基于高通量表面等离子体共振技术筛选与TPBG具有高亲和力的单克隆抗体研究

目的探讨从制备的单克隆抗体中快速筛选出与滋养层糖蛋白(TPBG)具有高亲和力的单克隆抗体的方法。方法采用高通量表面等离子体共振技术(SPR),将不同种属的TPBG通过氨基偶联的方式固定在GLC传感器芯片上,梯度稀释的抗体作为流通相,筛选能高度亲和TPBG的单克隆抗体,并测定相互作用的动力学常数。抗体1结合人和食蟹猴TPBG,亲和力分别为65.0、31.6 nmol/L;抗体6结合人、小鼠、食蟹猴TPBG,亲和力分别为77.6、92.1、87.7 nmol/L。结果该研究成功筛选出2种能与TPBG特异性结合的单克隆抗体。动力学图谱显示,这2种抗体与TPBG蛋白的特异性结合稳定。结论采用SPR可筛选出与TPBG蛋白具有高亲和力的单克隆抗体,为开发出一些新型的抗肿瘤药物提供一种方法。

特发性膜性肾病患者采用血清抗PLA2R抗体、APRIL、尿IgG4检测的临床意义

目的:探讨血清抗PLA2R抗体、增殖诱导配体(APRIL)、尿IgG4对特发性膜性肾病患者的检测意义。方法:选取2021年8月—2023年7月在我院肾脏内科住院的150例肾病综合征患者,按照诊断标准分为特发性膜性肾病组70例、继发性膜性肾病组80例,同时选取同期体检健康者50例作为健康组。三组患者均进行血清抗PLA2R抗体、APRIL、尿IgG4检测,分析其应用价值。结果:特发性膜性肾病组的抗PLA2R抗体、APRIL、尿IgG4水平明显高于继发性膜性肾病以及健康组,继发性膜性肾病组抗PLA2R抗体、APRIL、尿IgG4水平明显高于健康组,差异具有统计学意义(P<0.05);三期的抗PLA2R抗体、APRIL、尿IgG4水平明显高于二期以及一期,二期抗PLA2R抗体、APRIL、尿IgG4水平明显高于一期,差异具有统计学意义(P<0.05);特发性膜性肾病组及继发性膜性肾病组血清尿素氮(BUN)、尿酸(UA)、肌酐(CREA)值均显著高于健康组,差异有统计学意义(P<0.05);特发性膜性肾病组及继发性膜性肾病组清蛋白(ALB)值均显著低于健康组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:特发性膜性肾病采用血清抗PLA2R抗体、APRIL、尿IgG4水平联合检测,不仅可以检测出相关病情,还可以对病情的严重程度进行鉴别诊断。

抗人IgG_4单克隆抗体用于ELISA法检测血吸虫病患者血清特异性IgG_4抗体的观察

文献报道［１，２］血吸虫病患者重复感染与特异性ＩｇＧ４抗体水平有关，患者经有效治疗后，特异性ＩｇＧ４抗体维持在高水平，其重复感染率较特异性ＩｇＧ４抗体正常组为高。国内有关这方面的观察报道不多，为了对日本血吸虫病患者的特异性ＩｇＧ４抗体水平有一初步了解...

抗人IgG_4单克隆抗体用于ELISA法诊断血吸虫病与疗效考核的研究

目的探讨检测特异性IgG4诊断血吸虫病的效果及疗效考核价值。方法采用SEA间接ELISA法检测血吸虫病人血清中的特异性IgG和IgG4抗体及对肺吸虫、肝吸虫病人和健康人血清的交叉反应以及血吸虫病人治疗后不同时期特异性IgG和IgG4抗体的变化。结果血吸虫病人血清中IgG4敏感性为93.02%,特异性为100%,而IgG抗体的敏感性为95.35%,特异性为97.62%,IgG4与IgG无论其敏感性还是其特异性差异均无显著性(P>0.05),与其它寄生虫病的交叉反应,IgG4显著低于IgG且差异显著(P<0.05),血吸虫病人治后6个月IgG4抗体阴转率显著高于IgG(P<0.05),治后12个月IgG4的阴转率与IgG比较差异非常显著(P<0.01)。结论ELISA法检测特异性IgG的诊断效能与IgG4相似,而特异性IgG4抗体可能系一短程抗体,用于评价疗效更具实际应用价值。

