人源化抗人肺癌单域抗体基因的构建、表达及活性分析

目的:构建人源化的抗人肺癌单域抗体hu3D3VH基因,在大肠杆菌中表达,对其蛋白活性进行分析。方法:采用CDR移植技术对mAb3D3的重链可变区进行人源化,通过重叠PCR获得hu3D3VH的基因。构建pET22(b+)/hu3D3VH表达载体,并转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下表达。表达产物通过Ni亲和层析柱纯化。采用间接ELISA和竞争抑制ELISA法进行活性分析。结果:通过重叠PCR获得序列正确的目的基因。目的蛋白以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上。纯化后,目的蛋白的纯度达95%以上。hu3D3VH具有与亲本抗体相同的抗原反应性,并能抑制mAb3D3与L342细胞的结合。结论:获得的人源化单域抗体hu3D3VH,保留了与mAb3D3相同的反应性和特异性,为进一步临床应用奠定了基础。

脾内一次性免疫莸取抗人体肺癌单克隆抗体

用人体肺腺癌细胞(LAX)脾内一次性免疫BALB/C小鼠后,将脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(NSO)融合,融合率为80％,对LAX细胞反应阳性率为20％。以酶联免疫吸附试验,免疫荧光试验和免疫组织化学试验,检测其与正常人体细胞,人体肿瘤细胞和人体肺腺癌的反应,发现获得的ALA-05单克隆抗体与正常人体细胞无交叉反应,与多株人体其他肿瘤细胞也无反应,而与人体肺腺癌则呈阳性反应,且为抗膜抗体。免疫扩散法证明其是IgG_(2a)。

熊果酸糖苷衍生物的合成及体外抗肿瘤活性的研究

该研究首先对熊果酸的28-COOH进行甲基化保护得熊果酸-28-羧甲酯(2),其次以熊果酸-28-羧(2)和葡萄糖、氨基葡萄糖为原料,合成了2种熊果酸衍生物3~4,且其结构通过了1H NMR,13C NMR,MS(ESI)的验证。3~4化合物体外抗人肺癌细胞(A 549)的活性筛选结果显示:浓度为1×10^-3 mmol/L^1×10^-6 mmol/L时,衍生物抗A 549的抑制率随浓度的升高而升高;当浓度为1×10^-3 mmol/L时,3~4的抑制率分别为(99.37±0.15)%、(99.40±0.15)%。