非小细胞肺癌组织中端粒酶逆转录酶表达的临床研究

目的:探讨端粒酶逆转录酶在肺癌中表达及其临床病理意义。方法:采用兔抗人端粒酶逆转录酶抗体(Telomerasereversetranscriptase,TRT),SP免疫组化方法检测32例经福尔马林固定、石蜡包埋的原发性肺癌及10例正常肺组织和肺癌低转移细胞株95-C、高转移细胞株95-D中端粒酶逆转录酶的表达状况。结果:肺癌组织中端粒酶逆转录酶表达的阳性率为100%(32/32),TRT表达定位于胞浆和(或)细胞核,其中高表达率为65.6%(21/32),低表达率为34.4%(11/32)。10例正常肺组织TRT表达阴性。癌及癌旁呈反应性增生的细支气管粘膜上皮和肺泡上皮细胞以及间质淋巴细胞、浆细胞、组织细胞等均呈中～强度TRT阳性表达。低转移及高转移肺癌细胞株分别呈TRT低和高表达。TRT高表达与肺癌转移明显相关(P<0.01);但与肺癌病理组织学分型、分级均无明显关系(P>0.05)。结论:TRT表达可能与肺癌的侵袭转移活性相关。TRT在癌间质和癌旁呈反应性增生的正常组织及细胞的表达可能与干细胞的增殖分化相关。TRT蛋白的原位检测更为直观,有利于肺癌的临床病理诊断和预后评估。

顺铂和依托泊苷下调肺癌细胞端粒酶量及端粒酶逆转录酶的表达

目的 观察肺癌化疗的一线药物顺铂 (DDP)和依托泊苷 (VP16 )对肺癌细胞端粒酶量和端粒酶逆转录酶基因表达和蛋白质表达的影响 ,从而进一步探讨这些药物在肺癌治疗中的作用机理。方法用不同浓度的化疗药物处理肺腺癌A5 49细胞 ,用噻唑蓝 (MTT)和流式细胞术观察化疗药物 (DDP和VP16 )对肺癌细胞的生长抑制和细胞凋亡情况 ,分别用端粒重复扩增 (TRAP)法、逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)法和Western印迹杂交检测处理后端粒酶量 ,以及其催化亚基端粒酶逆转录酶 (hTERT)基因和蛋白质的变化。结果 DDP和VP16明显抑制肺癌细胞生长 ,并诱导细胞凋亡 ,有剂量和时间依赖性 .DDP和VP16明显抑制端粒酶量和hTERT基因及蛋白表达 ,尤其以高剂量 (VP16 2 0 0mg·L- 1,DDP5 0mg·L- 1)和低剂量 (VP16 2 0mg·L- 1,DDP 5mg·L- 1)作用的d 5更为明显。结论 VP16和DDP可以抑制肺癌细胞端粒酶量 ,这种作用可能是通过抑制端粒酶的催化亚基hTERT的表达来实现的。

人类端粒酶逆转录酶基因转染对足叶乙甙诱导Raji细胞凋亡的影响

探讨人类端粒酶逆转录酶 (hTERT)基因转入Raji细胞后足叶乙甙 (VP 16 )对细胞凋亡的影响。采用脂质体介导的转染方法将重组的hTERT基因转入Raji细胞 ,G4 18筛选 ;采用间接免疫荧光标记法及端粒酶聚合酶链反应 酶联免疫测定法检测hTERT蛋白表达水平和端粒酶活性的变化 ;姬姆萨染色及流式细胞仪观测细胞凋亡。结果发现 :转染hTERT入Raji细胞后 ,其表达hTERT的蛋白及端粒酶活性显著增加 (P <0.0 5 )。 10 μmol/LVP 16作用转染hTERT的Raji细胞 4 8h、72h对细胞生长抑制作用不如转染空载体组及未转染组明显 (P <0 .0 5 )。 10 μmol/LVP 16作用转染hTERT的Raji细胞 72h ,光镜下仅可见到很少量的细胞出现凋亡 ,流式细胞仪测定的细胞凋亡率 (4.34±1.0 3) %显著降低 ,分别与转染空载体组 (33.2 1± 3.12 ) %及未转染组 (31.6 3± 3.0 6 ) %比较 ,P <0.0 5。表明端粒酶活性过表达可使Raji细胞对VP