抗独特型抗体在CD47单抗治疗患者抗体筛查和配血中的应用

目的 对接受CD47单克隆抗体治疗的受试组患者使用CD47抗独特型抗体(CD47 anti-idiotypic antibody, CD47 AID)中和法(方法1)与缺乏抗IgG4抗人球蛋白法(方法2)进行输血前抗体筛查和主侧配血,比较经此两种方法配血后的输注效果,以评估CD47 AID中和法的可行性。方法 对本院接受CD47单克隆抗体治疗的18位临床受试者用药物后标本,使用方法1与方法2进行抗体筛查和主侧配血,比较输血后血红蛋白差值ΔHb(输血后Hb-输血前Hb)是否有差异;比较使用方法1进行配血的受试组患者与对照组患者(使用普通微柱凝胶法配血且未使用CD47单抗)输血后ΔHb是否有差异。结果 使用方法1与使用方法2进行配血的患者输血后ΔHb比较,两者之间无统计学差异(8.40±0.71 vs 7.36±0.94,P>0.05);使用方法1进行配血的受试组患者与未使用CD47单抗的对照组患者输血后ΔHb比较,两者之间无统计学差异(8.40±0.71 vs 6.59±0.77,P>0.05)。结论 受试组患者采用方法1配血具有与方法2配血相同的输注效果,且具有操作简单、结果客观准确的特点,推荐使用方法1对使用CD47单抗的患者进行输血前抗体筛查及主侧配血。

抗-CD47单克隆抗体对输血前检测试验的干扰及处理措施——附1例报告

目的探讨抗-CD47单克隆抗体对输血前检测试验的干扰及处理措施。方法收集1名接受抗-CD47单克隆抗体治疗的骨髓增生异常综合征受试者标本,进行ABO和Rh血型抗原鉴定,直接抗球蛋白试验,不规则抗体筛选和抗体鉴定试验,交叉配血试验;收集多人份O型献血者血小板制备成压积血小板,与受试者血浆进行吸收试验;收集Rh抗原分型分别为CCDee、ccDEE和ccdee的O型红细胞各1人份,分别与受试者血浆进行吸收试验;使用缺乏IgG4的抗球蛋白试剂Gamma-clone进行抗体筛选与交叉配血试验,使用Immucor Capture-R固相凝集试剂盒进行不规则抗体筛选试验。结果受试者直接抗球蛋白为阳性,游离抗体筛选和鉴定试验在所有介质中均为阳性(3+~4+);血浆与红细胞多次吸收后,抗体筛选和抗体鉴定为阴性;与多次血小板吸收后,抗体筛选和抗体鉴定仍为阳性;使用Gamma-clone抗球试剂进行不规则抗体筛选和配血试验,结果均为阴性;Immucor Capture-R固相凝集试剂盒进行不规则抗体筛选试验,结果为阴性。结论抗-CD47单克隆抗体可干扰输血前检测及交叉配血,使用缺乏检测IgG4的抗球蛋白试剂Gamma-clone和Immucor capture-R固相凝集法可较好去除抗-CD47干扰。

抗CXCR4单克隆抗体对HL-60细胞粘附性及Bcl-2、Fas蛋白表达的影响

本研究通过观察抗CXCR4单克隆抗体 (12G5 )对HL 6 0细胞粘附性及Bcl 2、Fas蛋白表达的影响 ,探讨趋化因子SDF 1在维持HL 6 0细胞生存中的作用。培养HL 6 0细胞 ,并再与骨髓基质细胞共培养 ,在抗CXCR4单克隆抗体阻断SDF 1生物活性后 ,观察骨髓基质层上HL 6 0细胞的粘附情况并测定其粘附率 ;应用免疫组织化学技术检测HL 6 0细胞Bcl 2及Fas蛋白的表达。结果显示 ,12G5显著降低HL 6 0细胞的粘附率 ,与此同时Bcl 2表达下调 ,Fas表达上调。结论 :抑制SDF 1活性可一定程度地阻抑白血病细胞生存 ,促进凋亡。

