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斑点免疫金渗滤法检测抗乳铁蛋白多克隆抗体特异性研究 被引量:4
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作者 李岩 李宏基 +2 位作者 韩立强 王静 杨国宇 《化学与生物工程》 CAS 2008年第2期32-34,共3页
采用斑点免疫金渗滤法对抗乳铁蛋白多克隆抗体特异性进行检测。结果表明金探针具有很强的选择性,斑点免疫金渗滤法能准确快速地检测出多克隆抗体的特异性。
关键词 斑点免疫金渗滤法 抗乳铁蛋白多克隆抗体 特异性 检测
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兔抗LGALS1蛋白多克隆抗体的制备
2
作者 代丹 姬格金 +4 位作者 郑维豪 张煜杭 罗芬 陆建 鲜思美 《贵州畜牧兽医》 2024年第1期15-17,共3页
为制备兔抗LGALS1蛋白多克隆抗体,将纯化LGALS1蛋白作为抗原,联合弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂免疫新西兰大白兔,经过3次免疫后采集兔血清,采用间接ELISA测定抗血清效价,Western blot检测分析抗体特异性,IFA检测抗体应用效果。结果:血... 为制备兔抗LGALS1蛋白多克隆抗体,将纯化LGALS1蛋白作为抗原,联合弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂免疫新西兰大白兔,经过3次免疫后采集兔血清,采用间接ELISA测定抗血清效价,Western blot检测分析抗体特异性,IFA检测抗体应用效果。结果:血清效价为1∶102 400,Western blot检测可见特异性条带,IFA检测显示细胞质呈特异绿色荧光。结论:试验成功制备了兔抗LGALS1蛋白多克隆抗体,抗体特异性好,效价高。 展开更多
关键词 LGALS1蛋白 多克隆抗体
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抗CCL20单克隆抗体对血清淀粉样蛋白A相关的结节病中促炎性细胞因子的抑制作用
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作者 魏佳 马成星 +2 位作者 郑颖 那雨琪 丁晶晶 《医学研究与战创伤救治》 CAS 北大核心 2024年第1期1-6,共6页
目的探讨抗CCL20单克隆抗体是否可抑制高水平血清淀粉样蛋白A(SAA)相关的结节病外周血单个核细胞(PBMC)中促炎性细胞因子的表达。方法提取健康人和结节病患者的PBMC,并进行分组。除空白对照组(正常人PBMC)和结节病PBMC对照组(患者PBMC)... 目的探讨抗CCL20单克隆抗体是否可抑制高水平血清淀粉样蛋白A(SAA)相关的结节病外周血单个核细胞(PBMC)中促炎性细胞因子的表达。方法提取健康人和结节病患者的PBMC,并进行分组。除空白对照组(正常人PBMC)和结节病PBMC对照组(患者PBMC)外,另将结节病组PBMC中分别加入SAA、SAA+抗CCL20单克隆抗体、SAA+NF-κB抑制剂BAY11-7082或地塞米松,经培养48 h后收集各组细胞,分别作为PBMC+SAA刺激组、PBMC+SAA+NF-κB抑制剂BAY11-7082组、PBMC+SAA+抗CCL20单抗组、PBMC+地塞米松干预组,使用ELISA分别测定各组细胞上清液中细胞因子IL-17A、IL-23、IL-6、CCL20和TGF-β1的表达,使用RT-PCR测定各组细胞中CCR6、IL-17、ROR-γt和Foxp3的mRNA表达水平,使用Western blot检测各组细胞中p-NF-κB和NF-κB蛋白的表达水平。结果PBMC+SAA+抗CCL20单抗组与PBMC+SAA组相比,细胞上清液中的IL-17A、IL-23和IL-6的水平显著降低(P<0.01),而TGF-β1的含量显著升高(P<0.01)。PBMC+SAA+抗CCL20单抗组相较于PBMC+SAA组,细胞中CCR6、IL-17A、ROR-γtmRNA水平显著降低(P<0.01),而Foxp3 mRNA差异无统计学意义(P>0.05)。PBMC+SAA+抗CCL20单抗组中p-NF-κB蛋白表达水平较PBMC+SAA组明显降低(P<0.01)。结论抗CCL20单克隆抗体可抑制高水平SAA相关的结节病PBMC中促炎性细胞因子的表达。 展开更多
