抗乙酰胆碱3受体抗体与原发性干燥综合征相关性研究

目的探讨抗毒蕈碱3型乙酰胆碱受体抗体(a-M3R)在原发性干燥综合征(p SS)中的临床意义。方法通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测p SS组(42例)和疾病对照组(系统性红斑狼疮及类风湿关节炎患者18例)、健康对照组(20例)的抗M3R抗体阳性率;并将p SS组分为抗M3R抗体阳性组和阴性组,分析p SS组中抗M3R抗体阳性患者与阴性患者在临床及免疫学等指标间的差异与关系。结果抗M3R抗体在p SS患者中的阳性率为71.43%,疾病对照组的阳性率为16.67%,健康对照组的阳性率为15.00%,p SS患者阳性率高于疾病对照组和健康对照组(P<0.05)。p SS组抗M3R抗体阳性患者Ig G、Ig A、RF值及抗SSB抗体阳性例数较阴性患者明显增高。随着唇腺病理分级增高,抗M3R OD值随之升高。p SS抗M3R阳性患者血液系统受累较阴性患者明显升高。结论抗M3R抗体对p SS有一定的辅助诊断价值;抗M3R抗体阳性的p SS患者易合并血液系统病变,唇腺组织机构破坏较重。

免疫大鼠血清中抗β1、β3肾上腺素受体及M2乙酰胆碱受体抗体IgG亚类的分布

目的明确免疫大鼠血清中抗β1、β3肾上腺素受体及M2乙酰胆碱受体抗体的IgG亚类，为进一步研究此类抗体的作用机制提供实验依据。方法以合成的大鼠β1、β3肾上腺素受体和M2乙酰胆碱受体细胞外第二环肽段为抗原分别主动免疫Wistar大鼠，应用免疫球蛋白纯化技术特异性提纯其血清中IgG类抗体，应用BCA进行蛋白定量，调整血清中蛋白量一致，用SA—ELISA法检测抗β1、β3肾上腺素受体和M2乙酰胆碱受体抗体的IgG亚类。结果免疫组中属于IgG2a亚类的抗β1肾上腺素受体抗体的A值为（0．45±0．01），明显高于对照组（0．08±0．003，P〈0．05）；免疫组中属于IgG2b亚类的抗艮肾上腺素受体抗体的A值为（0．59±0．02），显著高于对照组（0．2±0．02，P〈0．05）；免疫组中属于IgG2a亚类的抗M2乙酰胆碱受体抗体的A值为（0．56±0．04），显著高于对照组（0．12±0．01，P〈0．05）。结论免疫大鼠血清中抗β1肾上腺素受体抗体和抗M2乙酰胆碱受体抗体主要属于IgG2a亚类，抗β3肾上腺素受体抗体主要属于IgG2b亚类。

血清毒蕈碱乙酰胆碱受体m3自身抗体水平对甲胎蛋白阴性肝细胞癌的诊断价值

背景肝细胞癌(HCC)是一种恶性程度较高的癌症。甲胎蛋白(AFP)是临床常用的HCC诊断标志物,但其灵敏度仅为41%~65%,漏诊率较高,因此亟须寻找新的诊断标志物和诊断方法以提升AFP阴性患者等的HCC检出率。目的评估毒蕈碱乙酰胆碱受体m3自身抗体(m3AchR-Ab)对AFP阴性HCC患者的诊断效能,并探索m3AchR-Ab对HCC患者的诊断价值。方法选取2011年11月至2015年9月入库于新疆医科大学第一附属医院标本库的257例患者血清样本,其中90例已确诊为HCC患者的血清样本为HCC组,89例已确诊为良性肝病(肝硬化及肝血管瘤等肝病)患者的血清样本为良性肝病组,78例健康受试者的血清样本为对照组。使用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测并比较3组血清m3AchR-Ab水平,分析血清m3AchR-Ab水平与HCC患者性别、年龄、HCC肿瘤大小(最大直径)和数量、TNM分期、淋巴结转移、远处转移、乙肝表面抗原(HBsAg)的关系,采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清m3AchR-Ab水平对AFP阴性HCC的诊断价值。结果HCC组血清m3AchR-Ab水平高于良性肝病组和对照组血清(P<0.05)。m3AchR-Ab水平与HCC肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移和HBsAg相关(P<0.05)。血清m3AchR-Ab水平诊断AFP阴性HCC的ROC曲线下面积为0.69〔95%CI(0.54,0.83)〕,最佳截断值为74.00 ng/ml,灵敏度为64.00%,特异度为91.02%。血清m3AchR-Ab联合AFP水平诊断HCC的ROC曲线下面积为0.90〔95%CI(0.85,0.95)〕,灵敏度为90.00%,特异度为88.02%。结论血清m3AchR-Ab水平对AFP阴性HCC具有一定的诊断价值,且使用m3AchR-Ab和AFP联合诊断可提高HCC诊断效能,这可为未来研究新型HCC诊断标志物提供更多参考。

