上皮间质转化介导的表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂耐药机制及中医药治疗进展

肺癌是全世界肿瘤患者死亡的主要原因^([1])。约85%的肺癌患者为非小细胞肺癌(NSCLC),其中表皮生长因子突变率为40%~80%^([2])。目前表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)治疗已成为EGFR突变的NSCLC患者的一线治疗方法,但大多数患者会发生进展,这极大限制EGFR TKIs的获益^([3])。

结直肠癌中表皮生长因子受体与上皮-间质转化相关蛋白的表达及相关性

目的探讨结直肠癌中表皮生长因子受体(EGFR)与上皮-间质转化(EMT)相关蛋白E-cadherin(E-cad)、Vimentin表达的相关性。方法收集手术切除的结直肠癌组织标本107例,采用免疫组织化学方法检测癌组织EGFR、E-cad和Vimentin的表达,并分析其相关性。结果结直肠癌组织中EGFR的阳性表达率为45.8%(49/107),E-cad的阳性表达率为60.75%(65/107),Vimentin的阳性表达率为10.3%(11/107)。EGFR、E-cad及Vimentin表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移及Dukes分期相关(P<0.05,P<0.01)。EGFR与E-cad的表达相关(r=0.493,P<0.05)。结论 EMT参与结直肠癌的发展,尤其在促进肿瘤浸润转移中发挥着重要作用。EGFR的表达与EMT相关,可能诱导EMT的发生。

冬虫夏草对梗阻性肾病大鼠肾间质表皮生长因子及转化生长因子-β1表达的影响

目的探讨冬虫夏草对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的防治作用及可能机制。方法将大鼠分成3组:假手术组(SOR组)、单侧输尿管梗阻手术组(UUO组)和冬虫夏草治疗组(CST组)。无菌条件下UUO组及CST组均进行左侧输尿管结扎手术,而SOR组仅分离左侧输尿管但不结扎及剪断输尿管。于手术当天开始CST组予冬虫夏草菌粉,SOR组及UUO组予蒸馏水,均每天一次性灌胃。于术后第7、14、21、28天分别检测血尿素氮、血肌酐;梗阻肾组织行HE染色,ELISA测定表皮生长因子-β1(EGF)及Western blot检测转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达。结果 3组大鼠的血尿素氮、血肌酐值于各时间点的差异无统计学意义(P>0.05);CST组HE染色见肾间质纤维化程度较UUO组减轻;CST组肾组织TGF-β1的表达明显低于UUO组(P<0.05),EGF的表达明显高于UUO组(P<0.05)。结论冬虫夏草可能通过调节TGF-β1及EGF的表达而减轻输尿管梗阻引起的肾间质纤维化。

表皮生长因子受体在甲状腺乳头状癌中的表达及其与上皮-间质转化的关系

目的:研究表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)在甲状腺乳头状癌中的表达及其与上皮-间质转化的关系。方法:采用免疫组织化学EnVision法检测EGFR、上皮性钙黏附蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)在44例甲状腺乳头状癌组织、癌旁组织中的表达,并分析其与甲状腺乳头状癌临床病理参数的关系及EGFR与E-cadherin和vim-entin的相关性。结果:44例甲状腺乳头状癌中,EGFR、E-cadherin和vimentin阳性表达率分别为68.2%(30/44)、79.5%(35/44)和63.6%(28/44),与癌旁组织[6.8%(3/44)、4.5%(2/44)和9.1%(4/44)]比较,差异有统计学意义(χ2=35.35,P=0.00;χ2=50.78,P=0.00;χ2=28.59,P=0.00)。甲状腺乳头状癌组织中EGFR表达与E-cadherin呈负相关(r=-0.306,P=0.043),与vimentin呈正相关(r=0.595,P=0.000)。在伴淋巴结转移患者中和不伴淋巴结转移患者中EGFR、E-cadherin和vimentin表达差异均有统计学意义(χ2分别为7.79、5.81及4.32,P均<0.05)。结论:甲状腺乳头状癌中EG-FR表达升高伴随E-cadherin下调和vimentin上调,它们的变化可能与上皮-间质转化相关,并可能在甲状腺乳头状癌的淋巴结转移中起重要作用。

