白内障术后后囊浑浊的防治和抗人晶状体上皮细胞单克隆抗体的制备

目的制备可特异性识别人晶状体上皮细胞的单克隆抗体,筛选特异性强亲和力高的克隆。方法以原代培养人晶状体上皮细胞作为免疫原,使用杂交瘤技术制备抗人晶状体上皮细胞单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb)。小鼠腹腔接种杂交瘤细胞制备腹水,用免疫荧光、免疫组化法对其特性进行鉴定。结果获得了1株稳定分泌抗人晶状体上皮细胞McAb的杂交瘤细胞系,其亚类为IgM。免疫荧光和免疫组化检测结果显示,此McAb与人晶状体上皮细胞膜上的抗原反应,与人眼其他组织呈阴性反应。结论所获抗体可特异性识别人晶状体上皮细胞,可进一步制备免疫导向药物,用于白内障术后后囊浑浊的治疗。

抗白细胞介素-5单克隆抗体治疗哮喘效果的Meta分析

目的:系统评价抗白细胞介素-5(IL-5)单克隆抗体治疗哮喘的临床效果。方法:在PubMed、Embase和Cochrane对照试验中央注册中心检索有关抗IL-5单克隆抗体治疗哮喘的随机对照试验文献,检索时间为截至2024年3月,对数据采用CMA 2.0软件进行Meta分析。结果:纳入21篇文献,共8717例患者,试验组4593例,对照组4124例。Meta分析结果显示,在第1秒用力呼气容积(FEV1)、哮喘生活质量问卷评分、不良事件发生情况方面,试验组优于对照组。结论:抗IL-5单克隆抗体治疗哮喘的临床效果较好,可改善患者FEV1、生活质量,且安全性较高。

抗TL1A单克隆抗体通过影响巨噬细胞极化减轻结节病肉芽肿形成的机制研究

目的 探讨抗TL1A单克隆抗体是否可通过影响结节病中巨噬细胞的极化水平,减轻结节病肉芽肿的形成。方法 采用随机分组法将32只C57BL/6小鼠分成空白对照组、结节病组、结节病+TL1A Ab治疗组和结节病+地塞米松治疗组(n=8)。通过肺组织病理学染色(HE染色)观察各组小鼠肺部肉芽肿的形成;通过流式细胞术检测各组小鼠脾脏单个核细胞(PBMC)中M1/M2型巨噬细胞的水平。提取各组小鼠股骨和胫骨内的原代骨髓源性巨噬细胞(BMDM),培养并分别诱导各组BMDM向M1或M2型巨噬细胞方向分化,使用流式细胞术与qPCR分别测定各组小鼠BMDM中M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞的细胞数目和相关因子的mRNA表达情况。结果 与结节病组相比,结节病+TL1A Ab组小鼠肺组织中肉芽肿的数目明显减少(P<0.001)。相较于空白对照组,结节病组PBMC中M1型巨噬细胞水平增高(P<0.001),给予TL1A Ab后可逆转这一现象(P<0.001);结节病+TL1A Ab组PBMC中M2型巨噬细胞的水平高于结节病组(P<0.001)。各组小鼠BMDM经诱导分化后,结节病+TL1A Ab组M1型巨噬细胞极化水平较结节病组下降(P<0.001);而TL1A Ab组M2型巨噬细胞极化水平高于结节病组(P<0.001)。结论 抗TL1A单克隆抗体通过调控结节病中巨噬细胞的极化水平而抑制结节病中的肉芽肿性炎。