抗乙酰胆碱3受体抗体在原发性干燥综合征中的临床意义

目的探讨抗乙酰胆碱3（M3）受体抗体在原发性干燥综合征（pSS）中的临床意义。方法用ELISA和Western blot检测pSS患者（70例）、系统性红斑狼疮（SLE）患者（50例）、健康对照者（76例）血清中抗M3受体抗体，并测所有受试者的泪液流率、泪膜破碎时间、角结膜染色评分、5min唾液流量、灶性指数、类风湿因子、IgG等。结果ELISA和Western blot检测抗M3受体抗体阳性率pSS患者为47．14％、60．00％，SLE患者为4．00％、12．00％，健康对照者为14．47％、15．79％。抗M3受体抗体阳性者的泪液流率、泪膜破碎时间、5min唾液流量低于阴性者，角结膜染色评分高于阴性者，但差异无统计学意义。抗M3受体抗体阳性者灶性指数〉3的患者多于阴性者（P〈0．05）。抗M3受体抗体阳性者IgG、类风湿因子水平明显高于阴性者（P〈0．05）。结论pSS患者抗M3受体抗体检出率明显高于SLE患者和健康对照者，抗M3受体抗体阳性者唇腺损伤较重。

重症肌无力患者血清抗乙酰胆碱受体抗体和抗突触前膜抗体检测

目的：探讨重症肌无力（MG）患者血清抗乙酰胆碱受体抗体（AchRab）和抗突触前膜抗体（Psmab）水平与其临床特征之间的关系。方法：采用ABC—ELISA法检测186例MG患者及35例正常人血清AchRab和Psmab。结果：MG患者血清AchRab和Psmab水平及阳性率均高于对照组（P〈0．01），且2抗体水平高度相关（r=0．72，P〈0．001）。2抗体水平与MG患者的性别无关；1～14岁患者2抗体水平较低；胸腺瘤患者2抗体水平高于胸腺增生者；危象型患者高于轻型和混合型患者；手术摘除胸腺后，2抗体水平较术前下降（P均〈0．05）。结论：AchRab和Psmab与MG患者病情程度及病理类型有关，可用于MG的病情监测。

重症肌无力患者血清补体和乙酰胆碱受体抗体的浓度变化及其相关性

目的探讨重症肌无力(MG)患者血清补体和乙酰胆碱受体抗体(AChRAb)的浓度变化及其相关性。方法对22例MG患者进行糖皮质激素规范化治疗,在治疗前、后检测其血清补体、AChRAb的浓度,并与14例非MG对照组(NC组)作对照,分析两组血清补体和AChRAb变化之间的关系。结果MG组在糖皮质激素治疗前补体C3浓度明显低于NC组(P<0.01),治疗后MG组补体C3明显增高(P<0.05),但仍低于NC组;AChRAb浓度在治疗前MG组明显高于NC组(P<0.01),治疗后MG组AChRAb浓度明显降低(P<0.05),但仍高于NC组。C5浓度MG组和NC组差异无显著性(P>0.05)。但补体(C3、C5)浓度和AChRAb浓度在治疗前(r=0.326、r=0.102,均P>0.05)和治疗后(r=0.114、r=-0.0146,均P>0.05),以及二者治疗前后变化值之间(r=-0.346、r=0.058,均P>0.05)相关性不显著。结论糖皮质激素治疗后MG患者C3浓度增加、AChRAb浓度下降,二者之间无明显相关性,补体和AChRAb在MG发病过程中可能起协同作用。

抗乙酰胆碱受体单克隆抗体A7诱导实验性自身免疫性重症肌无力作用

目的探讨抗乙酰胆碱受体单克隆抗体A7(抗-AChR mAb A7)对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)的作用. 方法经Lewis大鼠腹腔注射5 mL 20倍浓缩的含抗-AChR mAb A7培养上清液,建立EAMG被动转输模型.对照组经腹腔注射同体积的PBS.每8 h监测体重和临床症状评分.48 h后处死实验动物.采用放射免疫法检测AChR,并计算出AChR损失率.结果抗-AChR mAb A7诱导的EAMG模型AChR损失率高达24.3%～45.2%,而且AChR损失率与临床症状评分相关(r=0.74, P<0.01).抗-AChR mAb A7攻击位点在终板的AChR上.结论抗-AChR mAb A7可用于诱导EAMG模型及有关研究.