关键词 结节病 血清淀粉样蛋白A 核因子ΚB CCL20单克隆抗体
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早孕期检测抗甲状腺球蛋白抗体和血清铁蛋白与甘油三酯水平在妊娠期糖尿病患者中的临床价值
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作者 胡丽华 黄小芸 侯小燕 《当代医学》 2024年第6期84-87,共4页
目的探究早孕期检测抗甲状腺球蛋白抗体(TgAb)、血清铁蛋白(SF)和甘油三酯(TG)水平在妊娠期糖尿病(GDM)患者中的临床价值。方法选取2021年5月至2022年5月于新余市妇幼保健院妇保科建档、规律产检的200例孕妇作为研究对象,根据是否患有GD... 目的探究早孕期检测抗甲状腺球蛋白抗体(TgAb)、血清铁蛋白(SF)和甘油三酯(TG)水平在妊娠期糖尿病(GDM)患者中的临床价值。方法选取2021年5月至2022年5月于新余市妇幼保健院妇保科建档、规律产检的200例孕妇作为研究对象,根据是否患有GDM分为GDM组(n=36)与对照组(n=164)。检测并比较两组孕早期TgAb阳性率及血清游离三碘甲状原氨酸(FT3)、游离甲状腺癌尿素(FT4)、促甲状腺激素(TSH)、SF、空腹血糖(FBG)、TG水平,绘制ROC曲线并计算AUC分析早孕期血清TgAb阳性率、SF、FPG和TG水平及联合检测对GDM的预测价值。结果GDM组TgAb阳性率及血清SF、FPG和TG水平均高于对照组,血清FT3和FT4水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组血清TSH水平比较差异无统计学意义。早孕期TgAb、SF、FPG、TG水平及联合检测预测GDM的AUC分别为0.671、0.774、0.786、0.807、0.899,联合检测的预测价值更高。结论早孕期TgAb阳性率及血清SF、FPG、TG水平联合检测对GDM的预测价值较高,临床可通过检测上述指标早期诊断GDM。 展开更多
关键词 妊娠期糖尿病 甲状腺球蛋白抗体 蛋白 甘油三酯 诊断价值
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基于高通量表面等离子体共振技术筛选与TPBG具有高亲和力的单克隆抗体研究
5
作者 江秀玲 王晓丽 +2 位作者 胡有根 彭建明 严慧深 《现代医药卫生》 2024年第14期2349-2352,共4页
目的探讨从制备的单克隆抗体中快速筛选出与滋养层糖蛋白(TPBG)具有高亲和力的单克隆抗体的方法。方法采用高通量表面等离子体共振技术(SPR),将不同种属的TPBG通过氨基偶联的方式固定在GLC传感器芯片上,梯度稀释的抗体作为流通相,筛选... 目的探讨从制备的单克隆抗体中快速筛选出与滋养层糖蛋白(TPBG)具有高亲和力的单克隆抗体的方法。方法采用高通量表面等离子体共振技术(SPR),将不同种属的TPBG通过氨基偶联的方式固定在GLC传感器芯片上,梯度稀释的抗体作为流通相,筛选能高度亲和TPBG的单克隆抗体,并测定相互作用的动力学常数。抗体1结合人和食蟹猴TPBG,亲和力分别为65.0、31.6 nmol/L;抗体6结合人、小鼠、食蟹猴TPBG,亲和力分别为77.6、92.1、87.7 nmol/L。结果该研究成功筛选出2种能与TPBG特异性结合的单克隆抗体。动力学图谱显示,这2种抗体与TPBG蛋白的特异性结合稳定。结论采用SPR可筛选出与TPBG蛋白具有高亲和力的单克隆抗体,为开发出一些新型的抗肿瘤药物提供一种方法。 展开更多
关键词 5T4蛋白 高通量 表面等离子体共振 亲和力 克隆抗体 肿瘤药物
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线粒体铁转运蛋白2(mitoferrin 2/SLC25A28)的原核表达及兔多克隆抗体制备 被引量:1
6
作者 刘磊 聂雅婷 +3 位作者 丁兰 谷雨 袁媛 叶菁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期268-274,共7页
