注射抗CD20单克隆抗体后发生荨麻疹性血管炎一例

患者,女,61岁。全身皮肤泛发红斑1天。起病前7天因“红斑型天疱疮”应用抗CD20单克隆抗体治疗。用药后躯干、四肢泛发水肿性红斑。结合组织病理诊断为荨麻疹性血管炎。给予甲泼尼龙、氯雷他定等治疗,4天后患者皮疹逐渐消退,原有红斑部位可见色素沉着斑。随访8个月,皮疹未复发。

抗CD20单克隆抗体联合CHOP化疗方案治疗人B细胞淋巴瘤的实验观察

目的:以人B细胞淋巴瘤裸鼠皮下移植模型为基础,研究抗CD20单克隆抗体体内、体外活性,评价该抗体联合CHOP化疗方案治疗人B细胞淋巴瘤的有效性。方法:体内实验:建立人B细胞淋巴瘤裸鼠皮下移植模型。52只荷瘤鼠随机分为5组进行实验。用TUNEL法检测肿瘤凋亡,并绘制肿瘤体积曲线和裸鼠体质量曲线。体外实验:用CellTiter96 AQueous非同位素细胞增殖试验试剂盒检测抗CD20单克隆抗体、化疗和联合化疗对Raji细胞体外杀伤作用,并绘制剂量反应曲线。结果:体内实验:鼠抗人CD20单抗组及嵌合CD20抗体组均出现大量肿瘤细胞凋亡。联合治疗组疗效最佳,与其他组相比差异有统计学意义,P<0.05。化疗组及联合治疗组体质量下降明显,与其他组相比差异有统计学意义,P<0.05。体外实验:发现鼠抗人CD20单克隆抗体及嵌合型CD20抗体均可增加Raji细胞对化疗药物的细胞毒敏感性。结论:CD20单克隆抗体对B细胞淋巴瘤具有明显的抑制作用,可以诱发大面积肿瘤细胞凋亡,能提高肿瘤对化疗药物的细胞毒敏感性,且较常规化疗毒副反应小。

抗人CD20单克隆抗体治疗B细胞淋巴瘤研究进展

近年来 ,对B细胞淋巴瘤的抗原靶向性治疗已取得了巨大进展 ,出现了一种新的非常有发展前景的治疗方法 ,即以B细胞分化抗原CD2 0为靶抗原的单克隆抗体 (McAb)疗法。CD2 0是非糖基化的跨膜磷酸蛋白 ,分子质量为 35kD ,表达在大多数成熟B细胞表面 ,分化为浆细胞后 ,CD2 0表达消失。CD2 0可能参与B细胞成熟与分化的调节 ,作为钙离子通道发挥某些生物学作用。更为重要的是 ,95 %以上的B细胞淋巴瘤表达CD2 0 ,且无显著内化及脱落。这些特点使其成为单克隆抗体疗法的理想靶抗原。临床试验结果表明 ,抗CD2 0单克隆抗体既可单独应用 ,亦可作为放射性同位素或细胞毒制剂的载体 ,其疗效显著 ,且使用安全 ,副反应小。许多研究报道已阐明了抗CD2 0单克隆抗体治疗B细胞淋巴瘤的几种可能的效应机制。目前 ,人们正致力于探索一些新的治疗策略以期提高这种疗法的特异性 ,减少其非特异性的毒副作用。

抗CD20单克隆抗体美罗华治疗B细胞淋巴瘤的研究进展

美罗华(Rituximab)是一种抗CD20嵌合型单克隆抗体。它可特异性地与B淋巴细胞表面CD20抗原结合,通过多种机制清除体内的B淋巴细胞。临床资料显示,美罗华治疗B细胞非霍奇金淋巴瘤有效率高,毒副反应小,病人耐受良好,是一种有前途的抗肿瘤新药。