转化生长因子β1联合表皮生长因子诱导上皮向间质转化对人喉癌细胞株Hep-2侵袭能力影响的研究

目的探讨转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)联合表皮生长因子(epithelial growth factor,EGF)诱导上皮向间质转化对人喉癌细胞株Hep-2侵袭能力的影响。方法应用TGF-β1单独刺激和TGF-β1联合EGF刺激人喉癌细胞株Hep-2后24、48 h观察细胞形态学的动态变化。应用Transwell检测细胞侵袭能力及RT-PCR和Western blot技术检测细胞上皮钙依赖黏附蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)的表达。结果①TGF-β1单独处理48 h组和TGF-β1联合EGF处理24、48 h组均能刺激喉癌细胞株Hep-2发生细胞形态改变。②TGF-β1联合EGF处理组无论是24 h还是48 h,其Hep-2细胞的侵袭能力都明显强于相同时段TGF-β1单独处理组(P<0.05);TGF-β1单独处理48 h组细胞侵袭能力又明显强于对照组(P<0.05)。③TGF-β1联合EGF处理组E-cadherin的表达降低,而Vimentin表达却明显上升。结论 EGF能够协同TGF-β1诱导上皮向间质转化,从而使喉癌具有更强的侵袭能力。

间质表皮转化因子受体c-Met及磷酸化c-Met在肺腺癌中的表达及意义

目的研究间质表皮转化因子(c-Mesenchymal-epithelial transition factor,c-Met)及磷酸化cMet在肺腺癌组织中的表达,探讨其与肺腺癌发生发展的关系。方法选择经随访资料完整的肺腺癌患者组织标本40例,肺正常对照20例。采用免疫组织化学的方法检测c-Met和磷酸化c-Met(p-Met Tyr1234/1235)在正常肺组织与肺腺癌中的表达情况,并分析其表达与临床特征、病理的关系及两者的相关性。结果 c-Met及pMet在肺腺癌中的阳性表达率高于正常肺组织(P<0.05),两者与患者的年龄、性别、有无吸烟史、肿瘤大小、分化程度无关(P>0.05)。在有淋巴结转移的病例中,c-Met、p-Met皆表达增高(P<0.05)。c-Met与p-Met在肺腺癌组织中表达正相关(r=0.868,P<0.05)。结论 c-Met及p-Met与肺腺癌的发生发展有密切关系,对肿瘤的生物学行为及临床治疗有一定评估作用。

间质表皮转化因子通过PI3K/AKT/MMPs信号通路促进肺腺癌细胞的侵袭转移

间质表皮转化因子(mesenchymal to epithelial transition factor,MET)在多种癌症中异常表达,影响肿瘤的发生发展,但MET影响肺腺癌的分子机制并不明确。本研究收集3例淋巴结转移的肺腺癌组织(lung adenocarcinoma tissues,LAD)和3例无淋巴结转移的肺腺癌组织,用于微阵列基因芯片分析。结果显示,与无淋巴结转移的肺腺癌组织相比,有淋巴结转移的肺腺癌组织中有1 314条mRNAs表达上调,400条mRNAs表达下调。其中,MET在有淋巴结转移的肺腺癌组织中表达显著升高。随机选取8个差异表达基因,对收集的潍坊医学院附属医院2014年2月至2017年2月间有淋巴结转移的肺腺癌组织和无淋巴结转移的肺腺癌组织各30例通过qRT-PCR实验进行微阵列基因芯片验证。结果显示,所选mRNAs的表达与微阵列结果一致,验证了微阵列基因芯片结果的准确性。通过Western印迹进一步检测MET的表达。结果显示,相较于正常肺上皮细胞,肺腺癌细胞中MET的表达显著升高。利用质粒转染,敲减肺腺癌细胞A549中的MET,Transwell侵袭实验结果显示,敲减MET后肺腺癌细胞的侵袭能力明显降低;对各细胞组进行EGF(epidermal growth factor)处理并检测PI3K/AKT/MMPs信号通路,Western印迹检测结果显示,敲减MET后,肺腺癌细胞中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)和MMP-9的表达显著下降,AKT的磷酸化水平也显著下降。上述结果表明,MET可通过激活PI3K/AKT信号通路进而增加MMPs的表达促进肺腺癌的侵袭转移。

喉鳞癌中肝细胞生长因子和间质表皮转化因子的表达及意义

目的探讨喉鳞癌患者术后组织中肝细胞生长因子(HGF)和间质表皮转化因子(C-met)的表达特征,关注其在不同临床病理特征中的表达差别。方法 59例喉鳞癌的临床资料及术后的蜡块组织作为观察组,32例声带息肉的临床资料及术后的蜡块组织作为对照组,应用免疫组化方法检测两组中HGF和C-met的表达。结果两组中HGF和C-met的阳性率差异显著,观察组中HGF和C-met的阳性率与肿瘤的脉管侵犯和淋巴结转移相关,HGF的阳性率与分化程度相关,HGF和C-met呈正相关性。结论 HGF和C-met高表达是喉鳞癌发生和发展的重要促进因素。喉鳞癌中HGF和C-met可能具有内在协同作用,共同促进肿瘤的发生和进展。