目的构建人线粒体铁转运蛋白2(mitoferrin 2/SLC25A28)的原核表达质粒,进行蛋白表达和纯化,制备兔抗多克隆抗体并进行初步鉴定。方法构建pET28a(+)-SLC25A28-His原核表达质粒,转化至BL21(DE3)大肠杆菌,采用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG... 目的构建人线粒体铁转运蛋白2(mitoferrin 2/SLC25A28)的原核表达质粒,进行蛋白表达和纯化,制备兔抗多克隆抗体并进行初步鉴定。方法构建pET28a(+)-SLC25A28-His原核表达质粒,转化至BL21(DE3)大肠杆菌,采用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达。提取蛋白包涵体,并用8 mol/L尿素溶解,His-NTA柱纯化。获得纯化SLC25A28蛋白免疫新西兰大白兔制备SLC25A28多克隆抗体,Western blot法鉴定SLC25A28抗体特异性。结果成功构建pET28a(+)-SLC25A28-His原核表达载体质粒,并在BL21(DE3)大肠杆菌中成功诱导表达SLC25A28蛋白,蛋白纯度约为90%,Western blot法证明制备的抗体能特异性识别小鼠睾丸组织中的SLC25A28蛋白。结论成功对人SLC25A28进行了原核表达,并制备了具有特异性的兔抗人SLC25A28多克隆抗体。 展开更多
关键词 线粒体转运蛋白2(mitoferrin 2/SLC25A28) 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体 免疫特异性
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牛乳铁蛋白多克隆抗体的制备、纯化及定量检测 被引量:1
7
作者 王建 郝丽媛 +1 位作者 魏婧雅 孙鹏 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期100-106,共7页
本试验旨在制备高纯度和特异性的牛乳铁蛋白多克隆抗体,为鉴定并定量检测牛奶样品中及奶牛乳腺组织中合成的乳铁蛋白提供试验材料。选用4只健康新西兰大白兔,初次免疫乳铁蛋白4周后进行加强免疫,每2周加强免疫1次,待血清达到抗体效价后... 本试验旨在制备高纯度和特异性的牛乳铁蛋白多克隆抗体,为鉴定并定量检测牛奶样品中及奶牛乳腺组织中合成的乳铁蛋白提供试验材料。选用4只健康新西兰大白兔,初次免疫乳铁蛋白4周后进行加强免疫,每2周加强免疫1次,待血清达到抗体效价后,对兔进行心脏采血并分离血清,利用饱和硫酸铵法和蛋白A树脂纯化抗体,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western-blot)法分别用于鉴定纯化后抗体的纯度和特异性。测定纯化后抗体效价,并绘制抗体抑制曲线。最后利用所得抗体对市售液态奶、奶牛乳腺组织匀浆液、奶粉样品中的乳铁蛋白进行定量检测。结果表明,本试验制备的兔抗牛乳铁蛋白多克隆抗体纯度较高、特异性较强,抗体浓度为11.02 mg/m L,效价达到1∶128 000;采用该抗体测定的乳腺组织样品中乳铁蛋白浓度为16.13μg/g,液态奶中接近于0μg/g,奶粉中为5.28μg/g。总之,本试验采用经过饱和硫酸铵法和蛋白A树脂2步纯化后得到了纯度较高、特异性较强的兔抗牛乳铁蛋白多克隆抗体,可以用于牛奶等产品的乳铁蛋白鉴定。 展开更多
关键词 蛋白 多克隆抗体 抗体纯化
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牛乳铁蛋白单克隆抗体的制备及双抗夹心ELISA检测方法的建立 被引量:1
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作者 项开合 张乃生 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2014年第10期34-36,共3页
本试验以牛乳铁蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体,获得了3株稳定分泌乳铁蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为3C6、3F8和4D3,最后用相对亲和力最强的3C6所产生的抗体作为包被抗体,用辣根过氧化物酶... 本试验以牛乳铁蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体,获得了3株稳定分泌乳铁蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为3C6、3F8和4D3,最后用相对亲和力最强的3C6所产生的抗体作为包被抗体,用辣根过氧化物酶标记过的多克隆抗体作为酶标抗体,最终建立了用于检测牛乳汁中乳铁蛋白含量的双抗夹心ELISA检测方法,该法对牛乳铁蛋白最低检测限为4 ng/m L,最适检测范围为4~256 ng/m L。 展开更多