胰腺癌组织中人端粒酶逆转录酶与P-糖蛋白和bcl-2蛋白关系的研究

目的:研究人端粒酶逆转录酶(human telom erase reverse transcriptase,hTERT)与P糖蛋白与bcl2蛋白在胰腺癌组织中的表达及其关系和临床意义。方法:用链霉抗生物素蛋白生物素过氧化物酶复合物法检测hTERT,链霉抗生物素蛋白过氧化物酶法检测P糖蛋白,链霉抗生物素蛋白生物素标记法检测bcl2蛋白,并用Pearson关联系数(rp)研究彼此的关联性。结果:在胰腺癌组织中hTERT的阳性率为82%,而在正常胰腺组织和慢性胰腺炎组织中无表达(均为P<0.001);P糖蛋白在胰腺癌组织中表达的阳性率为53%,明显高于慢性胰腺炎组织、正常胰腺组织的22%、17%(均为P<0.05);bcl2蛋白在胰腺癌组织中表达的阳性率为58%,而正常胰腺组织和慢性胰腺炎组织均无表达(均为P<0.001)。在胰腺癌组织中,hTERT的表达分别与P糖蛋白和bcl2蛋白的表达有关联性(P<0.05,P<0.001);P糖蛋白和bcl2蛋白的表达也有关联性(P<0.001)。结论:hTERT、P糖蛋白与bcl2蛋白在胰腺癌组织中均有较高的表达,hTERT与P糖蛋白和bcl2蛋白的表达分别具有关联性,提示hTERT在胰腺癌细胞中具有耐药和抗凋亡的作用,检测hTERT和bcl2蛋白有助于鉴别胰腺癌和慢性胰腺炎,而且可通过检测hTERT来预测化学治疗的效果。

人端粒酶逆转录酶hTERT在肿瘤治疗研究中的进展

人端粒酶逆转录酶 hTERT 是构成端粒酶的组分之一,是端粒酶活性的必需和限速成分,其水平决定细胞端粒酶的活性。抑制 hTERT可降低端粒酶的活性,从而抑制瘤细胞生长。目前对hTERT 的研究已成为端粒酶研究的热点问题,已发现hTERT蛋白表达在肿瘤诊断中有重要意义,并制备了hTERT 抗体及应用核酶技术等来抑制hTERT蛋白的表达,抑制端粒酶活性,从而抑制肿瘤的生长。笔者综述了近年来关于hTERT在肿瘤治疗方面的进展。

抗角蛋白自身抗体对体外培养鳞癌细胞端粒酶活性的影响

目的 研究抗角蛋白自身抗体对鳞癌细胞端粒酶活性的影响 ,探讨抗角蛋白自身抗体抑制鳞癌细胞增殖的机制。方法 分别以 4mg/L、8mg/L、16mg/L抗角蛋白自身抗体作用于鳞癌细胞株Tca 3 6h ,应用端粒重复序列扩增 ELISA(TRAP ELISA)和非变性聚丙酰胺凝胶电泳方法检测鳞癌细胞端粒酶活性的改变。结果 TRAP ELISA结果显示体外培养的鳞癌细胞具有较高水平的端粒酶活性 (t=3 .53 7,P <0 .0 1) ,电泳结果显示鳞癌细胞PCR产物为显色较深的多个梯形条带 ;抗角蛋白自身抗体在浓度为 4mg/L、8mg/L、16mg/L时 ,TRAP ELISA显示鳞癌细胞株Tca端粒酶的活性显著降低 ,该抑制作用呈剂量依赖性 (r =-0 .83 58,P <0 .0 1) ,电泳结果显示梯形条带数量减少 ,信号减弱。结论 抗角蛋白自身抗体可以呈剂量依赖的抑制体外培养鳞癌细胞端粒酶的活性 。

抗人端粒酶逆转录酶单链抗体基因在烟草中的表达

构建了含抗人端粒酶逆转录酶单链抗体基因ScFv-hTERT的植物表达载体p1304-SH,通过农杆菌介导的叶盘法转化烟草.转基因烟草植株叶片总DNA的PCR,Southern b lot检测结果表明,ScFv-hTERT基因已整合进了转基因烟草植株基因组中;RT-PCR,SDS-PAGE分析证实目的基因已在烟草叶片中成功表达,竞争性ELISA的结果表明,表达的重组抗体与其抗原有良好的结合活性.

