抗人膀胱癌双功能抗体的制备与鉴定

目的 :制备抗人膀胱癌双功能抗体 ( Bf Ab)并进行体外实验与鉴定。方法 :提取膀胱癌抗原 ,应用膀胱癌抗原通过杂交瘤技术制备抗人膀胱癌单克隆抗体 ,后者经胃蛋白酶水解后制备抗人膀胱癌单克隆抗体的 F( ab′) 2 片段。然后将该片段通过二次杂交制备杂交瘤 ,用其免疫新西兰白兔 ,血清经凝胶纯化后获抗人膀胱癌 Bf Ab,应用 ELISA和免疫组化方法进行鉴别。结果 :抗人膀胱癌 Bf Ab与抗人膀胱癌单克隆抗体呈阳性反应 ,与 BALB/C小鼠 γ球蛋白呈阴性反应 ;Bf Ab可以同时结合靶细胞的肿瘤抗原和效应细胞表面的触发分子 ,引发正常细胞对肿瘤细胞的防御机制。结论 :Bf Ab既能竞争性地与膀胱移行细胞癌抗原结合 ,又具有激活淋巴细胞的功能 。

抗人膀胱癌双功能抗体对荷瘤鼠的免疫治疗

目的 :建立抗人膀胱癌双功能抗体对荷人膀胱癌小鼠主动免疫的模型。方法 :采用抗人膀胱癌双功能抗体免疫 BALB/C小鼠 ,对照组采用生理盐水。免疫 3次后 ,于末次免疫后 1周 ,将新鲜的人膀胱移行细胞癌组织移植于小鼠肾包膜下 ,移植后第 2、4、6、8和 1 0天处死小鼠 ,取血清进行抗双功能抗体分析。移植瘤行组织学检查 ,观察宿主淋巴细胞浸润情况及瘤细胞可见率。结果 :实验组小鼠肾脏包膜下人膀胱癌细胞很快受到排斥 ,在移植后第 6天 ,淋巴细胞浸润即达高峰 ,而对照组在第 1 0天淋巴细胞浸润才达高峰 ;实验组在移植后第 6天瘤细胞可见率即明显降低 ,而对照组呈逐渐下降趋势 ;实验组抗双功能抗体为阳性 ,对照组为阴性。结论 :抗人膀胱癌双功能抗体作为抗原免疫小鼠后 ,能够排斥小鼠体内人膀胱癌细胞的生长。

抗人膀胱癌双功能抗体的临床应用

目的 :研究抗人膀胱癌双功能抗体的主动免疫治疗作用 ,为临床应用提供理论依据。方法 :用抗人膀胱癌双功能抗体主动免疫治疗膀胱癌病人 ,同时用生理盐水注射作为对照组 ,检测血清中人抗鼠抗体的产生情况、治疗前后各项体液免疫指标及 NK细胞活性变化。结果 :与对照组相比 ,治疗组病人的免疫指标上升。结论 :抗人膀胱癌双功能抗体有增强免疫力的作用 。

抗人膀胱癌抗VEGF双功能基因抗体制备及体外效应研究

目的 :研究制备抗人膀胱癌和抗血管内皮生长因子的双功能抗体 ,用以导向抑制肿瘤新生血管的形成。方法 :在制备抗人膀胱癌和抗血管内皮细胞生长因子单克隆抗体的基础上制备双功能抗体。结果 :双功能抗体的IC5 0为 10 - 9 5,抗血管内皮生长因子抗体的IC5 0为 10 - 8 9,抗人膀胱移行细胞癌单克隆抗体的IC5 0为 10 - 8 3。结论 :双功能抗体的有效率明显高于单克隆抗体。

抗人膀胱癌/抗VEGF双功能基因抗体对血管内皮细胞增殖的影响

目的 研究抗人膀胱癌 /抗 VEGF双功能基因抗体体外抗血管内皮细胞增殖的活性。方法 MTT法检测抗人膀胱癌 /抗 VEGF双功能基因抗体对血管内皮细胞增殖的活性。结果 抗人膀胱癌 /抗 VEGF双功能基因抗体可以明显抑制血管内皮细胞增殖。结论 抗人膀胱癌 /抗VEGF双功能基因抗体能通过抗肿瘤新生血管形成而发挥抗肿瘤作用 ,从而为膀胱癌的治疗提供了一种新的思路。