关键词 蛋白 克隆抗体 多克隆抗体 夹心ELISA检测方法
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牛乳铁蛋白单克隆抗体的制备
9
作者 沈阳 张英华 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期39-44,共6页
以LF(牛乳铁蛋白)为抗原对BALB/C小鼠进行免疫,利用杂交瘤技术进行融合,制备了3株抗牛LF的杂交瘤细胞,并对其浓度、上清效价、腹水效价、抗体亚类、分泌单克隆抗体稳性定、单克隆抗体分子量等进行鉴定。结果表明,抗体分泌稳定,腹水效价... 以LF(牛乳铁蛋白)为抗原对BALB/C小鼠进行免疫,利用杂交瘤技术进行融合,制备了3株抗牛LF的杂交瘤细胞,并对其浓度、上清效价、腹水效价、抗体亚类、分泌单克隆抗体稳性定、单克隆抗体分子量等进行鉴定。结果表明,抗体分泌稳定,腹水效价达到106,间接ELISA、Western blot结果显示3株单抗均与FL发生特异性结合;Ig亚类鉴定均为IgG,且轻链均为K链。 展开更多
关键词 蛋白 免疫 鉴定 克隆抗体
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驼乳源乳铁蛋白嵌合肽对口腔致龋菌抗菌作用的初步探究 被引量:1
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作者 李梦雨 伊丽 吉日木图 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期54-62,共9页
该研究旨在评估驼乳源乳铁蛋白(lactoferrampin-lactoferricin,LFA-LFC)嵌合肽对变异链球菌、唾液链球菌和远缘链球菌的抗菌效果并初步探究其作用机制。首先预测并鉴定驼乳源LFA-LFC嵌合肽的分子特性和二级结构;通过测定嵌合肽最低抑菌(... 该研究旨在评估驼乳源乳铁蛋白(lactoferrampin-lactoferricin,LFA-LFC)嵌合肽对变异链球菌、唾液链球菌和远缘链球菌的抗菌效果并初步探究其作用机制。首先预测并鉴定驼乳源LFA-LFC嵌合肽的分子特性和二级结构;通过测定嵌合肽最低抑菌(minimum inhibitory concentration,MIC)、杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC),绘制时间-致死曲线,评估嵌合肽的抗菌效果;分析嵌合肽对生物膜的预防、消除作用。采用电子显微镜观察嵌合肽对细菌的作用位点,测定菌体DNA迁移率,对嵌合肽的抗菌机制进行初步研究。结果表明,驼乳源LFA-LFC嵌合肽对变异链球菌、唾液链球菌和远缘链球菌的最低抑菌浓度分别为32、32、64μmol/L;最低杀菌浓度分别为128、128、256μmol/L;细菌在1×MIC嵌合肽浓度处理30 min后完全致死;当嵌合肽浓度为128μmol/L时预防生物膜生成约80%,512μmol/L时消除生物膜约50%;4×MIC嵌合肽浓度处理细菌后发现其细胞膜均出现裂解,DNA未发生迁移。该研究认为驼乳源LFA-LFC嵌合肽对3株菌表现出显著的抗菌效果,嵌合肽可通过破坏细菌细胞膜,进入细胞内部作用于DNA,抑制细菌生长繁殖。 展开更多
关键词 蛋白嵌合肽 口腔致龋菌 菌效果 生物膜 DNA
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抗髓过氧化物酶及乳铁蛋白抗体对自身免疫性肝炎检测的临床研究 被引量:9
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作者 谭立明 张玉红 +5 位作者 陈冬莲 明凤 李华 陈娟娟 王外梅 熊金旺 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期839-843,847,共6页
