抗体药物偶联物在人表皮生长因子受体2低表达胃癌中的应用研究进展

胃癌(GC)是极具异质性和侵袭性的消化系统恶性肿瘤之一,传统化疗药物及曲妥珠单抗等人表皮生长因子受体2(HER2)靶向药物在GC的治疗过程中仍然存在耐药性发生率高、毒副作用大、患者耐受差等缺点。因此,研发更为有效的抗GC药物势在必行。目前针对HER2的新型靶向药层出不穷,但在某些情况下无效或产生耐药,这与HER2在某些GC细胞中低表达有关,HER2低表达(HER2 IHC1+或IHC2+/ISH-)约占全部类型的40%~60%,但在临床实践中,这类患者仍被报告为HER2阴性GC。因此准确检测HER2表达状态对于确定可能受益于曲妥珠单抗治疗的患者至关重要。抗体药物偶联物(ADC)的出现为HER2阳性GC提供了新的治疗选择,凭借其精准高效的抗肿瘤作用,有望在未来替代传统GC化学疗法。近期有研究发现ADC可能在HER2低表达GC中具有潜在抗肿瘤活性,相关临床研究正在评估其在HER2低表达GC治疗中的有效性和安全性。本文就靶向治疗时代ADC在HER2低表达GC患者中的应用和最新研究进展作一综述,并讨论HER2靶向ADC在应用和研发过程中面临的挑战。

以人类表皮生长因子受体为靶点的乳腺癌抗体偶联药物研究进展

近年来,乳腺癌分子靶向药物研发取得了飞速发展,其中乳腺癌抗体偶联药物(ADC)是非常有前途的新型靶向治疗药物,以人类表皮生长因子受体为靶点的多种ADC(恩美曲妥珠单抗、曲妥珠单抗-德卢替康)已经获批上市,还有些处于临床试验后期(Trastuzumab Duocarmazine、维迪西妥单抗等)。另外,也有一些新型的ADC仍处于研究初级阶段,甚至因为严重的副作用终止了研究。由于细胞内作用机制和乳腺肿瘤细胞抗原表达量限制,ADC脱靶引起的副作用以及耐药性的存在阻碍了其进一步发展。为了增强细胞毒性药物疗效,新型ADC应在提高细胞毒性药物递送效率、减少脱靶效应等方面进行改良。

重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白治疗中毒性表皮坏死松解症的疗效及安全性

目的探讨重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白(rhTNFR:Fc)治疗中毒性表皮坏死松解症(TEN)患者的临床疗效及安全性。方法回顾性选取2020年1月至2022年1月海南医学院第一附属医院TEN患者20例,均给予rhTNFR:Fc治疗。治疗21 d后,记录TEN患者临床疗效,比较治疗前与治疗后不同时段(治疗后7、14、21 d)的药疹面积和严重程度指数(DASI)评分[DASI评分平均值,50%DASI(DASI50)、75%DASI(DASI75)、90%DASI(DASI90)所占比例]、血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平、体温下降时间、皮疹控制时间、住院时间及药物治疗的安全性。结果治疗21 d后,TEN患者中,显效18例(90.00%),有效2例(10.00%)。TEN患者治疗后7、14、21 d的DASI评分分别为(30.44±5.68)、(5.28±2.31)、(2.04±1.12)分,均明显低于治疗前[(52.34±7.45)分],差异均有统计学意义(P<0.05)。相较治疗前、治疗7 d、治疗14 d,治疗21 d后的DASI50(100.00%)、DASI75(100.00%)、DASI90(90.00%)的改善比率最高,差异均有统计学意义(P<0.05)。TEN患者治疗后7、14、21 d的血清TNF-α水平分别为(22.73±5.58)、(15.99±4.60)、(4.44±1.10)pg/mL,均低于治疗前[(33.63±17.36)pg/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。TEN患者体温下降时间为(2.49±0.81)d,皮疹控制时间为(5.19±1.90)d,住院时间为(11.92±4.20)d。治疗期间患者未出现终止治疗或失访,均未出现急性不良反应,随访期间病情未见复发,定期复查结果显示并无合并症、活动性肝炎与结核疾病等。结论rhTNFR:Fc作为治疗TEN疾病的药物其疗效随治疗时间延长而提高,可降低血清TNF-α水平与DASI评分,且安全性较高。

