抗体药物偶联物在人表皮生长因子受体2低表达胃癌中的应用研究进展

胃癌(GC)是极具异质性和侵袭性的消化系统恶性肿瘤之一,传统化疗药物及曲妥珠单抗等人表皮生长因子受体2(HER2)靶向药物在GC的治疗过程中仍然存在耐药性发生率高、毒副作用大、患者耐受差等缺点。因此,研发更为有效的抗GC药物势在必行。目前针对HER2的新型靶向药层出不穷,但在某些情况下无效或产生耐药,这与HER2在某些GC细胞中低表达有关,HER2低表达(HER2 IHC1+或IHC2+/ISH-)约占全部类型的40%~60%,但在临床实践中,这类患者仍被报告为HER2阴性GC。因此准确检测HER2表达状态对于确定可能受益于曲妥珠单抗治疗的患者至关重要。抗体药物偶联物(ADC)的出现为HER2阳性GC提供了新的治疗选择,凭借其精准高效的抗肿瘤作用,有望在未来替代传统GC化学疗法。近期有研究发现ADC可能在HER2低表达GC中具有潜在抗肿瘤活性,相关临床研究正在评估其在HER2低表达GC治疗中的有效性和安全性。本文就靶向治疗时代ADC在HER2低表达GC患者中的应用和最新研究进展作一综述,并讨论HER2靶向ADC在应用和研发过程中面临的挑战。

犬表皮生长因子受体2胞外Ⅳ区(her-2-ECD-4)抗原表位分析及单克隆抗体制备

为了制备犬her-2-ECD-4单克隆抗体并验证其识别的抗原序列,本研究利用TMHMM server2. 0、SWISS-MODLE、Prot Param及Sopma等分析软件,对该区域蛋白序列进行了理化性质分析、一级结构分析、二级结构分析以及三级结构建模。综合以上各数据得出犬her-2-ECD-4可能的抗原表位为ecq(56-58)、ykd(80-82)、fade(106-109)、aeqras(134-139),在此基础上针对该区域制备了单克隆抗体,获得了3株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别为3-1B10、4-1B2、6-1C7,通过对杂交瘤细胞株的鉴定发现,3-1B10和4-1B2识别同一段抗原多肽,其中包括预测出的抗原表位ykd(80-82),它们的亚类鉴定结果也相同,均为Ig G1。6-1C7识别的抗原多肽含有ecq(56-58)这个预测表位,其亚类鉴定结果为Ig M。另外,通过Western Blot分析,发现本实验制备的单克隆抗体与犬乳腺肿瘤细胞系CHmm中提取的蛋白具有良好的反应性。本研究为下一步开展犬乳腺肿瘤的肿瘤标志物筛查诊断试剂盒研制及靶向治疗提供了基础。

重组抗人表皮生长因子受体2单克隆抗体酸性异构体去除工艺的优化

目的优化重组抗人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)单克隆抗体纯化工艺中去除酸性异构体的条件。方法考察重组抗HER2单克隆抗体在阳离子交换层析工艺过程中的洗脱方式、预洗缓冲液pH、预洗缓冲液盐浓度、预洗体积、填料负载抗体量等条件对酸性异构体去除效果的影响,筛选最适工艺条件。采用最适条件对中试放大工艺的4批重组抗HER2单克隆抗体进行检测,验证其适用性。结果最适工艺条件为:纯化上样填料负载抗体量应≥60 g/L;在上样/淋洗后添加pH 8.0的20 mmol/L Tris-HCl及15 mmol/L NaCl(电导率为3.0 mS/cm),3倍柱体积预洗;预洗后用平衡缓冲液再平衡5倍柱体积,之后一步洗脱。该工艺条件能将目的组分含量从工艺优化前的53%提高至65%,酸性异构体含量从工艺优化前的35%降至25%以下,电荷分布与原研对照药一致;4批中试样品中抗体负载量≥60 g/L的3批放大验证结果达到原研对照药相关质量指标要求。结论优化的阳离子交换层析去除酸性异构体工艺简单有效、易操作,适用于中试放大工艺。