目的:探讨抗髓过氧化物酶抗体(AMPA)及抗乳铁蛋白抗体(ALA)对自身免疫性肝炎(AIH)检测的临床意义及评估。方法:对63例AIH(53例AIH-Ⅰ和10例AIH-Ⅱ)、206例非AIH患者和50例健康体检者均采用ELISA法检测AM-PA和ALA;间接免疫荧光法(IIF)检... 目的:探讨抗髓过氧化物酶抗体(AMPA)及抗乳铁蛋白抗体(ALA)对自身免疫性肝炎(AIH)检测的临床意义及评估。方法:对63例AIH(53例AIH-Ⅰ和10例AIH-Ⅱ)、206例非AIH患者和50例健康体检者均采用ELISA法检测AM-PA和ALA;间接免疫荧光法(IIF)检测抗核抗体(ANA)、抗平滑肌抗体(ASMA)和抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA),观察临床评价指标,并对结果进行回顾性分析。结果:63例AIH和206例非AIH检测AMPA阳性率分别是61.9%(39/63)和3.40%(7/206),经χ2检验,P<0.01;AIH组中AIH-Ⅰ组阳性率73.6%(39/53)。63例AIH患者检测ALA阳性12例(19.0%),AIH-Ⅰ中阳性11例(20.8%)。AIH自身抗体临床评价指标显示ALA敏感性最低为19.05%,但其特异性最高为99.6%,AM-PA特异性为97.27%。结论:AMPA、ALA与AIH的发生发展存在相关性,两者联合其他自身抗体检测对AIH的诊断及其亚型的鉴别有重要意义。 展开更多
关键词 髓过氧化物酶抗体 蛋白抗体 自身免疫性肝炎 抗体 平滑肌抗体 中性粒细胞胞质抗体
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人乳铁蛋白多克隆抗体的制备、初步纯化及其应用 被引量:3
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作者 方彧聃 颜景斌 《乳业科学与技术》 2003年第3期97-99,共3页
制备并初步纯化人乳铁蛋白的多克隆抗体,然后将抗体用于该蛋白的检测。分别对8周龄的昆明白小鼠和12周龄的新西兰白兔进行多次皮下免疫注射,采集血清并用硫酸铵沉淀法进行抗体的初步纯化。将初步纯化的抗体用于抗体夹心ELISA法检测转基... 制备并初步纯化人乳铁蛋白的多克隆抗体,然后将抗体用于该蛋白的检测。分别对8周龄的昆明白小鼠和12周龄的新西兰白兔进行多次皮下免疫注射,采集血清并用硫酸铵沉淀法进行抗体的初步纯化。将初步纯化的抗体用于抗体夹心ELISA法检测转基因小鼠乳汁中人乳铁蛋白的表达量。经三次免疫后的新西兰白兔和昆明白小鼠血清中抗体的效价分别达到了1∶48000和1∶24000,并能在较高水平上维持两周以上,经初步纯化后抗体纯度得到很大提高。用抗体夹心ELISA法能够测出转基因小鼠乳汁中人乳铁蛋白含量。使用皮下注射的方法对昆明白小鼠和新西兰白兔进行免疫来制备多克隆抗体是可行的,硫酸铵沉淀法纯化后的抗体去除了大多数杂蛋白,可以满足测定的需要。 展开更多
关键词 蛋白 多克隆抗体 制备技术 纯化 应用 新西兰白兔 皮下免疫注射
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抗人乳腺癌单克隆抗体偶联米托蒽醌白蛋白纳米球的初步研究 被引量:18
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作者 张志荣 龚艳 +1 位作者 黄园 何勤 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期151-154,共4页
AIM To improve the treatment efficacy of anti tumor drug mitoxantrone, the conjugation of mitoxantrone loaded nanospheres and anti C erbB 2 monoclonal antibodies were prepared. METHODS Mitoxantrone loaded nanospheres ... AIM To improve the treatment efficacy of anti tumor drug mitoxantrone, the conjugation of mitoxantrone loaded nanospheres and anti C erbB 2 monoclonal antibodies were prepared. METHODS Mitoxantrone loaded nanospheres were prepared with emulsion heating solidification technique. A