抗乙酰胆碱受体单链抗体在大肠杆菌中的表达

[目的 ]使构建的抗人乙酰胆碱受体单链抗体基因在大肠杆菌中表达 .[方法 ]将含有单链抗体基因的载体 pHEN2 (含有 pelB引导肽和c myc)转化大肠杆菌HB 2 15 1,在细菌外周质中表达单链抗体 .应用鼠抗c myc单链抗体的斑点杂交试验检查细菌外周质裂解物中单链抗体的表达 .[结果 ]单链抗体表达在细菌外周质中 ,培养液上清及对照大肠杆菌外周质和培养液上清均未发现单链抗体 .[结论 ]已成功地在大肠杆菌中表达了抗人乙酰胆碱受体单链抗体 .

快速检测重症肌无力患者的抗乙酰胆碱受体抗体的研究

目的 建立一种简捷、快速的方法以检测血清中的抗乙酰胆碱受体抗体 (AchR Ab)。方法 分别用本法和常规ELISA对 90份临床确诊标本进行检测 ,并对两种检测结果进行比较分析。结果 60例重症肌无力患者经本法和常规ELISA检测后 ,AchR Ab阳性率分别为 88 3 %和 86 7%。本检测法的敏感性达 88 3 % ,特异性为 93 3 % ,重复性较好 (CV <7 94 % )。结论 与常规ELISA相比 ,本检测法具有方便、快速、敏感的特点 ,在重症肌无力患者的AchR Ab检测中有较好的应用价值。

抗人乙酰胆碱受体单链抗体融合人血清白蛋白基因的构建

[目的 ]提高抗人乙酰胆碱受体主要免疫原区单链抗体 (ScFv)的稳定性 ,构建单链抗体 人血清白蛋白 (HSA)融合基因 .[方法 ]应用聚合酶链反应扩增人血清白蛋白基因 ,并克隆到含有抗人乙酰胆碱受体单链抗体 (ScFv6 37)的载体pHEN 2 (pHEN 2 ScFv6 37)上 .将重组质粒 pHEN 2 ScFv6 37 HSA转化至大肠杆菌 (E .coliDH 5α)中 ,分离提纯重组质粒后再经酶切、琼脂糖凝胶电泳检查以确认融合基因的正确性 .[结果 ]电泳检查发现了大小分别为 1770bp和 70 5 4bp的人血清白蛋白基因和融合基因 ,且发现位置正确 .[结论 ]成功地构建了单链抗体ScFv6 37与人血清白蛋白融合基因 .

天疱疮患者抗乙酰胆碱受体抗体与病情相关性研究

目的研究天疱疮患者体内抗乙酰胆碱受体(AchR)抗体表达水平以及与病情严重程度相关性.方法用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒测定50例天疱疮患者体内抗AchR抗体ELISA指数,并与30例健康志愿者进行对比.结果天疱疮患者的抗AchR抗体ELISA指数明显高于健康志愿者,但与天疱疮患者病情严重程度无明显相关性.结论抗AchR抗体参与了天疱疮的发病但与病情严重程度无明显相关性,可用于指导诊断及治疗但不适用于评估病情严重程度.

“抗乙酰胆碱受体抗体的放射免疫测定及在重症肌无力症临床中的应用”研究成果鉴定会在昆明召开

1987年3月11-13日在昆明市,由中国科学院昆明分院主持召开了“抗乙醭胆碱受休抗体的放射免疫测定及在重症肌无力症临床中的应用”研究成果鉴定会。来自全国从事蛇毒与生化,临床医学、放射免疫等研究的专家共31人参加会议。