抗兔晶状体上皮细胞单克隆抗体的制备及特异性研究

目的 为防治白内障术后因晶状体上皮细胞增殖而产生的后发性白内障 ,制备抗家兔晶状体上皮细胞的单克隆抗体 ,从而更进一步以其为载体与细胞毒素偶联 ,特异性抑制晶状体上皮细胞生长而不损伤眼内其他组织 ,为防治后发性白内障奠定实验基础。方法 应用家兔晶状体上皮细胞与佐剂混合 ,免疫 BAL B/ c小鼠 ,通过聚乙二醇 (PEG -40 0 0 )使被免疫的小鼠脾细胞与同系小鼠骨髓瘤细胞融合 ,细胞融合之后 ,经过 HAT选择性培养液培养 ,用间接免疫荧光抗体法和免疫组化 SP法检测杂交瘤细胞上清夜中的抗体 ,筛选出呈阳性反应的杂交瘤细胞 ,再经 3次甲基纤维素克隆化培养以保证单克隆抗体的特性 ,最后将此单克隆抗体对人眼组织进行交叉反应。结果 被免疫的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞 SP2 /0通过 PEG-40 0 0融合后 ,经 HAT选择性培养 ,16 d后杂交瘤细胞克隆产生 ,对其进行 3次甲基纤维素培养基克隆化培养 ,获得检测抗体阳性率达 10 0 %的克隆系为一株。用免疫组化 SP法检测此抗体仅对兔晶状体上皮细胞抗原呈阳性反应 ,而对兔眼角膜、虹膜、人眼角膜、虹膜、晶状体上皮细胞呈阴性反应。结论 成功制备了抗家兔晶状体上皮细胞的单克隆抗体 ,此单克隆抗体具有较强的特异性 ,对人眼组织无交叉反应 。

柔红霉素与抗兔晶状体上皮细胞单克隆抗体偶联物的制备及其免疫学特性

目的 评价柔红霉素(daunorubicin,DNR)与抗兔晶状体上皮细胞单克隆抗体免疫偶联物对兔晶状体上皮细胞的免疫特异性。方法 采用过碘酸盐氧化法将抗兔晶状体上皮细胞单克隆抗体LM_1与柔红霉素结合;Bradford蛋白检测法和紫外吸收光谱法检测偶联物中LM_1与DNR的克分子比;ELISA法检测LM_1与DNR偶联后抗体活性的变化;免疫组织化学法检测偶联物在兔眼组织的免疫特异性。结果 偶联物表现出单抗LM_1和DNR的生物学活性及紫外光谱特征,偶联产物中DNR与LM_1的克分子比约为12∶1,即每个抗体分子可以携带约12个药物分子。偶联后抗体的活性保持为原有活性的76.5％以上。免疫组化显示偶联物仅在兔晶状体上皮细胞呈阳性表达,在其他眼组织为阴性表现。结论 抗兔晶状体上皮细胞单克隆抗体与柔红霉素的免疫偶联物在体外可以选择性地结合到兔晶状体上皮细胞并保持特异的免疫活性。

用单克隆抗体显示小鼠胚胸腺上皮细胞的分化

以小鼠胸腺基质细胞单克隆抗体ＭＴＳ６、５、２０、３３，用免疫酶法观察了小鼠胚（１２～１９ｄ）胸腺上皮细胞的不同亚类和分化。第１２天胚胸腺原基中有少数细胞开始显示ＭＴＳ６弱阳性反应。第１３ｄ胚胸腺皮质中有些胸腺上皮细胞显示ＭＴＳ５阳性。第１５ｄ胸腺皮质和髓质中有些胸腺上皮细胞开始呈ＭＴＳ２０阳性反应。第１７ｄ胚髓质中可见少数胸腺上皮细胞开始呈ＭＴＳ３３阳性反应。第１９ｄ胚ＭＴＳ５、６阳性反应的胸腺上皮细胞分布于皮质和髓质，并相连成网状，ＭＴＳ２０显示出皮质、髓质中一些散在的胸腺上皮细胞呈阳性反应，而ＭＴＳ３３仅在髓质中显示出少数体积较大的胸腺上皮细胞。第１２～１９ｄ胚ＭＴＳ６、５、２０阳性细胞反应逐渐增强，ＭＴＳ３３阳性细胞反应稍有增强。本研究显示，在鼠胚胸腺发育不同阶段，胸腺上皮细胞的不同亚类的分化有所差异，并提示胸腺上皮细胞的早期分化与Ｔ细胞的分化和发育有密切关系。

晶体上皮细胞单克隆抗体的动物实验研究第一部分晶体上皮细胞的培养

试图以免疫学方法制备特异性晶体上皮细胞膜单克隆抗体来抑制晶体上皮细胞的生长，以探索防止后发障的发生。共分四部分：１．晶体上皮细胞的培养；２．晶体上皮细胞膜单克隆抗体的制备；３．抗体的免疫学检测；４．所制备的单克隆抗体对动物和人的晶体上皮细胞的抑制作用。报告家兔晶体上皮细胞的原代和继代培养的方法并进行讨论。

