎间的关系提供参考。方法:10只新西兰大白兔,用手术刀片在兔左下肢股骨滑车凹造一约5 mm长的纵向软骨损伤制备软骨损伤模型。造模后2,6周分别处死5只动物,取软骨损伤部位后制作石蜡切片,免疫组织化学检测损伤周围Ⅰ、Ⅱ型胶原蛋白的表达情况,番红O-快绿染色检测损伤周围软骨的退变情况。结果与结论:免疫组织化学示:造模后2周后即可在软骨损伤周围检测到少量Ⅰ型胶原蛋白,6周后软骨损伤周围的Ⅰ型胶原蛋白有所增加,Ⅱ型胶原蛋白则未见明显改变。番红O-快绿染色示:2,6周软骨损伤周围均未见明显退变。结果表明,Ⅰ型胶原蛋白在骨关节炎早期即有表达,在软骨退变过程中表达逐渐增加,提示与骨关节炎的发生密切相关。

在肌腱损伤动物模型修复过程中BFGF和Ⅰ型胶原蛋白表达的特征

【目的】研究证实肌腱损伤修复过程中病灶区病理学变化及BFGF和Ⅰ型胶原蛋白在肌腱损伤修复过程中的作用。【方法】构建Leghorn鸡屈趾肌腱损伤修复模型,借助体视学、生物力学以及免疫组化进行探察和评价,实验数据利用SPSS10.0软件统计处理。【结果】①肌腱粘连程度和抗张力强度分别随损伤修复时间的延长逐渐增加,第6周组明显高于其它时间组(P<0.001),而且各时间组均与对照组之间存在显著统计学差异(P<0.001);②组织病理学检测显示病灶区出现大量炎症细胞和肌腱细胞,除第6周组外,其它时间组肌腱细胞和巨噬细胞的数量均高于对照组(P<0.05),同时显示肌腱细胞数量的峰值出现于第2周(P<0.001),而巨噬细胞数量在各时间组之间无统计学差异(P>0.05)。③免疫组化探测显示BFGF阳性细胞数量及Ⅰ型胶原蛋白的表达在各时间组均高于对照组(P<0.05);而且在第2周组显著高于其它时间组(P<0.001)。【结论】肌腱损伤修复过程中肌腱粘连程度和抗张力强度的变化与损伤修复时间正相关,病灶区组织病理学变化、BFGF和Ⅰ型胶原蛋白表达的高峰出现于第2周,提示BFGF和Ⅰ型胶原蛋白牵涉到损伤肌腱的修复过程。

病毒性心肌炎小鼠心肌骨桥蛋白和Ⅰ型胶原表达的动态变化

目的:观察病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌骨桥蛋白(OPN)及Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)的表达,探讨OPN在VMC发病中的作用机制。方法:以柯萨奇病毒B3(myocarditic coxsackievirus B3,CVB3)感染BALB/C小鼠建立VMC模型,取心肌组织行HE和Masson染色,并计算病理积分及心肌胶原纤维容积分数(CVF);RT-PCR检测Col I含量;RT-PCR及ELISA法检测OPN表达。结果:VMC组第7天心肌细胞大量坏死,炎性改变明显,随后炎性病灶逐渐吸收,第28天病灶周围炎细胞几近消失,纤维化明显;VMC组各时间点心肌病理积分、OPN mRNA表达均明显高于同时间点对照组(P<0.05),以第7天最高,第14天开始下降,与ELISA检测结果一致;第7,14天Col Ⅰ mRNA表达较弱,第21,28天表达增强,均高于对照组(P<0.05),与CVF结果一致,且Col Ⅰ mRNA与CVF呈正相关。结论:VMC急性期即出现OPN表达增加,至恢复期仍高于对照组,提示OPN可能参与VMC急性期的炎症反应,并促进恢复期胶原表达。

