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抗人转铁蛋白单链抗体的研制及部分性能研究
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作者 李兆隆 郭红玲 +4 位作者 常彩琴 涂政 肖卫民 王明鑫 王俭 《中国法医学杂志》 CSCD 2001年第S1期12-16,共5页
研制人转铁蛋白的单链抗体。以纯化人转铁蛋白免疫小鼠,制备小鼠脾脏 mRNA,RT-PCR 扩增重轻链可变区基因;Linker 连接及引入 Sfi Ⅰ和 NotⅠ酶切位点构建单链抗体基因;同载体 pCANTAB 5E 连接,转化 E.coliTG1细胞,以 M13K07挽救制备噬... 研制人转铁蛋白的单链抗体。以纯化人转铁蛋白免疫小鼠,制备小鼠脾脏 mRNA,RT-PCR 扩增重轻链可变区基因;Linker 连接及引入 Sfi Ⅰ和 NotⅠ酶切位点构建单链抗体基因;同载体 pCANTAB 5E 连接,转化 E.coliTG1细胞,以 M13K07挽救制备噬菌体抗体呈现文库,筛选抗原阳性重组噬菌体粒子(Panning);感染 E.coliHB2151菌株,制备可溶抗体并检测其性质;测定抗体基因序列并分析同源性及结构特征。制备出4株分泌抗人转铁蛋白可溶抗体的 E.coli HB2151菌株。抗体基因只由小鼠抗体的轻重链可变区基因构成,开放读码,无终止子,并紧接一末尾为一琥珀终止密码的 E 末端序列,其对应氨基酸序列 V_H 和 V_L 部分均遵从抗体可变区特征。实验证明,可把基因工程抗体技术应用于法医血清学,以制备新型抗体试剂。 展开更多
关键词 抗人转铁蛋白 单链体(ScFv) 噬菌体呈现体库 固相原选择
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鼠抗人转铁蛋白单链抗体基因的构建
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作者 李兆隆 郭红玲 +4 位作者 常彩琴 涂政 肖卫民 王明鑫 王俭 《刑事技术》 2001年第5期7-9,共3页
目的为了得到可经载体连接表达、并只由抗体可变区构成的单链抗体基因而进行本实验。方法经扩增得到的鼠抗人转铁蛋白抗体轻、重链可变区基因经凝胶电泳分离、离心柱纯化及定量,同能柔性折叠的一段短连接肽基因一起进行扩增拼接反应,而... 目的为了得到可经载体连接表达、并只由抗体可变区构成的单链抗体基因而进行本实验。方法经扩增得到的鼠抗人转铁蛋白抗体轻、重链可变区基因经凝胶电泳分离、离心柱纯化及定量,同能柔性折叠的一段短连接肽基因一起进行扩增拼接反应,而后在含限切酶位点的引物指导下扩增引入限切酶SfiI和NotI的酶切位点识别序列,产物以电泳鉴定、纯化和定量,再分别用SfiI和NotI酶切消化,最后再柱纯化。结果得到了携带可与载体连接的粘性末端的鼠抗人转铁蛋白单链抗体基因。结论两个不同的基因通过两端含互补序列的第三个基因片断可只经过扩增而无需DNA连接酶的作用而连接起来。对于抗体基因可由此而产生新的轻重链基因的组合,有可能产生性能更优异的抗体。 展开更多
关键词 扩增 拼接 限切酶消化 单链 SCFV 抗人转铁蛋白 法医学
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鼠抗人转铁蛋白抗体轻链与重链可变区基因库的制备
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作者 李兆隆 郭红玲 +4 位作者 常彩琴 涂政 肖卫民 王明鑫 王俭 《刑事技术》 2001年第3期8-10,共3页
以纯化的人转铁蛋白免疫小鼠,测其血清效价,合乎要求后杀鼠取脾脏并以异硫氰酸胍和酚的混合溶液将其匀浆,再以氯仿抽提、异丙醇沉淀和乙醇洗涤,所得总RNA以oligo(dT)纤维素离心柱分离纯化制备mRNA,使mRNA达到cDNA合成所需的浓度后,反转... 以纯化的人转铁蛋白免疫小鼠,测其血清效价,合乎要求后杀鼠取脾脏并以异硫氰酸胍和酚的混合溶液将其匀浆,再以氯仿抽提、异丙醇沉淀和乙醇洗涤,所得总RNA以oligo(dT)纤维素离心柱分离纯化制备mRNA,使mRNA达到cDNA合成所需的浓度后,反转录制备出cDNA,在合成的cDNA中加入轻、重链引物,扩增制备出小鼠抗人转铁蛋白抗体的轻、重链可变区基因库。 展开更多
关键词 基因工程 制备 免疫 小鼠脾脏 总RNA提取 体基因库 抗人转铁蛋白
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