抗CD20单克隆抗体诱导B淋巴瘤细胞株凋亡的实验研究

本研究探讨抗CD20单克隆抗体体外诱导B淋巴细胞株凋亡情况及其可能的作用机制。体外培养Daudi、Ramos、Namalwa和Raji细胞,采用XTT法测定细胞增殖抑制率;用流式细胞术测定细胞凋亡;Western blot测定Daudi、Ramos、Raji和Namalwa细胞经Rituximab20μg/ml作用24小时后Bcl-2的表达情况。结果表明:抗CD20单克隆抗体对Daudi、Raji和Namalwa淋巴瘤细胞有轻度的抗增殖作用,对Ramos细胞无抗增殖作用,抗增殖作用与单克隆抗体作用浓度无关。抗CD20单克隆抗体对4株细胞无明显诱导凋亡作用,抑制率在3%-10%之间波动。Na-malwa和Raji细胞株经抗CD20单克隆抗体作用24小时后,Bcl-2蛋白表达下调。结论:单药抗CD20单克隆抗体对Daudi、Namalwa和Raji细胞株有轻度抗细胞增殖作用,但与作用浓度和作用时间无明显相关。单药抗CD20单克隆抗体对Daudi、Namalwa、Raji和Ramos细胞株有微弱的诱导凋亡作用。Namalwa和Raji细胞株经抗CD20单克隆抗体作用24小时后Bcl-2表达下调,这可能是抗CD20单克隆抗体增敏细胞毒药物作用的机制之一。

重组人CD11α单克隆抗体生物学活性测定方法的优化

用竞争性荧光免疫抑制细胞实验法对重组人CD11α单克隆抗体注射剂进行生物学活性测定,对LFA1转染的293细胞的培养、抗体包被时间及活性测定过程中样品的制备等条件进行了优化,建立了规范可行的操作方法。3批样品的生物学活性分别为:1.03×104U/mg蛋白,0.98×104U/mg蛋白及0.97×104U/mg蛋白,5次测定的RSD分别为4.554、5.039及1.443。

CD20单克隆抗体rituximab在B淋巴细胞疾病靶向治疗中的应用

CD20是前B淋巴细胞向成熟淋巴细胞分化过程中表达的表面抗原。除了在正常B淋巴细胞分化过程中表达外,CD20也在许多B细胞性恶性肿瘤如淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、多发性骨髓瘤以及Waldenstrom巨球蛋白血症中表达,为B细胞恶性肿瘤的特异性靶向治疗提供了较为理想的靶点。本文介绍近年来rituximab在B淋巴细胞性疾病中的临床应用概况。

抗CD22单克隆抗体对自身免疫性心肌病小鼠B细胞体外增殖功能的影响

目的探讨抗CD22单克隆抗体(anti-CD22 monoclonal antibody,CD22McAb)对自身免疫性心肌病小鼠B细胞体外增殖活性及其生成抗心肌自身抗体的影响。方法借助心肌腺嘌呤核苷转位酶(adenine neucleotide translocator,ANT)肽免疫小鼠建立的自身免疫性心肌病模型,分离其淋巴细胞,在体外予LPS刺激的基础上,加予不同浓度的CD22McAb(5μg/ml,10μg/ml,20μg/ml,40μg/ml)进行干预,并以非特异性的IgG干预作为对照。分别采用MTT法和ELISA法检测淋巴细胞增殖活性及抗ANT抗体生成水平。结果与对照组相比,5μg/ml与10μg/ml CD22McAb均可明显特异性地抑制B淋巴细胞增殖活性,且以前者更为显著(P＜0．01,后者P＜0．05),两组抗ANT抗体检测分别为全阴性及全阳性;20μg/ml CD22McAb可明显促使B淋巴细胞增殖活性增高(P＜0．01),其抗体检测均为阳性,且其抗体水平高于10μg/ml CD22McAb组(P＜0．01);而40μg/ml CD22McAb干预效果又与5μg/ml CD22McAb组相似,抗体检测也均为阴性。实验过程中,对照组小鼠淋巴细胞的增殖活性无明显变化,抗ANT抗体的检测均为阴性。结论在一定浓度范围内,CD22McAb对自身免疫性心肌病小鼠B细胞体外增殖活性及其抗ANT抗体的生成有调控作用。

