抗Ⅳ型胶原酶单抗在人肺癌裸鼠移植模型中的免疫显像

背景与目的:基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases,MMPs)在肿瘤生长和转移的多个环节发挥着重要作用,Ⅳ型胶原酶作为MMPs家族的重要成员之一已成为肿瘤研究的新靶点。本文通过荷瘤裸鼠的显像实验,评价抗Ⅳ型胶原酶单克隆抗体3G11的体内特异性分布。方法:用Iodogen法将131I或125I标记亲和纯化的单抗3G11,ELISA检测标记前后单抗的活性变化。131I-3G11在3种不同体系(生理盐水,小牛血清,裸鼠血清)中37℃温育,检测体外稳定性。每只正常BALB/c小鼠静脉注入388.5kBq125I-3G11,测定单抗的药动学指标。建立人高转移PG肺癌细胞移植肿瘤模型的BALB/c(nu/nu)裸鼠每只静脉注入6.44MBq131I-3G11,进行免疫显像。结果:单抗3G11经亲和纯化后纯度大于98%,碘标记使单抗活性降低10%～20%。单抗3G11的体内代谢呈二室模型分布,T1/2α为7.2h,T1/2β为345.2h。131I-3G11标记物体外72h能基本保持稳定,在荷瘤裸鼠体内72h显像清晰,至120h效果更明显。结论:显像实验证明单抗3G11对肿瘤组织有较好的特异性和亲和性。

以Ⅳ型胶原酶为靶点的小型化单抗免疫偶联物的抗肿瘤作用

Ⅳ型胶原酶与肿瘤的侵袭、转移以及新血管生成等过程密切相关。以Ⅳ型胶原酶为分子靶点,利用小鼠抗Ⅳ型胶原酶单抗构建了小型化的Fab′片段与高效抗肿瘤抗生素力达霉素(LDM)的免疫偶联物(Fab′-LDM),偶联物的分子量约为65kD,偶联分子比为1:1.以ELISA方法检测,Fab′-LDM偶联物保留了单抗Fab′片段对肝癌22(H22)细胞的免疫结合活性;以MTT法测定,Fab′-LDM偶联物对肝癌22细胞显示出更强的细胞毒性,动物体内试验观察对小鼠移植性肝癌22的疗效,小鼠皮下接种肿瘤,24h后开始给药(静脉注射2次,分别在接种后1和8天),Fab′-LDM偶联物0.025,0.O5和0.10mg/kg剂量组的抑瘤率分别为76.7％,93.3％和94.8％,而游离LDM0.05mg/kg的抑瘤率为76.1％;另一批实验于接种肿瘤96h后开始给药(静脉注射2次,分别在接种后4和11天),Fab′-LDM偶联物0.025和0.05mg/kg组的抑瘤率分别为74.2％和80.9％,而LDM0.05mg/kg组的抑瘤率为60.5％,Fab′-LDM偶联物0.05 mg/kg可显著延长荷瘤小鼠的生存时间,与同等剂量的游离LDM相比,延长生存时间的效果更强(P<0.05),以上结果表明,以Ⅳ型胶原酶为靶点的小型化单抗免疫偶联物在肿瘤的实验治疗中有显著的疗效。

基础理论（071174-071178）

071174 应用蛋白质组学技术研究反义cyclin B1的抗肿瘤作用机制；071175 rAd·p53的抑癌作用及体外转染后抑癌蛋白的表达；071176 平阳霉素与抗Ⅳ型胶原酶单抗3G11联合使用的抗肿瘤作用；071177 过表达Notch1对肿瘤细胞增殖的影响；071178 bcr-ab1和白介素-7共表达基因疫苗诱导小鼠免疫保护作用……