表皮生长因子受体单克隆抗体抗肺癌作用的研究

目的 实验观察表皮生长因子受体单克隆抗体(EGFR McAb)egf/r3对肺癌的治疗作用。方法 体外细胞增殖抑制实验采用MTT法,裸鼠体内移植瘤采用同时治疗(T1组)与延后治疗(T2组)两种方案。结果 egf/r3 McAb对高表达EGFR的SPC-A1 和A549 肺癌细胞体外均具有增殖抑制作用,并呈剂量依赖性;以SPC-A1 进行裸鼠皮下移植做体内实验,至治疗结束,T1 组50 % 成瘤(3/6),对照组100 % 成瘤(6/6);至实验结束,T1组与T2 组瘤体抑制率分别为75 % 与67 % ,瘤重抑制率分别为65 % 与47 % 。病理切片显示治疗组肿瘤组织局部坏死,电镜示线粒体凝缩、嵴断裂、溶解。结论 egf/r3 McAb 部分抑制肺癌细胞成瘤,明显延缓已成瘤肺癌生长,具有一定的抗肺癌作用。其体内抗瘤效果强于体外。

表皮生长因子受体单克隆抗体对辐射诱导肺腺癌细胞SPC-A-1的增敏作用

目的:探讨表皮生长因子受体单克隆抗体(C225)作为靶向治疗药物联合放射治疗对肺腺癌细胞系(SPC-A-1)的增敏作用,为临床综合治疗非小细胞肺癌提供理论依据。方法:SPC-A-1细胞体外传代培养6代以上,取对数生长期细胞进行实验。SPC-A-1细胞分为对照组(PBS)、照射组(4 Gy)、C225组(100 nmol.L-1)和照射+C225组(4Gy+100 nmol.L-1),Hoechst 33258染色后采用荧光显微镜观察细胞凋亡情况。SPC-A-1细胞分别给予0、2、4和8 Gy 6-MV X射线照射后继续培养72 h,收集细胞,分为照射组和实验组(照射+C225组),用流式细胞仪检测细胞凋亡率。SPC-A-1细胞分为对照组(PBS)、C225组(100 nmol.L-1)、照射组(8 Gy)和照射+C225组(8 Gy+100 nmol.L-1),作用48 h后,采用流式细胞仪检测细胞周期。结果:Hoechst33258染色后,照射+C225组凋亡细胞数明显高于照射组和C225组;细胞凋亡实验,实验组细胞凋亡率明显高于相应剂量照射组(P<0.05)。细胞周期检测,与对照组比较,C225组G0+G1期细胞增加(P<0.05),照射组G2+M期细胞增加(P<0.05),而照射+C225组G0+G1和G2+M期细胞均增加(P<0.05);与对照组比较,C225组、照射组及照射+C225组S期细胞均下降(P<0.05)。结论:C225对SPC-A-1细胞系有放射增敏作用,其机制可能与诱导细胞凋亡和细胞周期G0+G1期阻滞有关。

表皮生长因子受体家族单克隆抗体耐药机制的研究进展

表皮生长因子受体(EGFR)家族广泛存在于体内各种细胞中,其异常活化与多种人类上皮组织肿瘤的发生、发展密切相关,因此已成为肿瘤治疗的重要靶点之一。目前靶向EGFR家族的药物包括小分子酪氨酸激酶抑制剂和单克隆抗体(简称单抗)类药物,特别是单抗类药物近年来在临床上获得了广泛的应用。但是,越来越多的临床资料表明,大量患者对这类药物表现出原发性耐药或获得性耐药。目前靶向EGFR家族单抗类药物产生耐药的原因主要包括:受体结构改变、血管生成、多种受体酪氨酸激酶的活化、EGFR的亚细胞定位、EGFR下游效应分子的持续激活和EGFR家族生长因子表达的上调等。本文就靶向EGFR家族单抗类药物耐药机制的研究进展进行综述。

表皮生长因子受体及其单克隆抗体与口腔癌

表皮生长因子受体对于多种上皮源性肿瘤的发生、侵袭、转移有促进作用。通过实验已证明它的单克隆抗体对非小细胞肺癌等肿瘤细胞在体内外均有较好的抑制作用。口腔癌目前的发病趋势逐渐增高．本文对口腔癌和表皮生长因子受体及其单克隆抗体的关系进行综述。

抗表皮生长因子受体单克隆抗体引起离子紊乱的研究进展

抗表皮生长因子受体(EGFR)单克隆抗体对多种实体肿瘤的治疗具有重要意义,但这类药物可引起离子紊乱如低镁血症、低钙血症和低钾血症,早期症状因不够典型而容易被忽视。EGFR较多的表达于肾远曲小管和集合管,而抗EGFR单克隆抗体抑制了离子在肾髓袢升支粗段的重吸收,从而使镁离子在尿中的排泄增多,低镁血症继而引起低钙血症和低钾血症。不同的靶向药物以及不同肿瘤发生部位所出现的离子紊乱情形各有不同。低镁血症发生的风险与治疗时间、患者年龄及基础血清镁值相关。低镁血症倾向于可作为预后较佳的预测因素。3级或4级低镁血症需要延长靶向治疗间隔时间,同时静脉补充离子治疗,通常低镁血症是可逆的。该文参考既往的临床试验和研究,讨论离子紊乱的发生率、机制、危险因素、治疗以及疗效预测。