小鼠抗人B7-1(CD80)单克隆抗体的制备及其对肿瘤细胞的抑制作用

目的制备小鼠抗人B7-1(CD80)单克隆抗体(mAb),研究其对天然表达B7-1的恶性肿瘤细胞体外生长和迁移的影响。方法以人B7-1基因转染的L929-B7-1细胞免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术制备mAb,并通过流式细胞术检测mAb对肿瘤细胞膜型B7-1的识别。以天然表达B7-1的Daudi细胞、Raji细胞及8266细胞为观察对象,分别加入(5、10、20、40)μg/m L B7-1 mAb处理,采用噻唑蓝(MTT)法检测mAb对肿瘤细胞体外增殖的影响,TranswellTM法分析mAb对肿瘤细胞体外迁移的影响,流式细胞术分析mAb对肿瘤细胞凋亡的诱导作用。结果成功制备1株能稳定分泌小鼠抗人B7-1 mAb的杂交瘤,命名为5G10。经流式细胞术分析,该抗体与Daudi、Raji、8266、U266、BEL-7402及MCF-7肿瘤细胞的阳性结合率分别为(96.30±2.12)%、(95.70±1.79)%、(96.80±2.48)%、(23.20±2.35)%、(1.68±0.35)%、(0.55±0.04)%;与对照组相比,20μg/m L 5G10 mAb明显抑制Daudi细胞、Raji细胞及8266细胞的增殖,肿瘤细胞迁移率明显降低,细胞凋亡率明显增加。结论小鼠抗人B7-1 mAb能特异性识别和结合不同肿瘤细胞膜表面的B7-1,并能显著抑制天然表达B7-1的肿瘤细胞的体外生长、迁移并促进其凋亡。

CD62L、CD11a单克隆抗体对严重烧伤早期大鼠白细胞-内皮细胞粘附的影响

目的 :探讨 CD62 L、CD11a单克隆抗体 ( MAb)对严重烧伤大鼠白细胞与内皮细胞粘附的影响及作用机制。方法 :复制大鼠烧伤模型 ,颈总动脉插管给予 CD62 L MAb (或 CD11a MAb或生理盐水 ) ,观察动物存活时间 ;在液流室中观察CD62 L MAb、 CD11a MAb则对分离的烧伤大鼠白细胞与培养的大鼠肺血管内皮细胞粘附的影响。结果 :与生理盐水组相比 ,CD62 L MAb可显著阻断烧伤大鼠白细胞与内皮细胞间的粘附 ,并延长烧伤大鼠的存活时间 ( P<0 .0 5 ) ;CD11a MAb则无明显作用 ( P>0 .0 5 )。 结论 :提示 CD62 L MAb具有一定的抗休克作用。

抗人CD38单克隆抗体的制备、鉴定及其功能的初步研究

目的 研制抗人CD38抗原分子的单克隆抗体 ,进一步研究其生物学功能。方法 采用高表达CD38抗原的Daudi细胞免疫Balb c小鼠 ;取其脾细胞与SP2 0细胞融合 ;用间接免疫荧光法进行杂交瘤筛选 ;流式细胞术、免疫沉淀法与CD38分子原核表达产物的Western blot分析鉴定单克隆抗体的特异性。以MTT(四甲基偶氮唑盐 )法检测单克隆抗体抑制细胞增殖以及介导补体杀伤靶细胞的功能。结果 获得了一株抗人CD38分子的单克隆抗体 1C6 ,流式细胞术显示它具有CD38抗原特异的细胞反应谱 ,其识别的抗原分子质量为 4 5 0 0 0u。与CD38分子原核表达产物的Western blot分析表明 ,其可特异识别CD38分子胞外结构域。MTT法显示其可介导补体杀伤靶细胞。结论 成功制备了抗人CD38分子的单克隆抗体 ,并进行了初步的功能研究。