抗人IgG-抗HRP双特异性单克隆抗体细胞株的建立与鉴定

目的制备人 Ig G检测用双特异性单克隆抗体诊断试剂。方法用人 Ig G免疫 BAL B/c小鼠脾细胞与抗HRPMc Ab杂交瘤细胞 HAT敏感株进行第 2次融合。结果获得 5株能稳定分泌抗人 Ig-抗 HRP的双特异性单克隆抗体的杂交-杂交瘤细胞 ,分泌的抗体亚类其中 1株为 Ig G2 a/Ig G1,余为 Ig G1 /Ig G1 。培养上清与腹水效价分别为 2 - 7,10 - 5以上 ,经 HRP亲和层析有 2个蛋白吸收峰 ,Bs Mc Ab存在于第 2峰。用 EL ISA法及免疫印迹试验证明 :Bs Mc Ab只与人 Ig G有特异性反应。杂交 -杂交瘤细胞连续 3月培养和反复冻存 ,复苏后仍能稳定保持分泌 Bs Mc Ab的能力。结论该方法制备简单 ,灵敏高度 。

抗CD4单克隆抗体可变区基因克隆及序列分析

抗ＣＤ４单抗可延长灵长类动物模型同种器官移植物的存活时间和改善实验性自身免疫疾病的病情［１］。在人类，抗ＣＤ４单抗已被成功地用来治疗类风湿性关节炎［２］、系统性红斑狼疮［３］等自身免疫性疾病和肾移植患者的急性和慢性排斥反应［４］。本文对抗ＣＤ４单克隆...

抗CD25单克隆抗体对CD^4+CD25^(high)调节性T细胞的影响

目的评价抗CD25单克隆抗体对活体肾移植受者外周血CD4+CD25high调节性T细胞(Treg)的影响。方法观察14例活体肾移植受者外周血CD4+CD25highT细胞百分比和FoxP3mRNA表达水平的变化,应用流式细胞仪FACSCalibur和CellQuest软件行双色流式细胞计数和结果分析,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对肾移植受者外周血单个核细胞(MNC)的FoxP3基因水平进行检测。结果在移植术后3d、13d,CD4+CD25highT细胞占CD4+比例显著升高;在移植后1个月内,CD4+CD25highT细胞比例升高约至原来的3倍。移植术后13d、17d、27d时外周血FoxP3mRNA表达明显高于移植术后3d。在肾移植术后的不同时间抗CD25单克隆抗体使用组受者的CD25+T细胞百分比明显低于对照组(未使用抗CD25单克隆抗体)。抗CD25单克隆抗体使用组与对照组两组间比较,术后3d、13d,抗CD25单克隆抗体组CD4+CD25highT细胞占CD4+的比例明显降低,术后3d对照组、抗CD25单克隆抗体使用组分别为1.24%±0.15%、2.25%±0.24%,P=0.00;术后13d为3.75%±0.38%、7.28%±0.51%,P=0.00。然而,术后17d、27d后,抗CD25单克隆抗体使用组的CD4+CD25highT恢复到对照组水平,两组间CD4+CD25highT细胞占CD4+的比例无统计学差异,即第17d为3.72%、0.26%、4.43%、0.44%,P=0.17,27d为9.00%±0.30%、8.31%±0.33%,P=0.16。在肾移植术后不同时间,受者外周血FoxP3mRNA表达水平在两组之间相似,无统计学差异,说明FoxP3mRNA表达水平并没有受到体内注射抗CD25单克隆抗体影响。结论抗CD25单克隆抗体的使用对活体肾移植受者外周血CD4+CD25high调节性T细胞在一定时间具有暂时性的影响,而FoxP3mRNA表达水平没有受到影响。

荧光染料R-藻红蛋白标记小鼠抗人CD4单克隆抗体

以R-藻红蛋白(R-PE)标记小鼠抗人CD4单克隆抗体,形成单色或和用其他荧光染料标记的CD系列单抗组成双色、多色的荧光试剂,应用于流式细胞仪检测分析。用异双功能交联试剂SPDP和SMCC分别活化R-PE和CD4单抗,用DTT使经SPDP活化后的R-PE巯基化,再与用SMCC活化的CD4单抗交联。使用NEM终止交联反应,经Sephacryl S-300柱在AKTA FPLC快速液相色谱系统(简称AKTA)监测下分离纯化。结果用R-PE标记的抗CD4单抗,检测正常人外周血淋巴细胞表面CD4抗原的表达,经流式细胞仪(简称FACS)分析表明,R-PE标记的CD4抗体特异性保持完好,荧光强度较高,还可与用FITC标记的其它CD系列单抗配伍成双标或多标试剂。使用SPDP,SMCC异双功能交联试剂和DTT还原剂,成功地偶联了R-藻红蛋白和CD4单克隆抗体,可应用于流式细胞仪检测分析。

抗CD4单克隆抗体免疫干预类风湿性关节炎的研究进展

抗ＣＤ４单克隆抗体免疫干预类风湿性关节炎的研究进展上海第二医科大学附属仁济医院临床免疫研究室邓宇斌，江尧湖综述陈顺乐审校类风湿性关节炎（简称类风关）是一种慢性的以侵犯全身小关节为主要特征的全身炎症性疾病，迄今病因不明，临床疗效差，往往导致患者致残丧失...