heterobifunctional reagent, N succinimidyl 3 (2 pyridyldithio) propionate (SPDP), was used as the crosslinker of mitoxantrone loaded nanospheres and anti C erbB 2 monoclonal antibodies; pharmaceutical properties of immunonanocapsuls were studied; the conjugates of nanospheres and monoclonal antibodies was confirmed with immunological methods such as slide agglutination test, fluorescent immunossay and rosset formation test, fluorescent staining and scanning electron microscope. RESULTS Mitoxantrone loaded nanospheres were spherical, with smooth surface and median diameter of 0 665 micron. When stored at 3-5, 20-25 and 37℃, RH 75% for three months, the appearance, morphology, size distribution, drug loading and in vitro release characteristics showed no significant change and the stability was satisfactory. The size analysis demonstrated that there was no obvious increase in the particle size of nanoparticles after conjugation. Immunological tests indicate highly selective binding of antibody targeted nanospheres to C erbB 2 overexpressing cells SK BR 3. CONCLUSION The conjugation of mitoxantrone loaded nanospheres and anti C erbB 2 monoclonal antibodies can keep the activity of anti C erbB 2 and increase the therapeutic efficacy of anti mammary cancer drugs. 展开更多
关键词 米托蒽醌白蛋白纳米球 腺癌单克隆抗体 免疫纳米球 交联剂
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奶山羊乳铁蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备
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作者 钟玉玲 代邦国 +3 位作者 杜伟伟 张华文 李纯 史怀平 《家畜生态学报》 北大核心 2022年第2期13-19,共7页
为了制备奶山羊乳铁蛋白的多克隆抗体,为进一步的试验提供材料,该研究运用软件分析并选取最适合原核表达的LF序列进行扩增,将扩增出的序列与pET-32a(+)质粒连接,形成原核表达质粒pET-32a-LF,将质粒转化入大肠杆菌,在最适条件(37℃、0.5 ... 为了制备奶山羊乳铁蛋白的多克隆抗体,为进一步的试验提供材料,该研究运用软件分析并选取最适合原核表达的LF序列进行扩增,将扩增出的序列与pET-32a(+)质粒连接,形成原核表达质粒pET-32a-LF,将质粒转化入大肠杆菌,在最适条件(37℃、0.5 mmol/L IPTG、4 h)下诱导表达出大量蛋白。通过Ni-NTA Resin法将蛋白纯化后皮下注射4月龄新西兰大耳兔,免疫注射结束后采集抗体血清,并用间接酶联免疫吸附法和免疫印迹法检测多抗的效价及特异性。结果显示克隆得到适合原核表达的279 bp的LF CDS片段,pET-32a(+)-LF原核表达载体成功构建并顺利表达(未形成包涵体),表达的截短蛋白大小为10 kD。抗体效价达到1:10^(7);免疫印迹试验结果显示,原核表达的LF蛋白和山羊乳腺上皮细胞中的LF蛋白能够被该抗体特异性识别。 展开更多