抗人表皮生长因子受体2单克隆及双特异性抗体在进展期胃癌中的研究进展

胃癌是消化系统最常见的恶性肿瘤。晚期胃癌患者的预后差,传统治疗的疗效亦差。抗人表皮生长因子受体2(HER2)的靶向治疗明显延长了HER2阳性晚期胃癌患者的生存期,因此,阻断HER2通路已成为HER2阳性晚期胃癌一线治疗的基础策略。TOGA研究为第一个获得晚期胃癌靶向治疗成功的临床研究,奠定了曲妥珠单抗在HER2阳性胃癌一线治疗中的基础地位。后TOGA时代,关于抗HER2靶向治疗在胃癌中的相关研究迅速增加。本文就目前抗HER2单克隆及双特异性抗体在进展期胃癌中的研究进展做一综述。

表皮生长因子受体单克隆抗体在结直肠癌治疗中作用的系统评价

背景:研究表明表皮生长因子受体(EGFR)信号通路可调节细胞的分化、增殖、迁移、凋亡以及血管发生。近年来,靶向EGFR的单克隆抗体拓宽了结直肠癌治疗的选择范围。目的:系统评价EGFR单抗联合结直肠癌治疗方案在结直肠癌治疗中的疗效和安全性。方法:从常用电子数据库中检索结直肠癌治疗方案联合与未联合EGFR单抗治疗结直肠癌的随机对照试验,分析反应率和不良反应发生率的合并比值比(OR),行亚组分析和敏感性分析,以漏斗图检测出版偏倚。结果:共7项随机对照试验(n=4186)纳入分析。联合与未联合EGFR单抗(治疗组和对照组)的反应率按意向治疗(ITT)分析分别为25.4%和17.6%(OR 3.36,95%CI:1.42～7.95),按方案(PP)分析分别为25.6%和18.0%(0R 3.32,95%CI:1.40～7.88),治疗组反应率明显优于对照组;两组3级以上不良反应总体发生率按ITT分析分别为71.2%和54.3%(0R 2.23,95%CI:1.74～2.86),治疗组3级以上不良反应总体发生率和皮肤损害、腹泻、低镁血症发生率均高于对照组。结论:EGFR单抗可明显提高结直肠癌,尤其是转移性或进展期结直肠癌患者对治疗的反应率,伴3级以上不良反应发生率增高。

维迪西妥单抗和术后化疗用于治疗人表皮生长因子受体2阳性的局限性尿路上皮癌患者的临床疗效分析

目的:初步探索人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,Her-2)阳性的局限性尿路上皮癌患者术后辅助使用维迪西妥单抗的效果。方法:回顾性分析32例术后辅助使用维迪西妥单抗的局限性尿路上皮癌患者(维迪西妥组)和104例术后使用传统化疗的患者(术后化疗组)临床资料,随访患者的复发情况,对比分析2组患者的复发率和不良反应率。结果:2组患者的基线数据和术前术后的相关数据没有统计学差异(P>0.05)。维迪西妥组患者术后1人复发,其复发率(9.4%)远远低于术后化疗组(20.2%)(P=0.007)。同时,维迪西妥组不良反应发生率(12.5%)低于术后化疗组(20.2%)(P=0.022)。结论:术后治疗的12个月内,维迪西妥组患者与接受传统化疗的患者相比,复发率和不良反应率相对更低,提示维迪西妥在降低尿路上皮癌患者术后复发率和延缓疾病进展方面有探究意义。

靶向HER2胞外结构域Ⅳ的单克隆抗体在乳腺癌中的应用进展

人表皮生长因子受体2(HER2)阳性乳腺癌侵袭性强且易转移,抗HER2靶向药物的应用能显著改善HER2阳性乳腺癌患者的预后。在已上市的HER2靶向药物中,靶向HER2胞外结构域Ⅳ的大分子单克隆抗体是治疗HER2阳性乳腺癌的基础靶向药物,主要包括曲妥珠单抗、伊尼妥单抗和马吉妥昔单抗。曲妥珠单抗用于乳腺癌全线治疗,循证医学证据充分,实践经验充足且安全性可控;伊尼妥单抗与曲妥珠单抗在HER2阳性转移性乳腺癌和新辅助/辅助治疗中疗效相似,且安全性可控;马吉妥昔单抗聚焦于携带CD16A-158F等位基因的患者,是晚期乳腺癌后线治疗的选择。临床上需根据患者具体病情选择最适合的药物。