草鱼Ⅰ型胶原蛋白α1基因cDNA全序列克隆、组织分布及其生物信息学分析

利用PCR和RACE方法首次克隆了编码草鱼肌肉Ⅰ型胶原蛋白的α1基因(COL1A1)的cDNA全长序列,为5772bp,其开放阅读框为4347bp,编码1448个氨基酸。BLAST同源性分析结果显示,草鱼COL1A1基因的氨基酸序列与斑马鱼、金鱼同源性较高,分别为93.90%和93.60%,呈现出较高的保守性。系统进化树分析表明,该基因与斑马鱼、金鱼处于同一支,亲缘性最近。生物信息学分析显示,草鱼COL1A1蛋白质的相对分子质量为137.2ku,理论等电点是5.44,为α螺旋β折叠三重螺旋结构蛋白。有18段三重螺旋重复域,22段低复杂度域,17个功能域。COL1A1蛋白有33～69,1249～1355两个绑定钙的区域和62～104一个绑定锌的区域。利用半定量RT-PCR方法检测的组织表达结果表明,COL1A1基因在草鱼肌肉、肠道、肝胰脏、鳃、皮肤、鳍条、肾脏和脾脏8个组织中均有表达,其中在皮肤、鳃、肾脏、鳍条组织中的mRNA表达量高于其他4个组织(P<0.05)。

去端肽Ⅰ型胶原蛋白的免疫原性研究

背景:Ⅰ型胶原蛋白的免疫原性主要分布在分子链的端肽区域,可在胶原蛋白提取过程中通过水解或是去除而使其失活,制备去端肽Ⅰ型胶原蛋白,降低其免疫原性。目的:评价去端肽Ⅰ型胶原蛋白的免疫原性。方法:采用酶切、盐析、透析工艺制备去端肽Ⅰ型胶原蛋白,通过考马斯亮蓝对牛血清白蛋白染色极限的分析,鉴定去端肽Ⅰ型胶原蛋白的纯度,依据YY/T 0606.25-2014中规定的方法,利用Quant-IT PicoGreendsDNA Reagent and Kits试剂盒测定去端肽Ⅰ型胶原蛋白的DNA残留量,利用ELISA试剂盒分析去端肽Ⅰ型胶原蛋白的端肽去除效果,依据YY/T 1561-2017标准检测去端肽Ⅰ型胶原蛋白的α-Gal抗原含量。结果与结论:去端肽Ⅰ型胶原蛋白的纯度可达99.8%,DNA残留量为4μg/g,C、N末端肽浓度低于试剂盒检测限,α-Gal抗原含量低于检测限。通过酶切、盐析、透析工艺制备的去端肽Ⅰ型胶原蛋白,可显著去除天然胶原蛋白的免疫原性根源,有效控制胶原蛋白临床应用的免疫原性风险。

骨质疏松大鼠膝关节组织总胶原、Ⅰ型及Ⅱ型胶原蛋白的含量变化

背景:目前研究认为胶原蛋白在骨细胞的增殖与分化、骨质的形成和吸收、骨基质矿化等过程中起着非常重要的作用。目的:观察骨质疏松模型大鼠膝关节组织总胶原、Ⅰ型及Ⅱ型胶原蛋白含量变化。方法:SD雌性大鼠40只随机分为实验组和对照组,实验组大鼠行双侧卵巢切除16周后,取膝关节软骨和交叉韧带,采用微量羟脯氨酸测定法及酶联免疫吸附法测定大鼠膝关节软骨及前交叉韧带组织总胶原、Ⅰ型及Ⅱ型胶原蛋白含量。结果与结论:骨质疏松膝关节模型大鼠膝关节软骨、前交叉韧带总胶原、Ⅰ型及Ⅱ型胶原蛋白含量明显下降(P<0.05),Ⅰ型/Ⅱ型胶原比值也显著降低(P<0.05),提示骨质疏松可引起膝关节内组织总胶原、Ⅰ型及Ⅱ型胶原含量及其比值改变,与膝关节骨性关节炎的发生密切相关。