抗人IgG-抗HRP双特异性单克隆抗体的研制及初步应用

用8－AG（8－氮杂鸟嘌呤）驯化的HRP－MCAb（抗辣根过氧化物酶单克隆抗体）杂交瘤细胞HAT（次黄嘌呤氨基喋呤胸苷）敏感株与人IgG免疫的BALB／c小鼠脾细胞进行二次融合，获得5株能稳定分泌抗人IgG－抗HRP的BsMcAb（双特异性单克隆抗体）杂交－杂交癌细胞，用其混合腹水经HRP亲和层析纯化的BsMcAb制备BsMcAbPAP（双特异性单抗过氧化物酶-抗过氧化物酶复合物）试剂代替丙肝诊断试剂盒中酶标二抗，比较结果初步表明两者差异无显著意义，将为IgG的检测提供有用试剂。

抗CD_4单克隆抗体可变区基因克隆及测序

目的 获取抗CD4 单克隆抗体 (McAb)可变区基因 ,为构建抗CD4 嵌合抗体打下基础。方法 从分泌抗人CD4 McAb的杂交瘤细胞系中提取总RNA ,用家族特异性引物进行逆转录多聚酶链反应 (RT -PCR) ,分别扩增出重链可变区 (VH)基因及轻链可变区 (VL)基因。将PCR产物克隆至pGEM -T载体 ,然后转化JM10 9细菌。并用全自动DNA序列分析仪对VH及VL基因序列进行测定。结果 VH基因为 3 5 1bp ,编码 117aa残基 ;VL基因为 3 3 3bp ,编码 111aa残基。根据Kabat分类体系 ,VH隶属小鼠免疫球蛋白 (Ig)重链Ⅱ (A)亚组 ,VL隶属小鼠Igκ链Ⅲ亚组。结论 从推导出的氨基酸序列证实 ,所获取的VH和VL序列均符合小鼠Ig可变区的氨基酸序列特征。

抗CD_(137)单克隆抗体对哮喘患者外周血CD_4^+CD_(25)^+T淋巴细胞死亡方式的影响

目的探讨抗CD137单克隆抗体对哮喘患者外周血CD4+CD2+5T淋巴细胞的影响。方法采用密度梯度离心法及尼龙棉柱法分离16例健康志愿者(对照组)及12例哮喘患者(哮喘组)外周血T淋巴细胞,磁性细胞分离器(MACS)分离得到CD4+CD2+5T淋巴细胞,分别利用电镜及流式细胞仪观察、检测抗CD137单克隆抗体干预72h的细胞自噬率、凋亡率、胀亡率及FOXp3的表达。结果抗CD137单克隆抗体干预后两组外周血CD4+CD2+5T淋巴细胞自噬率及凋亡率均增加,但哮喘组均低于对照组。结论抗CD137单克隆抗体可促进CD4+CD2+5T淋巴细胞凋亡和自噬。

应用双抗体夹心ELISA法定量检测人源破伤风毒素单克隆抗体中的IgG含量

采用山羊抗人IgG作为包被抗体 ,辣根过氧化物酶标记的山羊抗人IgG作为标记抗体 ,建立一种双抗体夹心法用于定量检测人源破伤风毒素单克隆抗体的IgG含量。以纯化的IgG作标准 ,用平行线法测得亲和层析纯化的人源破伤风毒素单克隆抗体G2的含量为 0 .5 12 μg/ml,与分光光度法测得的结果基本一致。因而样品检测采用纯化G2作参考标准 ,制作标准曲线 ,测定了已知样品和未知样品的抗体含量。结果表明本法重复性好 ,特异性强 。