抗人表皮生长因子受体2单克隆抗体CHO工程细胞株的构建、筛选及表达

目的构建抗人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)人源化单克隆抗体CHO工程细胞株,并进行筛选及表达。方法将抗HER2抗体重链基因Fd及轻链基因VL分别克隆至同一质粒p RH上,将构建正确的重组表达质粒命名为p HER2。通过脂质体法将p HER2转染至二氢叶酸还原酶(DHFR)缺陷型CHO细胞(CHO-DG44)中,筛选稳定表达的工程细胞株,进行ELISA及SDS-PAGE检测。同时对抗HER2抗体高表达细胞株进行batch模拟试验。结果从近10 000株克隆中筛选获得3株备选细胞株,命名为H6、H7和H9。细胞株培养上清表达的抗体仅能与重组HER2发生特异性结合;SDS-PAGE检测结果表明,于相对分子质量50 000和25 000处可见重链和轻链的目的蛋白条带。H6、H7和H9细胞株在简单的batch悬浮培养条件下周期约为1周,抗体水平随培养时间的延长而逐渐升高,H9细胞株表达水平最高,为0.52 mg/ml。结论本研究筛选获得的工程细胞株H9具有较高的抗HER2单克隆抗体水平,为靶向治疗HER2过表达的乳腺癌和胃癌等恶性肿瘤奠定了基础。

重组抗人表皮生长因子受体人源化单克隆抗体注射液对Bcap37人乳腺癌细胞生长的抑制作用

目的观察重组抗人表皮生长因子受体人源化单克隆抗体注射液(MIL41)对Her2高表达人乳腺癌细胞体内外的抑制作用。方法通过流式细胞仪分析人乳腺癌细胞Bcap37中Her2受体的表达量,CCK8法测定MIL41在体外对乳腺癌细胞Bcap37生长的抑制作用;在体内研究中采用人乳腺癌细胞裸鼠皮下移植瘤模型的建立评价MIL41对肿瘤生长的抑制作用。结果体外实验表明Bcap37为Her2受体过表达的人乳腺癌细胞,CCK8法检测结果显示MIL41对受试细胞Bcap37的生长有较强抑制作用。体内实验表明受试药MIL41对受试的人乳腺癌细胞Bcap37的裸鼠皮下移植瘤的生长有明显的抑制效应,同时呈现出良好的浓度依赖关系。分别给予3、6、12 mg/kg不同浓度的受试药,其瘤体积抑制率分别为33.7%、47.8%、59.0%,瘤重抑制率分别为29.6%、44.7%、55.6%。结论 MIL41对Bcap37人乳腺癌细胞在体内外的生长有较强的抑制作用。

奥曲肽和表皮生长因子受体单克隆抗体诱导人胃癌细胞凋亡

目的：定量检测奥曲肽（ＳＭＳ）和表皮生长因子受体单克隆抗体（ＥＧＦＲＭＣＡｂ）对人胃癌细胞系 ＳＧＣ－７９０１的诱 导凋亡作用。方法：将不同浓度的ＳＭＳ和ＥＧＦＲＭｃＡｂ与胃癌细胞共同孵育，用流式细胞术分析其细胞凋亡情况。 结果：ＳＭＳ ５ × １０－５和ＥＧＦＲＭｃＡｂ１：１００与胃癌细胞共同孵育７２ ｈ，胃癌细胞凋亡率分别为７．９６％和７．４９％，与对 照组（１．１９％湘比，有显著差异ｐ＜０．０５）。结论：诱导细胞凋亡是胃肠肽类激素发挥其抗肿瘤作用的重要途径之一。

抗人表皮生长因子受体单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

用人上皮癌细胞系A 431细胞作为抗原免疫BalB/c小鼠,制备七株抗人表皮生长因子受体的单克隆抗体的杂交瘤,这些杂交瘤经三次亚克隆后仍能稳定地分泌单克隆抗体。对其中四株杂交瘤分泌的单克隆抗体进行了鉴定。免疫沉淀放射自显影结果示单克隆抗体3、101和176均可识别A 431细胞膜抗原MW为170000的蛋白质即EGF受体。单克隆抗体59可以识别低分化鼻咽癌细胞膜上EGF受体。单抗3、176和59等可抑制EGF与受体的特异结合,而101和94则不能抑制EGF与受体的结合。 用Protein-A Sepharose CL4B纯化了单抗,纯化的单抗主要为IgG_1亚类。用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳对纯化的单抗进行了纯度测定。