HI_(47)(CD_(20))单克隆抗体对B细胞活化增殖的影响

CD_(20)单克隆抗体(HI_(47))能够抑制SAC诱导B细胞~3H-TdR掺入。进一步研究发现HI_(47)也能抑制SAC诱导B细胞~3H-UdR掺入和母细胞化,但对PHA和Anti-Ig引起的B细胞活化和T、B及髓细胞系的增殖无影响。用相同免疫球蛋白亚类的无关抗体及HI_(47)F(ab′)_2片段试验表明HI_(47)的抑制活性是抗体的特异性作用,与Fc片段无关。通过观察HI_(47)抗原表达与B细胞活化的关系,结果提示HI_(47)对SAC活化途径的抑制作用可能与CD_(20)抗原表达有关。

抗B血型物质单克隆抗体的研制及其免疫学特性的研究

应用杂交瘤技术,分别以人B血型红细胞,B血型红细胞加纯化的B血型物质和B血型物质为抗原,采用不同免疫程序免疫BALB/C小鼠,从6次细胞融合中筛选建立起3株分泌高滴度,高特异性抗人B血型物质单克隆抗体的杂交瘤细胞株:3—3—D_9(IgG_1),3—5—D_(12)(IgG_1)和6—1—G_(11)(IgA),用Takatsy微量血凝滴定法测得它们的96孔板组织培养上清液的血凝滴度分别为4096,4096和16384。经过凝血特异性试验,凝血抑制试验以及抗体稀释试验等广泛免疫化学研究证明这些单克隆抗体仅对人B型血特异。杂交瘤细胞在液氮中贮存数月,分泌抗体能力不变。抗体经56℃保温30minA-20℃和37℃反复冻融试验凝血活性保持稳定。这些单克隆抗体为进一步研究B血型抗体结合部位结构的多样性提供了条件,并且使在临床血液分型试验时用单克隆抗体替代人多克隆抗血清成为可能。

一株特殊功能的抗人CD40单克隆抗体的获得及其生物学特性分析

目的：研制功能性抗人ＣＤ４０单克隆抗体，从而探讨其对Ｂ细胞、ＤＣｓ表达的ＣＤ４０分子激发所产生的生物学效应。方法：采用细胞融合、单克隆抗体筛选、荧光标记、免疫印迹和竞争抑制等方法获得鼠抗人ＣＤ４０ｍＡｂ，以细胞增殖、分化抗原表达观察ＣＤ４０ｍＡｂ对Ｂ细胞和ＤＣｓ的作用效应。结果：经表型分析、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ鉴定和竟争抑制试验，证实５Ｃ１１是识别人ＣＤ４０分子的特异性单抗；５Ｃ１１与转导ＣＤ３２的Ｌ细胞（ＬＣＤ３２）联合ＩＬ－４能使扁桃体Ｂ细胞扩增并形成集落；５Ｃ１１能介导树突状细胞（ＤＣｓ）的扩增和分化成熟。结论：用５Ｃ１１与ＬＣＤ３２建立的ＣＤ４０培养体系，能使Ｂ细胞长期生存和增殖，为体外研究Ｂ细胞提供有效手段；５Ｃ１１诱导外周单核细胞分化成熟为树突状细胞，这一发现为体外大规模扩增可用于治疗的ＤＣｓ提供了新的手段，因而５Ｃ１１是一株具有特殊功能和重要应用价值的单克隆抗体。