人端粒酶逆转录酶在子宫颈癌组织中的表达变化及其意义

目的研究端粒酶在宫颈癌及其癌前病变组织中的表达,探讨人端粒酶逆转录酶(hTERT)作为宫颈癌早期诊断标志物的可能性。方法采用RTPCR方法测定端粒酶mRNA在3株宫颈癌细胞、2株正常的人二倍体细胞、38例宫颈癌、16例宫颈上皮内瘤变(CIN)和20例正常宫颈组织中的表达水平;端粒重复序列扩增酶联免疫吸附法测定端粒酶活性;免疫组化链酶菌抗生物素蛋白过氧化物酶(SP)连接法检测3株宫颈癌细胞、2株正常的人二倍体细胞、21例正常宫颈组织、2例CIN和55例宫颈癌切片中hTERT蛋白的表达水平。结果hTERTmRNA在3株宫颈癌细胞中均表达,而在2株正常的人二倍体细胞中无表达,宫颈癌组织中的阳性表达率为81.6%,高于CIN的37.5%和正常宫颈组织的5.0%,差异有统计学意义(P<0.05);hTERTmRNA的阳性表达率与端粒酶活性有相关性(P<0.01);hTERT蛋白在3株宫颈癌细胞中有表达,2株正常的人二倍体细胞中无表达,正常宫颈组织中阳性表达率为4.8%、CIN为28.0%,均低于宫颈癌组织的65.5%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论宫颈癌组织和细胞中hTERTmRNA和蛋白阳性表达率均高于正常宫颈组织,其有可能作为宫颈癌早期诊断的标志物。

小鼠端粒酶逆转录酶基因重组腺病毒转染对树突状细胞功能的影响

用携带目的基因的病毒载体转染树突状细胞（DC）已广泛应用于抗肿瘤和诱导耐受等方面的实验研究和治疗。但用病毒载体转染DC过程中，存在病毒本身常能影响DC的抗原提呈细胞功能，有文献报道痘苗病毒载体和单纯疱疹病毒载体转染DC后可阻碍DC成熟和下调成熟DC表面的共刺激分子，因此，避免病毒载体干扰DC的功能十分重要。端粒酶逆转录酶（telomerase reverse transcriptase，TERT）作为广谱的肿瘤抗原对激发机体特异性抗肿瘤免疫反应具有一定作用，本研究在前期构建出携带小鼠端粒酶逆转录酶基因重组腺病毒载体（Ad—mTERT）的基础上研究其转染DC后对DC细胞表型及抗原提呈功能的影响。

不同环境条件和抗氧化剂处理对CmTERT表达的影响

该文通过实时荧光定量PCR分析了不同条件和抗氧化剂对蛹虫草(Cordyceps militaris)菌株YJ端粒酶逆转录酶(C.militaris telomerase reverse transcriptase,CmTERT)基因转录水平的影响.分析结果表明:适宜的培养温度(22℃和25℃)有利于菌株YJ菌丝体生长和Cmtert转录,蓝光抑制Cmtert转录;高温(28、30和33℃)不利于菌株YJ菌丝体生长和Cmtert转录,蓝光促进Cmtert转录;但在30℃时,在菌株YJ菌丝中Cmtert转录水平急剧升高,推测与端粒高温损伤的诱导有关.维生素C(VC)、维生素E(VE)、β-烟酰胺单核苷酸(NMN)和白藜芦醇对在菌株YJ中Cmtert转录的影响更为明显,而对在菌株TN中Cmtert转录的影响不明显.因此,若蛹虫草交配型不同,则受抗氧化剂影响的Cmtert转录水平也有差异.

双重靶向条件复制型腺病毒的包装及抗肿瘤作用

目的构建并包装以人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子调控E1A(CR2区缺失)蛋白表达的肿瘤细胞双重靶向条件复制型腺病毒(conditionally replicating adenovirus,CRAd),并探讨其对肿瘤细胞的抑制作用。方法采用PCR技术扩增hTERT启动子序列,将其克隆至pShuttle-E1A-E1Bp-E1B55K载体(E1A基因CR2区缺失)中,构建重组腺病毒质粒,并转染HEK293细胞进行病毒包装,PCR鉴定;CCK-8法检测重组腺病毒(CRAd.p-hTERT-E1A-E1Bp-E1B55K,简称CRAd.p)对肿瘤细胞的抑制作用。结果 hTERT启动子序列克隆正确;pShuttle-hTERT-E1A-E1Bp-E1B55K经KpnⅠ单酶切可见1 542bp和6 775bp两条电泳带,PCR鉴定得到250、1 148bp和298bp基因片段;CRAd.p经PCR扩增得到250、1 148bp和298bp基因片段,鉴定结果与预期完全相符;CRAd.p感染MCF-7、MDA-MB-231、HepG2和HTC-8细胞72h后与各自对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01);CRAd.p感染MDA-MB-231细胞后10～250MOI组细胞吸光度值与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),随着感染时间延长,抑制作用越发明显。结论成功获得对肿瘤细胞具有双重靶向和溶瘤作用的条件复制型腺病毒,为基因治疗的靶向性和有效性提供了可能。