原发性干燥综合征患者毒蕈碱型乙酰胆碱受体亚型3及其受体的变化及临床意义

目的了解毒蕈碱型乙酰胆碱受体亚型3(muscarinic acetylcholine receptor M3,CHRM3)及毒蕈碱型乙酰胆碱受体3亚型抗体(M3 muscarinic acetylcholine receptor antibody,CHRM3-Ab)在原发性干燥综合征(primary Sjgren’s syndrome,pSS)发病过程中的可能作用。方法川北医学院附属医院风湿科2010年4月至2011年12月门诊及住院pSS患者43例为pSS组,同期29名健康体检女性为正常对照组。收集两组临床资料及实验室指标。实时荧光定量聚合酶链式反应检测pSS患者及健康体检者外周血单个核细胞CHRM3转录水平,酶联免疫吸附试验检测血浆CHRM3-Ab浓度,进行CHRM3转录水平、CHRM3-Ab与临床指标的相关性分析。结果 pSS组CHRM3转录水平与CHRM3-Ab浓度显著高于正常对照组,差异均有统计学意义[(0.00014±0.00030)vs(0.00009±0.00004),P<0.05;(227.29±154.81)pmol/Lvs(141.44±71.04)pmol/L,P<0.01]。Spearman相关性分析发现,pSS患者CHRM3-Ab浓度与血细胞沉降率及IgG均呈负相关(r分别=-0.452、-0.470,均P<0.05)。结论 CHRM3转录水平和CHRM3-Ab在pSS患者的高表达可能在疾病发生发展中发挥重要作用;CHRM3-Ab可能通过与CHRM3非竞争性结合而抑制乙酰胆碱与其受体作用,导致腺体分泌减少。加强对CHRM3和CHRM3-Ab研究,有望为诊治pSS带来新契机。

血清诱骗受体3γ-干扰素和抗环瓜氨酸肽抗体在风湿性关节炎患者中的表达及意义

目的:探讨血清诱骗受体3、γ-干扰素、抗环瓜氨酸肽抗体在风湿性关节炎患者中的表达及意义。方法:选择2017年2月至2017年12月我院接诊的70例风湿性关节炎患者作为观察组,并选择我院同期接受健康体检的65例健康受试者作为对照组,采集所有受试者入组后第2天清晨空腹静脉血,检测血清诱骗受体3、γ-干扰素、抗环瓜氨酸肽抗体的表达,分析血清诱骗受体3、γ-干扰素、抗环瓜氨酸肽抗体在风湿性关节炎患者中的变化及意义。结果:观察组血清诱骗受体3、γ-干扰素、抗环瓜氨酸肽抗体分别为(4631.05±3180.24) pg/m L、(1341.23±482.94) pg/m L、(86.51±6.38) U/m L,对照组分别为(481.53±150.07) pg/m L、(248.79±62.63) pg/m L、(45.41±8.35) U/m L,差异具有统计学意义(P <0.05);通过Pearson相关性分析显示,血清诱骗受体3、γ-干扰素和抗环瓜氨酸肽抗体水平呈正相关(r=0.658、0.744,P <0.05)。结论:风湿性关节炎患者中血清诱骗受体3、γ-干扰素、抗环瓜氨酸肽抗体均明显升高,且血清诱骗受体3、γ-干扰素和抗环瓜氨酸肽抗体水平均呈正相关,可辅助诊断风湿性关节炎。

自身免疫抗体在重症肌无力发生发展的研究进展

重重症肌无力(MG)是一种以持续、难以恢复、反复发作为特点的慢性疾病,其临床表现为全身或局部的肌肉易感疲劳,严重情况下,可能会出现呼吸困难,甚至导致肌无力危机,对生命构成威胁,MG的发生与自身产生的抗体有密切关系。目前临床上针对有关自身抗体治疗策略正在不断发展,包括使用免疫抑制剂、靶向治疗和其他免疫调节方法等。本文就近年来有关与重症肌无力发病机制相关的几种重要抗体的研究进展作一综述,包括乙酰胆碱受体抗体、兰尼碱受体抗体、连接素抗体、低密度脂蛋白4抗体和肌肉特异性酪氨酸激酶、聚蛋白抗体和皮动蛋白抗体等。希望通过深入研究和了解与重症肌无力发病机制相关的抗体可以更好地理解MG的发病过程,并为寻找新的MG治疗治疗方法提供依据。