抗人膀胱癌/抗VEGF双功能基因抗体的动物实验研究

目的探讨抗人膀胱癌/抗VEGF双功能基因抗体对人膀胱癌生长及淋巴转移的影响。方法通过构建人膀胱癌裸鼠皮下移植瘤模型并注射双功能抗体,观察肿瘤生长及盆腔淋巴结转移情况,同时采用免疫组化法检测肿瘤微血管密度值及凋亡的肿瘤细胞指数。结果肿瘤大小实验组为(19.50±4.51),对照组为(57.62±8.31),两组比较差异有极显著性意义(P<0.01);肿瘤微血管密度实验组为(2351±207),对照组为(4356±548),两组相比差异具有显著性意义(P<0.05);凋亡指数实验组为19.25,对照组为9.31,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05);盆腔转移实验组无一只发生,而对照组为75.0%,两组比较,差异有极显著性意义(P<0.01)。结论抗人膀胱癌/抗VEGF双功能基因抗体对人膀胱癌具有良好的靶向性,能够通过抑制肿瘤微血管形成和加速肿瘤细胞凋亡,遏制实验性人膀胱癌的生长转移,为该抗体用于临床膀胱癌的治疗提供了一定的实验依据。

抗人膀胱癌/抗VEGF双功能基因抗体的免疫电镜定位研究

目的对抗人膀胱癌/抗VEGF双功能基因抗体进行免疫定位研究。方法采用免疫组化和免疫电镜前染色法进行观察。结果膀胱癌组90例,抗原检测阳性率867%(78/90);对照组30例,抗原检测阳性率为667%(2/30)。经免疫组化染色后,电镜观察膀胱癌抗原阳性表达部位为细胞膜或细胞浆中的颗粒,细胞模性结构、线粒体、粗面内质网可见到阳性反应沉积物,电子密度增浓,线粒体肿胀、变性、微管系统变化明显。膀胱癌组抗原阳性率明显高于对照组,电镜观察细胞内改变明显。结论抗人膀胱癌/抗VEGF双功能抗体对于膀胱癌高危人群的筛选以及膀胱癌的早期诊断具有重要临床意义,值得深入研究。

抗人膀胱癌/抗血管内皮生长因子双功能基因抗体的动物实验研究

目的 探讨抗人膀胱癌 /抗人血管内皮生长因子 (VEGF)双功能基因抗体对膀胱癌生长的抑制作用。方法 应用双功能基因抗体作用于荷瘤动物模型观察抑瘤作用 ,应用免疫组化技术检测体内生长肿瘤中微血管密度。结果 双功能基因抗体对体内生长的肿瘤有明显的抑制作用 ,经双功能基因抗体治疗的瘤体中微血管密度明显低于对照组。结论 双功能基因抗体能够抑制肿瘤血管生成 ,从而为膀胱癌的治疗提供一种新的辅助方法。

抗人膀胱癌/抗CD_3双功能基因抗体对LAK细胞增殖和细胞毒作用的体外研究

目的 探讨抗人膀胱癌 /抗 CD3双功能基因抗体对 LAK细胞增殖和增强细胞毒的作用。方法 采用 1 2 5I- Ud R释放试验等检测方法。结果 双功能抗体显著提高 LAK细胞与肿瘤细胞结合率 ,促进淋巴细胞增殖 ,加入双功能抗体后 ,L AK细胞对肿瘤细胞细胞毒性明显增加。结论 抗人膀胱癌 /抗 CD3双功能基因抗体可以大大促进 LAK细胞增殖和增加细胞毒性作用 ,为膀胱癌的治疗提供新的方法。

抗人膀胱癌/抗VEGF双功能基因抗体对原位种植人膀胱癌的影响

目的研究抗人膀胱癌/抗VEGF双功能基因抗体对裸鼠原位种植人膀胱癌生长和转移的抑制作用。方法建立人膀胱癌裸鼠皮下移植瘤模型,观察双功能基因抗体对肿瘤生长和转移的影响,并计数肿瘤内微血管密度。结果用药组与对照组比较,肿瘤生长和转移显著减慢和延缓,肿瘤内部微血管密度亦明显低。结论抗人膀胱癌/抗VEGF双功能基因抗体能够通过抑制肿瘤微血管的形成来遏制人膀胱癌的生长和转移,从而为该抗体进一步体内试验和临床应用提供了实验基础。

抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体的构建和表达

构建和表达抗CD3 抗Pgp微型双功能抗体 ,并测定该微型双功能抗体的生物学活性。采用PCR和overlapPCR方法构建抗CD3 抗Pgp微型双功能抗体 ,并用双脱氧终止法测定DNA序列 ;采用亲和层析法纯化该产物 ,并用Westernblot和分子排阻层析鉴定纯化产物 ;采用免疫荧光法、放射免疫分析法鉴定纯化产物与靶细胞的结合活性。DNA序列测定结果表明 :抗CD3 抗Pgp微型双功能抗体已构建成功 ,表达可溶性产物的产量达 2mg L以上 ,纯化产物中二聚体的比例达 90 % ,具有与Jurkat(CD3 + )和K5 62 A0 2细胞 (Pgp+ )结合的活性 ,与抗CD3ScFv及抗PgpScFv的亲合常数相当。成功地构建了抗CD3 抗Pgp微型双功能抗体 ,并获得高效表达 。

抗CD3 ScFv/抗PgP ScFv双功能抗体的高密度发酵与纯化

在发酵罐上采用高密度发酵的方法对抗CD3ScFv/抗PgP ScFv双功能抗体工程菌进行了培养,其发酵结果是每升发酵液的湿菌菌重150g,OD550值达121;以免疫亲和层析的方法纯化抗CD3ScFv/抗PgPScFv双功能抗体,经计算抗体产量可达146.6mg/L;间接免疫荧光测定结果经流式细胞仪分析计算表明,抗CD3ScFv/抗PgP ScFv双功能抗体能与Jurkat细胞及K562/A02细胞特异性结合。

抗肝癌单链双功能抗体在Hut-78细胞系中的表达及体外杀伤活性

目的 用携带分泌型抗肝癌单链双功能抗体基因(sFv TNF α)的重组逆转录病毒感染T细胞淋巴瘤Hut 78细胞 ,使其表达并分泌针对人肝癌细胞的sFv TNF α融合蛋白 ,观察转导的T细胞对体外培养肝癌细胞的杀伤作用 .方法 用感染性重组病毒产生细胞C2 2 (PA317/PST)产生的病毒上清转导人T细胞淋巴瘤Hut 78细胞 ,采用PCR、RT PCR、细胞原位杂交及免疫组织化学染色等方法 ,对转导的Hut 78细胞进行DNA、mRNA及蛋白水平的分析 .转导的Hut 78细胞分别与SMMC 772 1、HHCC共培养 ,MTT法检测Hut/PST细胞表达产物对两种肝癌细胞的杀伤作用 .结果 PCR、RT PCR结果显示转导Hut细胞中扩增出外源目的基因对应的电泳条带 .neo基因探针原位杂交显示转导细胞质内有较强的紫蓝色阳性反应信号 ,其阳性率约为 95 % .鼠抗人TNF α多克隆抗体免疫组织化学染色 ,转导细胞质内有明确的棕黄色阳性反应信号 .MTT法检测结果 ,分泌型抗肝癌单链双功能抗体对体外培养的两种肝癌细胞的杀伤率分别为 15 .4 %和2 6 .5 % .结论 分泌型抗肝癌单链双功能抗体基因可以在T细胞中整合并稳定表达 ,其分泌的表达产物对两种肝癌细胞均具有一定的亲合活性 ,并且具有一定的体外杀伤作用 .

抗表皮生长因子受体与抗CD_3双功能抗体的制备及细胞毒的研究

制备抗ＥＧＦ┐Ｒ与抗ＣＤ３双功能单克隆抗体及其细胞毒的研究方法通过杂交－杂交瘤技术制备双功能单克隆抗体细胞株Ｅｔ２２，并了解其与ＩＬ┐２联合体外激活ＰＢＬｓ细胞对Ａ４３１癌细胞的杀伤活性。结果ＩＬ┐２激活的ＰＢＬｓ和未经ＩＬ┐２刺激培养的ＰＢＬｓ对靶细胞Ａ４３１的杀伤活性，效靶比为２０∶１的条件下，杀伤率分别为４９％，１７％。Ｅｔ２２双功能抗体介导ＩＬ┐２激活的效应细胞杀伤靶细胞（Ａ４３１）为７５％。