晶体上皮细胞单克隆抗体的动物实验研究──第二部分 晶体上皮细胞膜单克隆抗体的制备

通过将免疫小鼠的脾细胞与HGPRT缺陷的NS－1骨髓瘤细胞进行细胞融合，并经HAT培养液对融合的杂交瘤细胞进行选择培养，再经二次限界稀释法对此杂交瘤细胞进行克隆化。采用无血清细胞培养技术，得到较高浓度而且较纯化的抗家兔晶体上皮细胞膜单克隆抗体。为进一步研究晶体上皮细胞的特性，以及利用免疫学方法抑制白内障术后晶体上皮细胞增殖奠定了基础。

碱性成纤维细胞生长因子受体抗体对人晶状体上皮细胞超微结构的影响

目的:为研究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblastgrowth factor,bFGF)及其受体抗体对人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLECs)超微结构的影响。方法:采用透射电镜观察正常HLECs及bFGF作用后及受体抗体阻断bFGF在HLECs作用的超微结构变化。结果:正常HLECs胞内较多的线粒体、粗面内质网和游离核糖体及少量微丝结构,核膜完整,染色质均匀。bFGF作用后表现为细胞膜完整,膜局部突起较多,线粒体和游离核糖体明显增多,基质较致密,细胞核附近有较多微丝结构,核膜完整,染色质均匀,核仁增大。bFGF受体抗体阻断作用后表现为细胞突起消失、细胞膜明显破坏,大量线粒体空化,嵴消失,基质减少,呈云雾状退化,内质网明显减少至消失,核膜破坏明显,有的细胞结构不清,趋于死亡。结论:bFGF对HLECs的促增殖作用可被FGF受体抗体所阻断。

Claudin-1单克隆抗体或可治疗肝细胞性肝癌

肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是全球范围内致死率排名第四的癌症,进展期HCC患者对现有治疗的反应和预后均不佳。Claudin-1(CLDN1)是一种膜蛋白,除了组成上皮细胞间顶侧膜的紧密连接复合物之外,也在如肝细胞基底侧膜等处表达为非连接性的claudin-1(non-junctional claudin-1,NJCLDN1),但NJ-CLDN1的作用及其在HCC中的作用尚不清楚。

抗Ⅳ型胶原抗体—金雀异黄素偶联物体外抑制晶状体上皮细胞增殖

目的:研究抗Ⅳ型胶原抗体-金雀异黄素偶联物对人晶状体上皮细胞抗增殖作用。方法:免疫组织化学法检测偶联物与人晶状体囊膜结合的特异性;倒置显微镜细胞形态学观察;丫啶橙染色荧光显微镜观察偶联物作用下细胞形态的变化;MTT法检测偶联物抑制晶状体上皮细胞增殖的作用。结果:偶联物既保持了抗体的免疫活性,又能高效的抑制体外晶状体上皮细胞增殖。结论:通过活性酯法制备的抗Ⅳ型胶原抗体-金雀异黄素偶联物体外具有高效的抑制晶状体上皮细胞增殖的作用。

抗CXCR4单克隆抗体对HL-60细胞粘附性及Bcl-2、Fas蛋白表达的影响

本研究通过观察抗CXCR4单克隆抗体 (12G5 )对HL 6 0细胞粘附性及Bcl 2、Fas蛋白表达的影响 ,探讨趋化因子SDF 1在维持HL 6 0细胞生存中的作用。培养HL 6 0细胞 ,并再与骨髓基质细胞共培养 ,在抗CXCR4单克隆抗体阻断SDF 1生物活性后 ,观察骨髓基质层上HL 6 0细胞的粘附情况并测定其粘附率 ;应用免疫组织化学技术检测HL 6 0细胞Bcl 2及Fas蛋白的表达。结果显示 ,12G5显著降低HL 6 0细胞的粘附率 ,与此同时Bcl 2表达下调 ,Fas表达上调。结论 :抑制SDF 1活性可一定程度地阻抑白血病细胞生存 ,促进凋亡。