pcDNA3．1-hTERT真核表达载体的构建及其抗肿瘤效应

目的:构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)真核表达载体pcDNA3.1-hTERT,并观察其对荷瘤小鼠的抗肿瘤效应。方法:用RT-PCR方法扩增出带有HindⅢ,BamHⅠ酶切位点的hTERT基因片段,与pGEM-TEasy克隆载体连接,筛选出阳性克隆,酶切获得目的片段,与pcDNA3.1载体连接,构建pcDNA3.1-hTERT表达载体。将真核表达载体pcDNA3.1-hTERT注射移植性H22肝癌模型C57BL/6小鼠,并设PBS组及转染空质粒pcDNA3.1组,观察3组的抗肿瘤效应。结果与结论:成功构建pcDNA3.1-hTERT真核表达载体。该载体中的hTERT基因片段全长为951 bp,可编码相对分子量为37 000、由317个氨基酸构成的多肽。该基因片段与GenBank公布的相应基因进行同源性比较,核苷酸序列的同源性为98.73%,编码产物的氨基酸序列的同源性为99.68%。该真核表达载体免疫荷瘤小鼠后,pcDNA3.1-hTERT组肿瘤生长受到抑制,且该组生存期分别长于PBS组及pcDNA3.1组(P<0.05);pcDNA3.1-hTERT组的IL-2、IFN-γ细胞因子水平也均高于PBS组与pcDNA3.1组(P<0.05)。提示该真核表达载体在受试动物体内可有效地诱导特异性抗肿瘤免疫应答。

抗人端粒酶蛋白亚基单域抗体制备和鉴定

目的 研制抗人端粒酶逆转录酶 (hTERT)蛋白亚基单域重组抗体。方法 以重组His taghTERT融合蛋白为抗原免疫小鼠 ,以逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)扩增小鼠脾细胞重链可变区 ;经克隆噬菌粒载体pCANTAB 5E及转染大肠杆菌建立噬菌体抗体展示文库 ,经过亲和性富集选择阳性克隆 ,并于大肠杆菌 (E .coli.HB2 15 1)中表达为可溶性单域抗体 ;Westernblot确定单域抗体结合特性。结果 以RT PCR扩增His taghTERT免疫小鼠脾细胞RNA ,得到 35 0bp小鼠重链可变区DNA片段 ;通过克隆及转染制备出噬菌体展示抗体文库 ,文库大小是 8× 10 4 ;经过抗原 抗体亲和性筛选 ,得到 4个克隆 ,并表达为可溶性单域抗体 (相对分子质量 16 0 0 0 ) ;WesternBlot分析显示 :其中 2个克隆的可溶性单域抗体可特异性结合His taghTERT融合蛋白 (相对分子质量 16 70 0 ) ,与His tag无关 ;与人癌细胞表达的天然hTERT蛋白 (相对分子质量 12 70 0 0 )分析亦显示其特异性结合能力。DNA序列分析证实可溶性单域抗体为小鼠抗体重链可变区VH基因编码。结论 利用噬菌体展示技术已初步制备出小鼠重链可变区编码的抗hTERT蛋白的特异单域抗体 ,为进一步探索其抑制端粒酶活性及抗肿瘤作用奠定了基础。

中药小柴胡汤及其成分药黄芩提取物的抗HIV作用

艾滋病是死亡率很高的严重传染病,在全世界传播,近几年来我国和北京亦发现了艾滋病病人和抗体阳性的感染者。AZT,ddI和 ddC 在临床从中药中寻找抗艾滋病病毒物质,可能是与艾滋病斗争的一种有希望的途径。传统中药方剂小柴胡汤由7味中药组成,已证明在体内外有抗病毒和免疫调节作用。中药黄芩是小柴胡汤中的一味药。其提取物在体外抑制 HIV-1逆转录酶(RT),在细胞培养内抑制细胞病变(CPE)。

人类寿命的极限

美国科学家在一篇论文中表示,人类寿命几乎不可能超过125岁。论文同时指出,人类的平均寿命最高可达115岁。也就是说,在最理想的状态下,人类平均寿命还有大约二十年的上升空间。2016年10月5日,《自然》杂志在线发表了美国阿尔伯特·爱因斯坦医学院有关人类寿命的研究成果。研究认为,虽然现代医疗、营养水平远胜往昔,但人类寿命仍然无法超过以往高寿人士创下的纪录。在科幻小说《三体》中,未来人类的寿命能延长到150—200岁。