α7烟碱型乙酰胆碱受体在单核/巨噬细胞介导的炎症反应与极化调控中的作用

单核细胞和巨噬细胞在健康和疾病中均发挥重要作用,是固有免疫的重要组成,在其介导的炎症反应中保护宿主、清除病原体和调节免疫平衡,可通过清除细胞碎片、异物及调节炎症和愈合过程等维持内环境稳定。根据微环境和细胞激活状态,巨噬细胞可通过改变不同表型影响疾病转归。近二十年人们对胆碱能抗炎通路(CAP)在炎症反应中的作用及机制研究越来越深入,尤其是该通路中的重要结构——α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR),其本质为神经免疫系统的配体门控离子通道,且在调控单核/巨噬细胞吞噬、趋化因子和细胞因子产生、细胞存活和极化等方面发挥重要作用,相关机制涉及NLRP3炎症小体,可作为多种炎症性疾病的潜在治疗靶点。本文综述α7nAChR在炎症和免疫介导的疾病中对单核/巨噬细胞功能调控和极化的作用。

抗β3肾上腺素能受体抗体对心力衰竭大鼠模型心功能的保护作用

目的:研究抗β3肾上腺素能受体抗体对心力衰竭大鼠模型心功能的保护作用。方法:选择雄性SD大鼠作为实验动物,采用异丙肾上腺素腹腔注射的方法建立心力衰竭大鼠模型,IgG组给予IgG注射治疗、β3-AA组给予β3-AA注射治疗。检测大鼠血清中β3-AA含量、左心室射血功能和肥厚情况、心肌组织和血清中中左心室重构分子的含量。结果:(1)β3-AA含量:注射β3-AA后10d、20d、30d、40d和50d时,β3-AA组大鼠血清中β3-AA含量均高于IgG组;(2)心功能指标:IgG组大鼠的LVSP、±dp/dtmax均低于Sham组,LVEDP、LVW/BW高于Sham组;β3-AA组大鼠的LVSP、±dp/dtmax均高于IgG组,LVEDP、LVW/BW低于IgG组;(3)心室重构分子:IgG组大鼠血清中血管紧张素Ⅱ、醛固酮的含量以及心肌组织中I型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白、ADMA10、ADAM17的含量高于Sham组;β3-AA组大鼠血清中血管紧张素Ⅱ、醛固酮的含量以及心肌组织中Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白、ADMA10、ADAM17的含量低于IgG组。结论:抗β3肾上腺素能受体抗体能够改善心力衰竭大鼠模型的心室射血功能、减轻心室肥厚和重构,具有明确的心功能保护作用。

内皮细胞乙酰胆碱靶标不同于M受体的药理学特征

目的 研究内皮细胞乙酰胆碱靶标与M受体药理学特征的差异。方法 采用离体血管环实验方法,观察抗M_3受体的单克隆抗体和M受体激动剂毛果芸香碱对乙酰胆碱引起的内皮依赖性舒张血管作用的影响。结果 毛果芸香碱能够剂量依赖性拮抗乙酰胆碱诱导的内皮依赖性血管舒张作用,其拮抗性质为非竞争性拮抗;抗M_3受体的单克隆抗体不影响乙酰胆碱诱发的内皮依赖性舒张血管作用,但能拮抗乙酰胆碱诱发的离休肠肌收缩作用。结论 内皮细胞乙酰胆碱靶标的药理学特征不同于经典M受体。

重症肌无力患者外周血FOXP3、TGF-β1的变化及其与血清AChR抗体的关系

目的探讨MG患者外周血FOXP3、TGF-β1及AChR抗体三者之间的关系,揭示MG的发病机制。方法利用RT-PCR技术检测41例MG患者和20例体检健康者外周血单个核细胞FOXP3 mRNA的表达,ELISA技术检测外周血清TGF-β1浓度、抗AChR抗体水平,分析三者之间的关系。结果(1)FOXP3 mRNA的表达水平在MG患者组明显低于正常对照组(P<0.01),在25例眼肌型患者与16例全身型患者中的表达无差异性(P>0.05);(2)MG患者组外周血清TGF-β1浓度在MG患者组明显低于正常对照组(P<0.01),但在25例眼肌型患者与16例全身型患者中的表达无差异性(P>0.05);(3)41例MG患者中有30例患者血清中可检测出IgG型AChR抗体,其中眼肌型18例,全身型12例,两亚型的AChR抗体阳性率和抗体水平无显著差异(P>0.05);(4)各组外周静脉血单个核细胞FOXP3 mRNA的表达与血清TGF-β1浓度成正相关,相关系数为0.84(P<0.01);与IgG型AChR抗体水平呈负相关,相关系数为-0.77(P<0.01);血清TGF-β1浓度与IgG型AChR抗体水平呈负相关,-0.81(P<0.01)。结论FOXP3mRNA、TGF-β1低表达可能通过增加AChR抗体的产生,在MG的发病中起到重要作用。