靶向人表皮生长因子受体3的人源Fab抗体构建及鉴定

目的:制备靶向人表皮生长因子受体3(HER3)的全人源Fab型抗体,并对其亲和力及生物学活性进行鉴定。方法:用Bsp QⅠ限制性内切酶分别将靶向HER3的全人源抗体的完整轻链、重链的可变区全长和CH1恒定区插入载体p3457,构建重组质粒;通过将轻、重链质粒瞬时共转染293E悬浮细胞进行表达,并利用镍柱纯化得到Fab型抗体蛋白;采用ELISA鉴定其与HER3胞外区是否结合,Forte Bio实验鉴定其亲和力,CCK8检测其对MDA-MB-453细胞增殖能力的影响。结果:分别获得表达轻链全长、重链可变区全长及CH1恒定区的HER3抗体重组质粒,并通过瞬时共转染293E悬浮细胞获得分泌型HER3 Fab抗体;ELISA实验证明其可与HER3胞外区蛋白直接结合;Forte Bio实验证明Fab型抗体与人源HER3胞外区蛋白具有一定的亲和力(KD=1.08×10-8mol/L);体外增殖实验表明,该抗体可显著抑制MDA-MB-453体外增殖。结论:通过293E悬浮细胞表达、镍柱亲和纯化,获得具有较高亲和力和功能活性的HER3 Fab型抗体,为HER3高表达型癌症的诊断、治疗提供物质基础。

重组抗人表皮生长因子受体人源化单克隆抗体注射液对Bcap37人乳腺癌细胞生长的抑制作用

目的观察重组抗人表皮生长因子受体人源化单克隆抗体注射液(MIL41)对Her2高表达人乳腺癌细胞体内外的抑制作用。方法通过流式细胞仪分析人乳腺癌细胞Bcap37中Her2受体的表达量,CCK8法测定MIL41在体外对乳腺癌细胞Bcap37生长的抑制作用;在体内研究中采用人乳腺癌细胞裸鼠皮下移植瘤模型的建立评价MIL41对肿瘤生长的抑制作用。结果体外实验表明Bcap37为Her2受体过表达的人乳腺癌细胞,CCK8法检测结果显示MIL41对受试细胞Bcap37的生长有较强抑制作用。体内实验表明受试药MIL41对受试的人乳腺癌细胞Bcap37的裸鼠皮下移植瘤的生长有明显的抑制效应,同时呈现出良好的浓度依赖关系。分别给予3、6、12 mg/kg不同浓度的受试药,其瘤体积抑制率分别为33.7%、47.8%、59.0%,瘤重抑制率分别为29.6%、44.7%、55.6%。结论 MIL41对Bcap37人乳腺癌细胞在体内外的生长有较强的抑制作用。

表皮生长因子受体单克隆抗体抗肺癌作用的研究

目的 实验观察表皮生长因子受体单克隆抗体(EGFR McAb)egf/r3对肺癌的治疗作用。方法 体外细胞增殖抑制实验采用MTT法,裸鼠体内移植瘤采用同时治疗(T1组)与延后治疗(T2组)两种方案。结果 egf/r3 McAb对高表达EGFR的SPC-A1 和A549 肺癌细胞体外均具有增殖抑制作用,并呈剂量依赖性;以SPC-A1 进行裸鼠皮下移植做体内实验,至治疗结束,T1 组50 % 成瘤(3/6),对照组100 % 成瘤(6/6);至实验结束,T1组与T2 组瘤体抑制率分别为75 % 与67 % ,瘤重抑制率分别为65 % 与47 % 。病理切片显示治疗组肿瘤组织局部坏死,电镜示线粒体凝缩、嵴断裂、溶解。结论 egf/r3 McAb 部分抑制肺癌细胞成瘤,明显延缓已成瘤肺癌生长,具有一定的抗肺癌作用。其体内抗瘤效果强于体外。