肝素结合表皮生长因子对肝癌细胞迁移、侵袭以及上皮间质转化的影响

目的:探讨肝素结合表皮生长因子(HB-EGF)对肝癌细胞转移能力的影响。方法:划痕法观察HB-EGF对肝癌Huh7细胞的迁移能力的影响,Transwell侵袭实验检测HB-EGF作用48h后肝癌Huh7细胞的侵袭情况,RT-PCR检测上皮间质转化(EMT)分子标记物基因表达。结果:10μg/L的HB-EGF可以促进肝癌Huh7细胞的迁移,1μg/L和10μg/L的HB-EGF均可以促进肝癌Huh7细胞的侵袭。并且HB-EGF可以抑制E-钙黏蛋白表达同时促进Slug的表达。结论:HB-EGF可以促进肝癌Huh7细胞的迁移、侵袭以及EMT。

基于间质表皮转化因子/肝细胞生长因子信号通路靶向分子成像探针研究进展

间质表皮转化因子(c-Met)/肝细胞生长因子(HGF)信号通路在肿瘤发生、发展中起重要作用。分子成像可准确、无创地评价关键分子靶点在体表达水平和活化状态。基于c-Met的肿瘤靶向分子成像不仅可检测c-Met表达状态以筛选受益患者,还能监测治疗效果、评估预后,提高靶向治疗效果。本文就基于c-Met/HGF信号通路的靶向分子成像探针研究进展进行综述。

表皮生长因子对乳腺癌细胞上皮-间质转化的影响及钙蛋白酶的介导作用

目的:观察表皮生长因子(EGF)对人乳腺癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响,探讨钙蛋白酶(Calpain)在其中的作用。方法:常规培养雌激素受体(ER)阳性乳腺癌细胞MCF-7和ER阴性MDA-MB-231细胞,EGF诱导EMT并适时加入Calpain抑制剂Calpeptin预处理;划痕实验观察细胞迁移能力,蛋白印迹实验检测细胞FN和E-cadherin蛋白表达。结果:EGF(50μg/L)处理24 h和48 h均显著增加MCF-7和MDA-MB-231细胞迁移(P<0.01);EGF处理24 h、48 h、72 h时均能诱导MCF-7和MDA-MB-231细胞FN表达上调和E-cad表达下调(P<0.01),在48 h时具有最佳诱导效应;Calpeptin(10μmol/L)预处理能显著抑制EGF诱导的MCF-7和MDA-MB-231细胞迁移(P<0.01);48 h时, Calpeptin预处理能显著抑制EGF诱导的MCF-7和MDA-MB-231细胞FN表达上调和E-cad表达下调(P<0.01)。结论:EGF能诱导乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞EMT和迁移,该效应可能与Calpain的介导作用相关。

结肠高分化腺癌中肝细胞生长因子和间质表皮转化因子表达与增殖指数的关系

目的探讨结肠高分化腺癌中肝细胞生长因子(HGF)和间质表皮转化因子(C-met)的表达及其与肿瘤细胞增殖指数的关系。方法 78例结肠高分化腺癌组织作为观察组,结肠非肿瘤性黏膜组织21例作为对照组,应用免疫组化方法检测两组HGF、C-met和Ki67的表达。结果观察组HGF、C-met和Ki67表达的阳性率明显高于对照组,且三者表达均与肿瘤的最大径、浸润深度密切相关,HGF和C-met的表达均与肿瘤的淋巴结转移密切相关。相关分析显示HGF、C-met和Ki67之间均呈正相关。结论结肠高分化腺癌中HGF/C-met高表达与肿瘤生长及浸润有关,二者可以促进肿瘤细胞的增殖作用。

