薯蓣皂苷元通过NF-κB信号通路抑制三阴性乳腺癌的机制研究

目的观察薯蓣皂苷元对乳腺癌细胞增殖与迁移的抑制作用,探讨其作用机制与NF-κB信号通路的关系。方法采用CCK-8法检测不同浓度的薯蓣皂苷元作用乳腺癌细胞株及正常细胞株24 h后的生长抑制率。倒置相差显微镜下观察薯蓣皂苷元作用MDA-MB-231细胞24 h后,细胞形态的变化。细胞划痕法观察薯蓣皂苷元对MDA-MB-231细胞迁移的影响。RT-PCR检测凋亡相关基因Bcl-2 mRNA表达情况。Western Blot法检测薯蓣皂苷元对MDA-MB-231细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的影响,以及对NF-κB信号通路相关蛋白P65的影响。结果不同浓度薯蓣皂苷元对两种人类三阴性乳腺癌细胞株和小鼠E0771细胞均有显著的抑制效应,但对End1/E6E7细胞影响较小,只有在极高浓度作用下才产生抑制效应。薯蓣皂苷元作用MDA-MB-231细胞后,细胞的形态发生改变,细胞边缘回缩,失去正常上皮生长样形态。薯蓣皂苷元可显著抑制MDA-MB-231细胞的迁移,并呈浓度和时间依赖性。薯蓣皂苷元作用MDA-MB-231细胞24 h后,Bcl-2 mRNA表达量低于对照组。Bcl-2、P65蛋白表达量低于空白组,Bax蛋白表达量高于对照组。结论薯蓣皂苷元对乳腺癌细胞的抑制作用明显,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路的激活有关。

甲氨蝶呤磷脂复合物纳米粒对乳腺癌MCF-7细胞的体内外抗肿瘤作用

研究甲氨蝶呤磷脂复合物纳米粒(MTX-PC NPs)对乳腺癌MCF-7细胞的抗肿瘤作用。选择乳腺癌MCF-7细胞为体外模型,采用MTT比色分析法,观察体外乳腺癌细胞的生长和增殖抑制情况,评价MTX-PC NPs对MCF-7细胞的毒性作用;采用激光共聚焦荧光显微镜技术和流式细胞术观察其对MCF-7细胞摄取药物的影响;采用小鼠MCF-7细胞实体瘤模型进行体内抑瘤实验,观察移植瘤动物的生长情况,测定肿瘤大小。结果表明,MTX-PC NPs能抑制MCF-7细胞的生长增殖,且随药物浓度的升高而增强;激光共聚焦荧光照片显示载药纳米粒能有效地被MCF-7细胞摄取;对于FA(叶酸)受体过度表达的MCF-7细胞有高亲和识别,而对正常NIH-3T3细胞摄取较少;与MTX注射剂相比,相同药物浓度下,MTX-PC NPs组的小鼠MCF-7实体瘤生长更缓慢,表明抑制作用明显。说明甲氨蝶呤磷脂复合物纳米粒可能对乳腺癌有更优良的治疗作用。

新颖asperphenamate衍生物的设计合成及组织蛋白酶抑制活性和自噬诱导作用研究

目的设计合成asperphenamate分子内C环被氰基取代的衍生物,并研究其对于组织蛋白酶(cathepsin)的抑制作用,同时评价其调控乳腺癌细胞自噬能力。方法以光学活性的天冬酰胺和苯丙氨酸为原料,将所得中间体缩合得到了44个光学活性的衍生物,所得产物均经^(1)H-NMR和HR-MS验证了结构。利用荧光底物方法,以asperphenamate为对照药,评价了所合成衍生物的组织蛋白酶抑制作用,选择酶抑制作用最优的分子,利用AO染色和蛋白免疫印迹方法(western blotting)评价其调控乳腺癌细胞MCF-7自噬的能力。结果和讨论组织蛋白酶活性评价结果表明,部分化合物显示了酶抑制能力,对组织蛋白酶L和S亚型显示了明显选择性。其中,2-氟取代衍生物CA4b对组织蛋白酶L显示了最优活性,是阳性对照药的2倍。通过AO染色和蛋白免疫印迹方法分析证实CA4b也显示了明显的诱导乳腺癌细胞MCF-7的自噬作用。