关键词 奶山羊 蛋白(LF) 抗体制备
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亚基特异性铁蛋白单克隆抗体对人肝癌与肝脏铁蛋白生化免疫性质分 被引量:2
15
作者 范桢 汤钊猷 +1 位作者 周信达 Paolo Arosio 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 1991年第1期3-4,共2页
1975年,Alpert首次报道肝癌组织铁蛋白等电聚焦电泳位置与正常肝有所不同,其等电点略偏酸性,而与人胎肝铁蛋白相似,称之癌胚铁蛋白(Carcino-fetal ferritin)。最近我们与意大利米兰大学生物医学技术部合作,以重组的H和L铁蛋白亚基及其... 1975年,Alpert首次报道肝癌组织铁蛋白等电聚焦电泳位置与正常肝有所不同,其等电点略偏酸性,而与人胎肝铁蛋白相似,称之癌胚铁蛋白(Carcino-fetal ferritin)。最近我们与意大利米兰大学生物医学技术部合作,以重组的H和L铁蛋白亚基及其相应的单克隆抗体与从人肝癌和肝脏中提取纯化的铁蛋白及其相应的多克隆抗体进行生化免疫性质比较,结果报道如下。 展开更多
关键词 蛋白 克隆抗体 肝癌 免疫学
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脑药物转运载体——抗转铁蛋白受体单链抗体的克隆表达及鉴定 被引量:4
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作者 颜冰 黄培堂 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期303-307,共5页
为构建特异性的脑药物转运载体 ,分段合成了抗大鼠转铁蛋白受体的单链抗体基因 (Ox2 6 scfv) .经重叠PCR拼接成完整片段 ,克隆入pUC19载体中 ,测序正确后克隆到大肠杆菌表达载体pET 15b E .tag上 .IPTG诱导 ,表达产物分子量为 2 9kD ,... 为构建特异性的脑药物转运载体 ,分段合成了抗大鼠转铁蛋白受体的单链抗体基因 (Ox2 6 scfv) .经重叠PCR拼接成完整片段 ,克隆入pUC19载体中 ,测序正确后克隆到大肠杆菌表达载体pET 15b E .tag上 .IPTG诱导 ,表达产物分子量为 2 9kD ,约占菌体总蛋白量的 4 0 % .包涵体经 6mol L盐酸胍变性后 ,过SephacrylS 30 0HR分子筛柱复性蛋白 .免疫酶染色实验表明 ,该单链抗体能与转铁蛋白受体特异性结合 。 展开更多
关键词 药物转运载体 蛋白受体 克隆表达 鉴定 单链抗体 血脑屏障
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木瓜凝乳蛋白酶多克隆抗体制备方法的研究
17
作者 舒薇 郭勇 +1 位作者 房师松 崔堂兵 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期744-746,共3页
目的 探讨了木瓜凝乳蛋白酶高效价抗体的制备方法。方法 将纯化的木瓜凝乳蛋白酶 (电泳纯 )以三种不同抗原形式———未处理原酶、H2 O2 抑活的木瓜凝乳蛋白酶、碘乙酸抑活的木瓜凝乳蛋白酶分别免疫雄性白兔 ,免疫方法采用多次皮下注... 目的 探讨了木瓜凝乳蛋白酶高效价抗体的制备方法。方法 将纯化的木瓜凝乳蛋白酶 (电泳纯 )以三种不同抗原形式———未处理原酶、H2 O2 抑活的木瓜凝乳蛋白酶、碘乙酸抑活的木瓜凝乳蛋白酶分别免疫雄性白兔 ,免疫方法采用多次皮下注射和静脉冲击免疫相结合方式进行。从第三次免疫开始 ,每次免疫后均由耳静脉采血 ,用Westernblotting法和ELISA法检测抗血清 ,用SAS软件包对数据进行分析比较。结果 两种抑活抗原诱导产生的抗血清效价显著高于未抑活抗原 (P <0 0 5 ) ,而两种抑活抗原之间无显著性差异 ;静脉冲击免疫可显著提高机体免疫应答能力 ,急剧提升抗血清效价。结论 抑活抗原比未处理原酶具有更好的免疫原性。与碘乙酸相比 ,选用H2 O2 抑活抗原来制备抗体不失为一种经济有效的方法。抑活抗原采用皮下注射及静脉冲击免疫相结合的方式 ,可十分有效的产生及提高抗血清效价 。 展开更多