抗表皮生长因子受体Ⅲ型突变体噬菌体单链抗体库的构建与初步筛选

目的构建抗表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)特异性单链抗体库,从中筛选抗EGFRvⅢ特异性单链抗体。方法用pep-3偶联载体蛋白OVA,然后免疫BALB/c小鼠从脾淋巴细胞中提取总RNA,采用RT-PCR方法扩增重链(VH)和轻链(VL)的可变区基因片段。将两基因片段由编码(Gly4Ser)3的linker连在一起,并克隆入噬菌体展示表达载体pCANTAB5E中,电转化至E.coliTG1,经辅助噬菌体超感染,构建噬菌体单链抗体库。以pep-3-BSA为抗原对所建抗体库进行4轮亲和筛选,用ELISA鉴定抗体与EGFRvⅢ结合的特异性。结果经琼脂糖凝胶电泳分析,RT-PCR方法扩增的抗体VH和VL基因片段大小约350和320bp,与预期理论值相符。经重组PCR得到大小约780bp的ScFv基因片段。ScFv基因片段经双酶切后成功定向克隆到噬菌粒载体,回收后构建成库容量为5.0×106的噬菌体抗体库,噬菌体滴度为3.0×104pfu/ml。通过亲和筛选使抗EGFRvⅢ噬菌体单链抗体得到富集,第4轮为第1轮的56倍。在E.coliHB2151中实现了单链抗体的可溶性表达。SDS-PAGE结果显示抗体相对分子质量为28000左右。ELISA测定结果显示该单链抗体具有结合EGFRvⅢ的特异性。结论成功构建了噬菌体单链抗体库,筛选得到了抗EGFRvⅢ特异性噬菌体单链抗体。

大鼠抗人表皮生长因子受体3(ErbB3)二聚化界面区多克隆抗体的制备与鉴定

目的制备由人表皮生长因子受体3(ErbB3)二聚化界面区第236至308位氨基酸肽段(ErbB3Ⅱ)与麻疹病毒蛋白第288至302位氨基酸肽段(MVF)连接而成的融合蛋白MVF-ErbB3Ⅱ,并制备和表征其大鼠多克隆抗体.方法化学合成法合成MVF-ErbB3Ⅱ的基因,利用DNA连接酶与pET-21b载体连接成重组质粒,转化E.coli BL21(DE3)进行MVF-ErbB3Ⅱ原核表达,MVF-ErbB3Ⅱ经镍离子亲和层析法纯化后,免疫大鼠制备多克隆抗体,采用ELISA检测抗体滴度,Western blot法、免疫共沉淀法(IP)和流式细胞术鉴定抗体特异性和靶向性.结果SDS-PAGE证实大肠杆菌成功表达了MVF-ErbB3Ⅱ蛋白,ELISA结果表明多克隆抗体具有较高的抗体效价,Western blot法、IP和流式细胞术结果表明多克隆抗体具有良好的MVF-ErbB3Ⅱ及非变性ErbB3特异性和二聚化界面靶向性.结论成功进行了MVF-ErbB3Ⅱ原核表达和分离纯化及大鼠抗MVF-ErbB3Ⅱ多克隆抗体的制备和表征.

接尘工人血清中人表皮生长因子受体3抗体的表达水平

目的:观察人表皮生长因子受体3抗体在接尘工人血清内的表达水平及其与尘肺病的关系。方法:采集159例接尘工人和85例健康对照者的外周静脉血,应用双位点夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中HER3-Ab的含量。结果:健康对照组血清HER3抗体含量为(1.29±1.83)mg/L,接尘工龄<5年组和≥5年组人群血清HER3抗体含量分别为(3.72±7.17)mg/L和(9.96±21.86)mg/L,各组间人群血浆HER3-Ab的差异有统计学意义(P<0.05)。结论:自身免疫抗体HER3-Ab的表达水平与接尘有关。

抗皂角毒、表皮生长因子受体双功能抗体的制备与体外效应的研究

目的：研究制备抗皂角毒和表皮生长因子受体双功能抗体，用以导向皂角毒杀伤肿瘤细胞。方法：在制备ＥＱ７５、ＣＹ１２．１４单克隆抗体细胞株的基础上，通过杂交杂交瘤技术制备双功能抗体细胞株。结果：双功能抗体（ＥＱ７５×ＣＹ１２．１４）与单用皂角毒杀伤肿瘤细胞（Ａ４３１）的ＩＣ５０分别为１０－９．６、１０－８．４ｍｏｌ／Ｌ。结论：双功能抗体（ＥＱ７５×ＣＹ１２．１４）杀伤肿瘤细胞（Ａ４３１），以ＩＣ５０值计算，有效率为单用皂角毒的１５倍左右。