微小RNA-141靶向表皮生长因子受体调控乳腺癌上皮间质转化的作用机制研究

目的通过生物信息学筛选并探讨微小RNA-141(miR-141)、表皮生长因子受体(EGFR)在乳腺癌细胞中的表达水平及其对上皮间质转化、细胞迁移以及侵袭的影响。方法应用微阵列分析筛选差异表达的基因;采用加权基因共表达网络分析(WGCNA)和基因的蛋白质-蛋白质相互作用网络找出乳腺癌的关键基因;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测乳腺癌组织和细胞中的miR-141和EGFR表达;应用Targetscan和Miranda预测miR-141与EGFR的靶标关系,并通过双荧光素酶报告基因检测验证二者之间的靶向关系;使用Transwell实验测定评估细胞迁移能力;通过CCK-8法测定细胞活力;采用免疫印迹法(Western blot)检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达。结果基因表达热图及WGCNA分析结果显示,EGFR在肿瘤组织中显著高表达。经分子生物学验证乳腺癌组织和细胞中miR-141的表达下调,而EGFR的表达上调,差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测发现EGFR是miR-141的靶基因,在乳腺癌细胞中受miR-141表达的调控。细胞实验显示,miR-141过表达组可以抑制乳腺癌细胞迁移和增殖,而EGFR组则呈现出相反的结果,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-141过表达能够促进E-cadherin表达,抑制Vimentin的表达,差异有统计学意义(P<0.05),提示miR-141过表达能抑制肿瘤细胞的上皮间质转化的进程。结论miR-141通过靶向EGFR抑制乳腺癌细胞增殖并调节上皮间质转化的进展。

三阴性乳腺癌细胞中上皮间质转化与EGFR单抗治疗效果的相关性

目的研究三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)细胞株的上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)水平与西妥昔单抗药敏性的相关性。方法 (1)运用免疫印记法比较TNBC细胞株中EGFR、波形蛋白(vimentin)以及E钙黏蛋白(E-cadherin)的表达水平。(2)通过CCK8试剂比较不同细胞株对西妥昔单抗的敏感度。(3)采用Ⅰ型组蛋白去乙酰化酶抑制剂恩替诺特(ENT)逆转MDA-MB231的EMT。(4)观察ENT联合西妥昔单抗对MDA-MB231细胞活性的抑制作用。结果 (1)MDA-MB468细胞中E-cadherin的表达水平明显高于MDA-MB436及MDAMB231细胞;vimentin的表达水平明显低于MDA-MB436及MDA-MB231。(2)MDA-MB468对西妥昔单抗的敏感度明显高于MDA-MB231及MDA-MB436。(3)MDA-MB231的EMT能被Ⅰ型组蛋白去乙酰化酶抑制剂ENT逆转。(4)ENT单药显著抑制MDA-MB231细胞的活性,ENT联合西妥昔单抗较ENT单药对细胞生长的抑制作用更加显著。结论 TNBC细胞中,EMT与EGFR单克隆抗体西妥昔单抗的疗效可能相关。联合Ⅰ型组蛋白去乙酰化酶抑制剂ENT以及西妥昔单抗治疗可能是治疗TNBC的新方法。

抗转化生长因子β_1抗体对大鼠周围神经瘢痕中成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

周围神经损伤后修复是医学上的一大难题,由于周围神经解剖与功能上的特殊性,即使使用显微外科技术缝合,功能恢复一般只有70％左右.如何提高神经再生的速度与质量,寻找新的修复方法仍然是日前迫切需要解决的问题[1].神经吻合口处成纤维细胞大量增殖,导致组织纤维化和瘢痕形成是影响神经损伤后再生的主要因素.因此,控制损伤处成纤维细胞的过多增殖有利于神经的恢复.多种生长因子都能调控成纤维细胞的生物学行为,其中,转化生长因子β1（TGF-β1）被认为是伤口细胞外基质积聚、收缩和异常修复的关键性调控因素,在瘢痕形成过程中具有重要的作用.转化生长因子β1抗体（抗TGF-β1抗体）可以中和体内的TGF-β1,阻滞其发挥生物学效应.本研究建立了大鼠周围神经损伤模型,分离其中的成纤维细胞,测定了抗TGF-β1抗体对成纤维细胞增殖及Ⅰ型胶原蛋白的含量.

中药干预上皮间质转化逆转非小细胞肺癌EGFR-TKIs耐药的研究进展

肺癌是目前全球最常见的恶性肿瘤之一。据统计,在男性患者中,肺癌无论是发病率还是病死率均居于癌症中的第一位,而在女性患者中,其发病率和病死率分别居于第三位和第二位,是目前全球癌症死亡的主要原因[1]。其中非小细胞肺癌(NSCLC)是肺癌中最常见的组织学类型,约占肺癌总数的80%~90%[2]。