表皮生长因子受体的单克隆抗体与肿瘤

表皮生长因子受体是一类细胞信号转导的重要因素,其过度表达已被证明与某些肿瘤存在密切联系。以表皮生长因子受体为作用靶点的单克隆抗体是抗肿瘤治疗中的一个新思路。

抗表皮生长因子受体（EGFR）单克隆抗体的研究

项目简述：本项目已申请专利两项：“一种人源化抗EGFR单克隆抗体的重组制备方法”（申请号：200610057985．7）；一种包含抗人表皮生长因子受体嵌合单克隆抗体的组合物（申请号：201110125554．0）。目前，本项目已完成抗体基因的设计、工程细胞的构建、哺乳动物细胞培养工艺和抗体分离纯化工艺的研究，已完成临床前药效学、药代动力学及急性毒理学试验，临床前稳定性试验、长期毒性试验、连续三批中试产品生产及检定、质量标准的建立与验证等即将完成。

人表皮生长因子受体2改变的晚期非小细胞肺癌患者临床治疗研究进展

人表皮生长因子受体2是非小细胞肺癌的驱动基因之一,与不良预后相关。在酪氨酸激酶抑制剂中,波奇替尼和吡咯替尼对该病效果佳;莫博替尼对外显子20插入突变的亲和力高,联合曲妥珠单抗的治疗可用于一线进展的患者。抗体偶联药物的效果是最鼓舞人心的,曲妥珠单抗-德鲁替康更是得到了前所未有的效果。虽然免疫检查点抑制剂不被推荐,但免疫联合治疗或许会为患者带来新的生机。

非天然氨基酸定点偶联抗人类表皮生长因子受体2-抗体偶联药物的药理学活性

目的:考察用非天然氨基酸定点偶联技术获得的均一性良好的抗人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)-抗体偶联药物(antibody drug conjugate,ADC),对9种不同HER2表达量的肿瘤细胞的增殖抑制活性,以及对5种异体移植的肿瘤小鼠模型的肿瘤生长抑制效果。方法:用QIFI试剂盒通过流式细胞仪检测HER2在BT-474、Calu-3、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-468、SK-BR-3、SK-OV-3、HCC1954、NCI-N87共9种肿瘤细胞中的表达。对9种肿瘤细胞进行培养,铺板过夜后分别加入梯度稀释的抗HER2-ADC、曲妥珠单抗-美坦新偶联物、AS269、pAF-AS269、紫杉醇5种药物,然后培养72 h或96 h,检测这5种药物对肿瘤细胞的增殖抑制活性。选择HER2阳性肿瘤细胞HCC1954、BT-474、SK-OV-3、NCI-N87和HER2阴性肿瘤细胞MDA-MB-468,分别接种到5~6周龄的BALB/c裸小鼠身上,待肿瘤长到一定体积后,分别注射抗HER2-ADC、曲妥珠单抗-美坦新偶联物、曲妥珠单抗、紫杉醇4种药物和空白对照磷酸盐缓冲液,考察药物的抑瘤效果。结果:流式细胞仪检测结果显示,SK-OV-3、NCI-N87、SK-BR-3、Calu-3、HCC1954、BT-474这6株肿瘤细胞的HER2表达量较高,每个细胞表面HER2受体数在43~80万个,比另外3株MDA-MB-231、MCF-7、MDA-MB-468肿瘤细胞的HER2表达水平高50倍以上。药物对9种肿瘤细胞的增殖抑制活性结果显示,抗HER2-ADC对HER2高表达的细胞有很强的抑制细胞生长活性,对SK-OV-3、NCI-N87、SK-BR-3、Calu-3、HCC1954、BT-474的半数抑制浓度分别为46、17、17、161、125、50 pmol/L。在动物体内药效试验中,抗HER2-ADC在所有HER2阳性表达的肿瘤模型中都表现了较强的呈剂量依赖的抗肿瘤活性,在NCI-N87异种移植肿瘤模型中,与曲妥珠单抗及曲妥珠单抗-美坦新偶联物相比,相同剂量的抗HER2-ADC表现出更好的抗肿瘤活性,其相对肿瘤增殖率约为二者的1/30至1/20,在HCC1954模型中表现出肿瘤的完全消退和治愈效果;抗HER2-ADC对HER2低表达MDA-MB-468肿瘤细胞移植瘤模型没有效果。与曲妥珠单抗-美坦新偶联物相比,抗HER2-ADC表现出相同或更好的抗肿瘤活性。结论:用非天然氨基酸定点偶联技术获得的抗HER2-ADC在细胞体外和动物体内实验中对HER2高表达的肿瘤具有明显的抑制效果。