抗人CD154单克隆抗体抑制免疫应答的实验研究

目的 :探讨抗人CD1 54单克隆抗体对免疫应答的抑制作用。方法 :①在体外进行混合淋巴细胞反应 ,研究抗人CD1 54单克隆抗体对淋巴细胞增殖反应的影响 ;②在严重免疫联合缺陷 (SCID)鼠体内重建人的免疫功能后 ,研究抗人CD1 54单克隆抗体在SCID小鼠体内对T细胞增殖的影响和对B细胞功能的影响。结果 :①双向混合淋巴细胞反应结果显示 ,抗体的 5个剂量组的 [3H] -TdR的掺入率均显著低于对照组 (均P <0 .0 1 ) ;②在输注人外周血单个核细胞第 6d、第 1 2d、第 2 1d ,实验组SCID鼠体内人T细胞占SCID鼠淋巴细胞的百分率均明显低于对照组(均P <0 .0 5) ;在输注人外周血单个核细胞后的第 1 2d、第 2 1d、第 31d ,实验组SCID鼠体内人IgG的含量明显低于对照组 (均P <0 .0 5)。结论 :抗人CD1 54单克隆抗体能够在体外抑制淋巴细胞的增殖 。

抗CD20单克隆抗体治疗难治性自身免疫性溶血性贫血

本研究初步观察抗CD20单克隆抗体利妥昔(rituximab)用于治疗难治性自身免疫性溶血性贫血(AIHA)的疗效和安全性。对1例用糖皮质激素、脾切除治疗无效的AIHA患者,采用利妥昔单克隆抗体,375mg/m2,每周1次,共4次,观察溶血症状的改变并监测血红蛋白(Hb)水平及其它检验指标,同时观察有无不良反应发生。结果表明,首次治疗后11天乳酸脱氢酶(LDH)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(IBIL)逐渐下降,第45天降至正常范围;首剂治疗25天后Hb水平比治疗之前升高到95-100g/L以上。治疗后已4月余,患者仍处于缓解状态。治疗过程中未发生明显不良反应。结论:抗CD20单克隆抗体利妥昔用于治疗难治性自身免疫性溶血性贫血是有效而且安全的。

抗CD25单克隆抗体治疗耐激素的急性移植物抗宿主病疗效分析

本研究探讨抗CD25单克隆抗体在单倍体相合骨髓移植术(hiBMT)后耐激素的急性移植物抗宿主病(aGVHD)治疗中的作用。对15例单倍体相合BMT后出现耐激素的Ⅱ-Ⅳ度aGVHD的患者给予巴利昔单克隆抗体20 mg,第1、4天静脉点滴,未达到疗效的病人间隔1周后重复本治疗。结果显示:完全有效8例(53.33%),其中4例无病生存,2例生存伴局限性cGVHD,2例死于肺部感染;3例部分有效(20%),其中1例无病生存,1例死于aGVHD及感染,1例死于肺部感染;4例无效(26.67%)死亡,死亡原因有GVHD、肺部感染、心力衰竭。总有效率73.33%,总生存率46.67%。该药应用安全,未发现输注相关的毒副作用。结论:抗CD25单克隆抗体对单倍体相合BMT后耐激素的Ⅱ-Ⅳ度aGVHD具有较好的疗效,但总的生存率仍然较低,感染仍然是导致该类患者死亡的主要原因,因此加强环境保护,预防感染极为重要。

抗CD20单克隆抗体在儿童原发性难治性肾病综合征的应用新进展

原发性难治性肾病综合征(idiopathic refractory nephritic syndrome,IRNS)一直是临床治疗的棘手问题。抗CD20单克隆抗体是一种诱导B细胞溶解和凋亡的新型免疫抑制剂,其出现极大地改善了IRNS患者的预后。近年来,多数病例分析和临床试验对抗CD20单克隆抗体治疗儿童IRNS的有效性进行了报道。本文就抗CD20单克隆抗体的作用机制、在IRNS的临床应用、不良反应及研究中存在的问题进行综述。