扶正抗癌方对Lewis肺癌荷瘤小鼠肺癌基因Bcl-2、抑癌基因Bax及血管内皮生长因子、表皮生长因子受体、金属蛋白酶表达的影响

目的:观察扶正抗癌方对小鼠Lewis肺癌抗转移机制的影响。方法:选取C57BL/6小鼠50只,雌雄各半,每只小鼠腋窝下接种肿瘤细胞0. 2 m L造模,24 h后,完全随机分为对照组、顺铂组、扶正抗癌方低、中、高剂量组,每组10只。分别给药21 d后取出完整肿瘤组织称重计算抑瘤率,同时用实时荧光定量PCR检测Lewis肺癌组织Bcl-2和Bax mRNA的表达,免疫组化检测Lewis肺癌组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达,用蛋白质印迹法(WB法)检测Lewis肺癌组织血管内皮生长因子(VEGF)、表皮生长因子受体(EGFR)的表达。结果:与模型组小鼠比较,扶正抗癌方药可以呈剂量依赖性抑制Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长,显著升高Lewis肺癌组织中Bax mRNA表达,降低Bcl-2 mRNA、MMP-9蛋白表达,与模型组比较,差异有统计学意义(P <0. 05),其中高剂量组在升高Lewis肺癌组织中Bax mRNA表达、降低Bcl-2 mRNA表达方面与顺铂组比较,差异有统计学意义(P <0. 05)。同时模型组Lewis肺癌组织中VEGF、EGFR表达显著升高,扶正抗癌方药可显著降低Lewis肺癌组织中VEGF、EGFR表达,与模型组比较,差异有统计学意义(P <0. 05),与顺铂组比较,无统计学意义(P> 0. 05)。结论:虽然扶正抗癌方总体上较顺铂作用偏弱,但依然能有效抑制肺癌细胞增殖,抑制肺癌细胞Bcl-2基因的表达,激活Bax的高表达,下调肺癌细胞中VEGF、EGFR、MMP的表达。

瘢痕疙瘩中心与边缘表皮层形态学和上皮间质转化相关指标表达的异质性研究

目的通过对比分析瘢痕疙瘩边缘、中心及正常皮肤E-cadherin、Vimentin、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)表达以及表皮层组织学上的差异,探讨瘢痕疙瘩侵袭性生长的原因。方法纳入2019年10月至2020年8月本院整形烧伤外科行瘢痕疙瘩切除手术的患者16例,共16个瘢痕疙瘩组织,以及需要进行部分正常皮肤切除的手术患者9例,共9个正常皮肤组织,使用HE染色观察瘢痕疙瘩边缘、中心及正常皮肤组织形态,免疫组化染色和Western blot检测E-cadherin、Vimentin、VEGF和HIF-1α蛋白在不同组织中的表达。结果瘢痕疙瘩表皮层存在明显异常及异质性,边缘表皮层呈细分枝状并明显深入真皮,形成较深的犬牙交错状表现,而中心表皮层增厚扁平;免疫组化及Western blot检测结果均显示:瘢痕疙瘩边缘和中心表皮层E-cadherin表达显著低于正常皮肤(P<0.05),且边缘显著低于中心(P<0.05);Vimentin、HIF-1α、VEGF表达显著高于正常皮肤(P<0.05),边缘显著高于中心(P<0.05)。结论瘢痕疙瘩边缘表皮呈分枝状并明显向真皮层延伸,上皮间质转化活跃,HIF-1α及VEGF高表达且微血管丰富,可能与瘢痕疙瘩边缘的侵袭性生长相关,HIF-1α可能是其中的关键因子。

TGF-β_1诱导表皮干细胞向间质细胞转化对增生性瘢痕形成的影响

目的:探讨转化生长因子-β1(Transform growth factor-β1,TGF-β1)对人表皮干细胞(Human epidermal stem cell,h ESCs)向间质细胞转化的影响及该现象对瘢痕增生的作用。方法:体外原代培养h ESCs,分析细胞表面标志物表达,不同浓度TGF-β1刺激后,MTT法检测细胞增殖活性,酶联免疫吸附法(ELISA)检测上皮-间质细胞转化(Epithelial-mesenchymal transformation,EMT)正相关蛋白:波形蛋白(Vimentin,Vim)、Smad3,负相关蛋白:E-钙粘着蛋白(E-cadherin,E-cad)。建立兔耳瘢痕模型,不同浓度TGF-β1干预,术后4周取材行组织形态学观察。结果:利用人包皮皮肤成功培养出h ESCs,表面标记物表达阳性。不同浓度TGF-β1可促进h ESCs增殖,使Vim、Smad3表达上调,E-cad表达下调,且在一定浓度范围呈剂量依赖,兔耳瘢痕标本显示各组均有瘢痕增生,TGF-β1刺激组更为明显。结论:h ESCs可发生EMT现象,该现象与瘢痕增生程度一致并可被TGF-β1诱导。推测瘢痕增生的实质可能为EMT。