关键词 木瓜凝蛋白 多克隆抗体 制备方法 血清效价
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抗乳铁蛋白单链抗体制备及鉴定
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作者 虞东芳 刘祖国 +2 位作者 李民友 顾熊飞 胡皎月 《医学研究杂志》 2006年第8期36-38,共3页
目的制备特异性的可溶性抗乳铁蛋白单链抗体。方法用固相化的乳铁蛋白从天然噬菌体抗体库筛选出抗乳铁蛋白的单链抗体克隆,转化至大肠杆菌HB2151中进行可溶性表达。表达产物以镍离子亲和层析法纯化,并进一步鉴定其纯度、活性等。结果成... 目的制备特异性的可溶性抗乳铁蛋白单链抗体。方法用固相化的乳铁蛋白从天然噬菌体抗体库筛选出抗乳铁蛋白的单链抗体克隆,转化至大肠杆菌HB2151中进行可溶性表达。表达产物以镍离子亲和层析法纯化,并进一步鉴定其纯度、活性等。结果成功筛选并表达了抗乳铁蛋白的单链抗体,该抗体能与乳铁蛋白特异性结合,而与转铁蛋白、溶菌酶、小牛血清白蛋白无交叉反应。结论建立了一种抗乳铁蛋白单链抗体的有效制备途径,为其进一步临床应用的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 蛋白 噬菌体抗体 单链抗体 筛选
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酸性同功铁蛋白单克隆抗体免疫学特性的研究
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作者 游上游 张楚瑜 +1 位作者 黄巍 易先平 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第12期537-538,共2页
目的:探讨抗不同组织酸性同功铁蛋白(AIF)单克隆抗体(McAb)的免疫学特性。方法:应用聚焦层析技术分别从人胎盘和原发性肝癌组织中分离出低pI值的AIF,常规制备McAb和进行免疫组织化学测定。结果:共筛选到5株抗... 目的:探讨抗不同组织酸性同功铁蛋白(AIF)单克隆抗体(McAb)的免疫学特性。方法:应用聚焦层析技术分别从人胎盘和原发性肝癌组织中分离出低pI值的AIF,常规制备McAb和进行免疫组织化学测定。结果:共筛选到5株抗人胎盘AIF和2株抗人原发性肝癌(PHC)AIF的McAb,即2f8、4g7、4g8、5c3、7a9和4c9、4e2。抗AIFMcAbs均与各自AIF分子上不同抗原决定簇结合,其中针对不同组织AIF的McAb5c3和4e2作用于同一抗原决定簇。使用McAb2f8和4c9,对正常肝组织、慢性肝炎与肝硬化和PHC肝组织进行了免疫组织化学检查,其阳性率分别为2f8:0、10.0%、76.3%;4c9:0.6.7%、81.6%。结论:人胎盘和PHC组织AIF中存在着共同的抗原决定簇,抗PHCAIFMcAb在免疫诊断中优于抗人胎盘AIFMcAb。 展开更多
关键词 酸性同功蛋白 克隆抗体 免疫组织化学
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牛乳铁蛋白抗体的制备及其特性测定
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作者 李亚璞 刘玲君 +3 位作者 宋晓青 吴萌 程华 李春生 《湖南农业科学》 2015年第12期5-7,共3页
利用BLF抗原免疫BALB/c小鼠,采用常规细胞融合技术制备了6株抗BLF的单克隆抗体细胞株,并用此抗原免疫新西兰大白兔获得了55 m L的兔多抗血清。针对腹水单抗及多抗血清进行了一系列特性分析,结果显示,5株抗体效价基本上在1∶10^6以上;间... 利用BLF抗原免疫BALB/c小鼠,采用常规细胞融合技术制备了6株抗BLF的单克隆抗体细胞株,并用此抗原免疫新西兰大白兔获得了55 m L的兔多抗血清。针对腹水单抗及多抗血清进行了一系列特性分析,结果显示,5株抗体效价基本上在1∶10^6以上;间接ELISA测定6株抗体与酪蛋白、乳白蛋白和β-乳球蛋白基本无交叉反应,抗体特异性良好;抗体为IgG1亚类,2B12抗体亲和力优于其他抗体。多抗血清效价可达到1∶10^7以上,抗体也具有一定的特异性。 展开更多
关键词 蛋白 克隆抗体 多克隆抗体 特性
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