胰岛素样生长因子及其I型受体抗体对人肾上腺皮质癌SW-13细胞株体外生长的影响

目的探讨胰岛素样生长因子及其I型受体抗体对人肾上腺皮质癌SW-13细胞株体外生长的影响。方法采用MTT法描绘不同浓度胰岛素样生长因子及其I型受体抗体作用后SW-13细胞株体外培养生长的促进及抑制曲线,并比较不同浓度胰岛素样生长因子和其I型受体抗体组及单一胰岛素样生长因子或其I型受体抗体组与阴性对照组之间的差异。结果胰岛素样生长因子能明显促进SW-13细胞增殖,其作用效果与作用浓度在一定浓度范围内呈正相关(P<0.05);而胰岛素样生长因子I型受体抗体能抑制胰岛素样生长因子对SW-13细胞的刺激作用,并且对SW-13细胞的增殖亦有直接抑制的作用(P<0.05)。结论胰岛素样生长因子可促进SW-13细胞株的生长,而这种作用亦是通过胰岛素样生长因子I型受体传导;胰岛素样生长因子I型受体抗体可明显抑制这种生物学作用,可能在肾上腺皮质癌的治疗中发挥重要作用。

GST融合蛋白制备表皮生长因子受体抗体

目的:探讨制备大量表皮生长因子受体(EGFR)特异性抗体的方法。方法:将编码EGFR的N端肽段的cDNA克隆入表达载体pGEX-4T-3中,转化大肠杆菌BL-21,经IPTG诱导表达后,经亲和层析柱纯化,用该GST融合蛋白免疫BALB/C小鼠,获得免疫血清,以ELISA和Western Blot检测抗体滴度。结果:获得GST-PTB融合蛋白纯度大于95％;经免疫小鼠抗血清滴度1∶38 827-1∶190 602,得到大量高滴度的EGFR特异性抗体。结论:用原核系统表达GST融合蛋白直接免疫小鼠可以快速、大量地制备EGFR特异性抗体。

表皮生长因子受体单克隆抗体对辐射诱导肺腺癌细胞SPC-A-1的增敏作用

目的:探讨表皮生长因子受体单克隆抗体(C225)作为靶向治疗药物联合放射治疗对肺腺癌细胞系(SPC-A-1)的增敏作用,为临床综合治疗非小细胞肺癌提供理论依据。方法:SPC-A-1细胞体外传代培养6代以上,取对数生长期细胞进行实验。SPC-A-1细胞分为对照组(PBS)、照射组(4 Gy)、C225组(100 nmol.L-1)和照射+C225组(4Gy+100 nmol.L-1),Hoechst 33258染色后采用荧光显微镜观察细胞凋亡情况。SPC-A-1细胞分别给予0、2、4和8 Gy 6-MV X射线照射后继续培养72 h,收集细胞,分为照射组和实验组(照射+C225组),用流式细胞仪检测细胞凋亡率。SPC-A-1细胞分为对照组(PBS)、C225组(100 nmol.L-1)、照射组(8 Gy)和照射+C225组(8 Gy+100 nmol.L-1),作用48 h后,采用流式细胞仪检测细胞周期。结果:Hoechst33258染色后,照射+C225组凋亡细胞数明显高于照射组和C225组;细胞凋亡实验,实验组细胞凋亡率明显高于相应剂量照射组(P<0.05)。细胞周期检测,与对照组比较,C225组G0+G1期细胞增加(P<0.05),照射组G2+M期细胞增加(P<0.05),而照射+C225组G0+G1和G2+M期细胞均增加(P<0.05);与对照组比较,C225组、照射组及照射+C225组S期细胞均下降(P<0.05)。结论:C225对SPC-A-1细胞系有放射增敏作用,其机制可能与诱导细胞凋亡和细胞周期G0+G1期阻滞有关。

表皮生长因子受体家族单克隆抗体耐药机制的研究进展

表皮生长因子受体(EGFR)家族广泛存在于体内各种细胞中,其异常活化与多种人类上皮组织肿瘤的发生、发展密切相关,因此已成为肿瘤治疗的重要靶点之一。目前靶向EGFR家族的药物包括小分子酪氨酸激酶抑制剂和单克隆抗体(简称单抗)类药物,特别是单抗类药物近年来在临床上获得了广泛的应用。但是,越来越多的临床资料表明,大量患者对这类药物表现出原发性耐药或获得性耐药。目前靶向EGFR家族单抗类药物产生耐药的原因主要包括:受体结构改变、血管生成、多种受体酪氨酸激酶的活化、EGFR的亚细胞定位、EGFR下游效应分子的持续激活和EGFR家族生长因子表达的上调等。本文就靶向EGFR家族单抗类药物耐药机制的研究进展进行综述。