免疫亲和层析法纯化抗Pgp/抗CD3双功能抗体

目的:制备可以纯化抗Pgp/抗CD3双功能抗体的免疫亲和层析柱。方法:纯化的抗抗CD3ScFv单克隆抗体与预活化的Sepharose4B偶联制成免疫亲和层析柱,采用自制的免疫亲和层析柱纯化由摇瓶发酵获得的抗Pgp/抗CD3双功能抗体,采用间接免疫荧光法测定抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体能与Jurkat细胞及K562/A02细胞特异性结合活性。结果:成功地制备了可以纯化抗Pgp/抗CD3双功能抗体的免疫亲和层析柱,采用此柱纯化的抗体与Jurkat细胞及K562/A02细胞特异性结合的活性与带有E-tag纯化标志的抗体基本一致。结论:此介质可以替代价格高昂的E-tag亲和层析介质在纯化Pgp/抗CD3双特异双功能抗体中的应用,同时还可以避免由于E-tag纯化标志而带来的免疫原性问题,此项研究工作为抗Pgp/抗CD3双功能抗体将来在临床应用奠定了基础。

抗人喉癌/抗CD_3双功能抗体的制备及对Hep-2细胞株的杀伤作用

目的 :研究制备抗人喉癌 抗CD3 双功能抗体 ,探讨喉癌主动免疫治疗。方法 :以化学方法将人喉癌及抗CD3单克隆抗体交联为双功能抗体 ,进行介导对肿瘤细胞的杀伤作用。结果 :该双功能抗体介导效应细胞对靶细胞的杀伤率高于抗CD3 的介导作用 ,并随着效靶比的提高而升高。结论 :采用化学交联法制备的抗人喉癌 CD3 双功能抗体具有潜在的临床应用价值。

抗CD3/抗B细胞肿瘤的双功能小抗体的抗肿瘤活性研究

为评价已研制的抗CD3/抗B细胞肿瘤 (CD2 0 + )双功能小抗体的生物学活性 ,采用多种实验方法在体内外对其进行研究。结果表明 :该型双功能小抗体能同时与Ju rkat和Daudi细胞结合 ,并交联两种细胞形成玫瑰花环。它与Jurkat(CD3+ )和Daudi细胞 (CD2 0 + )的结合的亲和常数Ka分别为 3.2× 10 8M- 1和 8.9× 10 8M- 1。在体外该抗体能激活并介导T细胞杀伤Daudi细胞。裸鼠体内分布实验结果表明 :该型抗体可在移植瘤部位富集 ;在人B淋巴瘤裸鼠移植瘤腹腔模型中 ,联合人的PBMC和IL 2 ,该抗体可以杀灭人B淋巴瘤细胞 ,明显延长荷瘤裸鼠的生存时间。

肝癌细胞凋亡-抗HBx/抗CD3双功能抗体介导细胞毒性T细胞对靶细胞的杀伤

研究发现，针对效应细胞毒性T淋巴细胞[CTL]表面受体[TCB／CD3复合物]与肿瘤相关抗原的双功能抗体能有效地介导CTL对靶肿瘤细胞的杀伤。为此，我们通过细胞融合法经流式细胞仪[FACS]无菌分选建立了抗HBx／抗CD3二次杂交瘤，应用该二次杂交瘤所分泌的双特性单克隆抗体[BsAb]介导CTL在LTNM4裸鼠人肝癌模型进行了实验性治疗研究。

抗乳腺癌导向药物-人源化抗p185单链抗体/hIL-2双功能融合蛋白的制备

肿瘤特异性载体结合细胞毒物质构成的导向制剂曾被称为生物"魔弹".抗体作为载体的主体一直是人们研究的重点,虽然仍面临诸多困难,如抗抗体反应及抗体大分子难以穿越微血管壁等,但随着技术进步正逐步得到解决.近年来,用于乳腺癌治疗的Herceptin及用于白血病及胃肠道肿瘤的Gleevec等导向制剂,相继获得FDA批准,已在国内外上市,它们的临床疗效获得了人们的极大重视,显示了良好的应用前景.本文报道一新抗乳腺癌导向药物,即人源化抗原癌基因HER-2/neu(c-erbB2)产物p185单链抗体/人白细胞介素2(hIL-2)双功能融合蛋白的研究工作.