抗重组人白细胞介素18单克隆抗体的制备与特性研究

目的 :获得有生物活性的小鼠抗重组人白细胞介素 18(rhIL 18)单克隆抗体。方法 :采用重组hIL 18免疫BALB C小鼠 ,应用杂交瘤技术 ,ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株并经多次克隆化。结果 :建立了 2株小鼠抗hIL 18单克隆抗体杂交瘤细胞 1C7和 1F5 ,染色体数目分别为 92条和 90条 ,所分泌的抗体分别为IgG2a和IgG1,轻链均为κ型 ,腹水IgG抗体经亲和层析法纯化后纯度达 95 %以上 ,效价为 1× 10 - 4和 1× 10 - 5,Westernblot显示 2株单抗均能特异性识别 18 3kD处的rhIL 18蛋白。 1C7单抗的亲和常数Ka=1 7× 10 5,1F5的亲和常数Ka=1 3× 10 5。 2株单抗识别不同抗原表位。结论 :制备的 2株单抗为进一步研究IL 18的分子结构、生物学功能及其与免疫相关性疾病的关系提供了实验材料。

抗白介素5单克隆抗体抑制哮喘小鼠嗜酸性粒细胞迁移

目的观察抗白介素5(IL-5)单克隆抗体对哮喘小鼠嗜酸性粒细胞(Eos)从骨髓到气道迁移的影响。方法15只雄性C57BL/6小鼠。常规法复制哮喘,并在每次卵白蛋白(Ova)激发前2h鼻腔内滴入抗IL-5单克隆抗体,同时设立阴性对照组,即以生理盐水代替Ova和抗IL-5抗体。在末次抗原激发后12h测定支气管肺泡灌洗液(BALF)、外周血(PB)和骨髓(BM)中炎症细胞数以及肺组织内Eos数。结果Ova抗原激发后12h小鼠的BALF、PB和BM及细支气管和肺组织中的Eos数显著增加(P<0·01,P<0·05)。抗IL-5单克隆抗体则使上述变化显著减轻(P<0·05,P<0·01)。结论抗IL-5单克隆抗体能显著抑制哮喘小鼠嗜酸性粒细胞的迁移。

抑抗灵对杂交瘤细胞分泌单克隆抗体的影响

目的 :观察抑抗灵片乙醇和水相提取物对杂交瘤细胞分泌单克隆抗体的影响。 方法 :将复方中药抑抗灵的乙醇和水相提取物分别加入细胞培养液中 ,再分别加入分泌人 μ链单克隆抗体细胞株、分泌A组轮状病毒共同抗原单克隆抗体细胞株、分泌HCVC33单克隆抗体细胞株和分泌白色念珠菌胞浆抗原的单克隆抗体细胞株 ,在37℃含有 10 %CO2 培养 96h ,取培养上清测定单克隆抗体含量。 结果 :抑抗灵乙醇提取物在 8.1～ 32 .5g/L、水提取物在 46 .0～ 183.8g/L、水提取物浓缩液在 5 2 .1～ 2 0 8.2g/L范围内 ,对培养的杂交瘤细胞分泌单克隆抗体能力有明显的抑制作用。 结论 :中药抑抗灵提取物在一定的剂量范围内 ,有抑制抗体分泌细胞分泌抗体作用 ;抑抗灵的乙醇提取液的抑制作用似更加显著。

氟哒拉滨联合抗CD单克隆抗体和氨磷汀治疗高龄慢性淋巴细胞白血病

慢性淋巴细胞白血病(CLL)是一种恶性淋巴细胞增生性疾病,老年人多发。目前CLL治疗的主要问题是:①治疗完全缓解率低;②CLL伴随免疫系统功能紊乱和治疗药物的骨髓抑制、感染等副作用,高龄患者难以耐受。本研究报告我科成功治疗1例74岁高龄B细胞性慢性淋巴细胞白血病患者。在治疗中采用核苷酸还原酶抑制剂即氟达拉滨,联合抗CD20单克隆抗体方案,按标准治疗剂量给药,并根据患者个体情况调整给药时间,运用泛细胞保护剂氨磷汀进行辅助治疗。结果表明:1个疗程治疗后患者达到完全缓解,外周血的细胞计数和分类恢复正常;继续应用氨磷汀辅助治疗20天,患者贫血得到纠正,血红蛋白量稳定在120g/L以上,化疗药物的副作用和并发症均得到了有效的控制。结论:老年CLL患者化疗过程中,采用氟哒拉滨联合抗CD20单克隆抗体方案,按标准剂量给药,同时根据患者自身情况调整给药次序和给药时间,体现个性化治疗,获得满意疗效;氨磷汀可以有效减轻或克服CLL伴随的免疫系统功能紊乱,以及氟哒拉滨、抗CD20单克隆抗体引起的骨髓抑制、感染、发热等副反应。