抗CD40L单克隆抗体对哮喘大鼠血液和淋巴液调节性T细胞的影响

目的:研究抗CD40L单克隆抗体(抗CD40L mAb)对哮喘大鼠外周血和淋巴液中CD4+ CD25+调节性T细胞(Treg)数量及其功能的影响。方法:抗CD40L mAb处理血液和淋巴液中的单个核细胞(MNCs),流式细胞仪(FCM)检测MNCs中CD4+ CD25+ Foxp3+ T细胞的百分率,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清中IL-10和TGF-β1的含量。结果:体外培养72 h后,淋巴液来源MNCs中CD4+CD25+Foxp3+Treg的比例均明显高于血液来源的MNCs,末次激发后各组淋巴液和血液来源MNCs中CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg比例随细胞收集时间距末次激发时间延长呈先升高后降低的趋势;哮喘组淋巴液和血液来源MNCs中CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg比例均显著低于正常对照组和抗CD40L mAb组(P<0.05);末次激发后0、12 h收集的血液MNCs培养上清中抗CD40L mAb组TGF-β1的水平显著高于哮喘组和正常对照组(P<0.05);末次激发后24 h收集的淋巴液来源MNCs培养上清中抗CD40L mAb组IL-10的水平显著高于哮喘组和正常对照组(P<0.05)。结论:抗CD40L mAb促进CD4+ CD25+ Foxp3+ T细胞增殖,并在哮喘激发早期(0、12 h)促进血液来源CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞分泌TGF-β1,哮喘激发后期(24 h)促进淋巴液来源CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞分泌IL-10。

抗VLA-4单克隆抗体动员的外周血干细胞重建辐射损伤小鼠造血的初步研究

目的 观察抗VLA-4单克隆抗体动员的外周血干细胞对辐射损伤小鼠造血重建的效果。方法 8.5 Gy^(60)Co γ射线照射的BALB/c小鼠,分别接受经生理盐水(实验1组)及抗VLA-4单克隆抗体(实验2组)动员的外周血干细胞移植,观察受体小鼠的4周存活率、外周血白细胞(WBC)、骨髓有核细胞(BMN),粒细胞巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)及脾集落形成单位(CFU-S)等指标。结果 实验2组小鼠的4周存活率、WBC、BMNC,CFU-GM、CFU-S数均明显高于对照组、实验1组,差异具有显著性(P<0.05或P<0.01)。结论 抗VLA-4单克隆抗体能有效动员小鼠外周血干细胞,并能成功重建辐射损伤小鼠的造血功能。

R-藻红蛋白荧光标记小鼠抗人CD4/CD8单克隆抗体

R-藻红蛋白(R-PE)是一种新型荧光标记探针,具有优良的荧光特征。本实验采用异双功能交联试剂SPDP和SMCC分别活化R-PE和CD4/CD8单克隆抗体,再将活化后的R-PE和CD4/CD8单克隆抗体以一定比例混合,使之发生交联反应,交联产物经SephacrylS-300柱分离纯化。结果显示:用R-PE标记的抗CD4/CD8单抗,经流式细胞仪(简称FACS)分析可以检测正常人外周血淋巴细胞表面CD4抗原和CD8抗原的表达,且R-PE标记的抗CD4/CD8单抗特异性保持完好,荧光强度较高,可以形成单色或和用其他荧光染料标记的CD系列单抗组成双色、多色的荧光试剂,应用于流式细胞仪检测分析。

抗CXCR4单克隆抗体对糖尿病大鼠视网膜血管内皮生长因子表达的影响

目的:探讨抗CXCR4单克隆抗体对糖尿病大鼠视网膜血管内皮生长因子表达的影响。方法:选取64只健康雄性SD大鼠,用链脲佐菌素(STZ)制造糖尿病大鼠模型。治疗组用抗CXCR4单克隆抗体玻璃体注射,对照组和未治疗组只给予等量生理盐水。注射1周后,摘取眼球,做视网膜HE染色切片观察各组大鼠视网膜结构,ELISA定量检测各组视网膜VEGF含量。结果:视网膜HE染色示CON组视网膜未见明显异常,DM未治疗组视网膜各层结构排列紊乱,视网膜内皮组织水肿,可见大量新生血管及突破基底膜的血管芽细胞核,DM治疗组视网膜内皮组织水肿减轻、新生血管减少。ELISA结果显示DM未治疗组VEGF含量(194.91±2.18)pg/ml,显著高于正常组VEGF含量(122.43±1.62)pg/ml,DM治疗组VEGF含量(143.65±1.46)pg/ml,3组比较均有统计学意义(P<0.05)。结论:抗CXCR4单克隆抗体能够抑制糖尿病大鼠视网膜VEGF的表达。