抗CD44单克隆抗体A3D8对人白血病细胞系HL-60细胞增殖及分化的影响

目的 探讨抗CD4 4单克隆抗体A3D8对HL 6 0细胞增殖及分化的影响 ,寻找急性髓系白血病(AML)治疗的新靶点。方法 以AML细胞株HL 6 0为模型 ,通过观察细胞生长、形态学、表面分化抗原、细胞周期和细胞因子表达 ,以及应用硝基四氮唑蓝 (NBT)还原实验来研究抗CD4 4单克隆抗体A3D8对细胞增殖及分化的影响。结果 HL 6 0细胞高表达CD4 4 ;A3D8以浓度和时间依赖性方式抑制HL 6 0细胞生长。A3D8使HL 6 0细胞周期阻滞在G0 /G1期 ,CD11b、CD14表面抗原阳性率明显增高 ,细胞体积增大 ,核 /浆比例减小 ,核染色质聚集 ,NBT还原实验阴性 ,细胞表达粒细胞集落刺激因子mRNA ,呈现向单核细胞系方向分化。结论 A3D8可抑制HL 6 0细胞增殖 ,并诱导其向单核系细胞分化 ,CD4 4有可能成为AML治疗的新途径。

抗CD20单克隆抗体联合CHOP化疗方案治疗人B细胞淋巴瘤的实验观察

目的:以人B细胞淋巴瘤裸鼠皮下移植模型为基础,研究抗CD20单克隆抗体体内、体外活性,评价该抗体联合CHOP化疗方案治疗人B细胞淋巴瘤的有效性。方法:体内实验:建立人B细胞淋巴瘤裸鼠皮下移植模型。52只荷瘤鼠随机分为5组进行实验。用TUNEL法检测肿瘤凋亡,并绘制肿瘤体积曲线和裸鼠体质量曲线。体外实验:用CellTiter96 AQueous非同位素细胞增殖试验试剂盒检测抗CD20单克隆抗体、化疗和联合化疗对Raji细胞体外杀伤作用,并绘制剂量反应曲线。结果:体内实验:鼠抗人CD20单抗组及嵌合CD20抗体组均出现大量肿瘤细胞凋亡。联合治疗组疗效最佳,与其他组相比差异有统计学意义,P<0.05。化疗组及联合治疗组体质量下降明显,与其他组相比差异有统计学意义,P<0.05。体外实验:发现鼠抗人CD20单克隆抗体及嵌合型CD20抗体均可增加Raji细胞对化疗药物的细胞毒敏感性。结论:CD20单克隆抗体对B细胞淋巴瘤具有明显的抑制作用,可以诱发大面积肿瘤细胞凋亡,能提高肿瘤对化疗药物的细胞毒敏感性,且较常规化疗毒副反应小。

抗T淋巴细胞单克隆抗体治疗再生障碍性贫血的临床研究

用抗人Ｔ淋巴细胞单兔隆抗体ＳＭＵ３（抗ＣＤ３），ＳＭＵ８（抗ＣＤ８）治疗３２例再生障碍性贫血，基本治愈６例，缓解７例，明显进步１１例，无效８例，有效率７５％（２４／３２）。治疗前Ｔ淋巴细胞业群ＣＤ４／ＣＤ８比例倒置，淋巴细胞表面ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达增高；治疗后ＣＤ４／ＣＤ８比例恢复正常，ＨＬＡ－ＤＲ表达降低。无血清病及血细胞减少等严重毒副作用。

抗白细胞介素-8单克隆抗体乳膏治疗寻常型银屑病的临床研究

目的:观察新型抗白介素-8单克隆抗体乳膏外用治疗银屑病的疗效和安全性。方法:选取84例寻常型银屑病患者外用抗白介素-8单克隆抗体乳膏治疗8周,观察不良反应及皮损大小、颜色、肥厚、鳞屑等变化,以判断安全性和疗效。结果:治疗8周后,11例基本痊愈,41例显著改善,痊愈率和有效率分别为13.1%和61.9%;其中点滴型的痊愈率和混合状的有效率最高,而进行期的痊愈率和有效率均高于静止期;其中只有1例出现轻度不良反应。结论:抗白介素-8单克隆抗体乳膏治疗寻常型银屑病有较好的临床疗效和安全性。