表皮生长因子受体及其单克隆抗体与口腔癌

表皮生长因子受体对于多种上皮源性肿瘤的发生、侵袭、转移有促进作用。通过实验已证明它的单克隆抗体对非小细胞肺癌等肿瘤细胞在体内外均有较好的抑制作用。口腔癌目前的发病趋势逐渐增高．本文对口腔癌和表皮生长因子受体及其单克隆抗体的关系进行综述。

抗表皮生长因子受体单克隆抗体引起离子紊乱的研究进展

抗表皮生长因子受体(EGFR)单克隆抗体对多种实体肿瘤的治疗具有重要意义,但这类药物可引起离子紊乱如低镁血症、低钙血症和低钾血症,早期症状因不够典型而容易被忽视。EGFR较多的表达于肾远曲小管和集合管,而抗EGFR单克隆抗体抑制了离子在肾髓袢升支粗段的重吸收,从而使镁离子在尿中的排泄增多,低镁血症继而引起低钙血症和低钾血症。不同的靶向药物以及不同肿瘤发生部位所出现的离子紊乱情形各有不同。低镁血症发生的风险与治疗时间、患者年龄及基础血清镁值相关。低镁血症倾向于可作为预后较佳的预测因素。3级或4级低镁血症需要延长靶向治疗间隔时间,同时静脉补充离子治疗,通常低镁血症是可逆的。该文参考既往的临床试验和研究,讨论离子紊乱的发生率、机制、危险因素、治疗以及疗效预测。

表皮生长因子受体特异性单链抗体的筛选及初步鉴定

目的从大型人源抗体库Griffin 1中直接筛选出靶向EGFR的单链抗体。方法以稳定转染的CHO-EGFR-GFP1细胞和未转染的CHO-K1细胞分别作为EGFR阳性和阴性细胞,采用负筛选的方法进行筛选;通过比较每轮投入及洗脱出噬菌体的效价比以及细胞ELISA检测多克隆p-scFv与阳性、阴性细胞结合情况对筛选过程进行监测;采用菌落PCR挑选含有全长scFv片断的菌落,进一步用细胞ELISA检测单克隆p-scFv与EGFR阳性及阴性细胞结合特异性;挑选EGFR特异性单克隆p-scFv采用DNA测序法确定克隆多样性。结果经过5轮筛选,细胞裂解液中洗脱出噬菌体效价有500倍以上增长;细胞ELISA结果显示多克隆p-scFv与CHO-EGFR-GFP1细胞和CHO-K1细胞均有明显结合,但有部分特异性结合EGFR;菌落PCR显示约45%克隆中含有完整的1kb scFv片断;经细胞ELISA、DNA测序检测共获得1株EGFR特异性单链抗体,命名为F4-scFv。结论F4-scFv可与筛选中所用EGFR阳性细胞特异性结合,为进一步研制以此单链抗体为靶向分子的抗肿瘤药物奠定了基础。

表皮生长因子受体单克隆抗体在结直肠癌治疗中作用的系统评价

背景:研究表明表皮生长因子受体(EGFR)信号通路可调节细胞的分化、增殖、迁移、凋亡以及血管发生。近年来,靶向EGFR的单克隆抗体拓宽了结直肠癌治疗的选择范围。目的:系统评价EGFR单抗联合结直肠癌治疗方案在结直肠癌治疗中的疗效和安全性。方法:从常用电子数据库中检索结直肠癌治疗方案联合与未联合EGFR单抗治疗结直肠癌的随机对照试验,分析反应率和不良反应发生率的合并比值比(OR),行亚组分析和敏感性分析,以漏斗图检测出版偏倚。结果:共7项随机对照试验(n=4186)纳入分析。联合与未联合EGFR单抗(治疗组和对照组)的反应率按意向治疗(ITT)分析分别为25.4%和17.6%(OR 3.36,95%CI:1.42～7.95),按方案(PP)分析分别为25.6%和18.0%(0R 3.32,95%CI:1.40～7.88),治疗组反应率明显优于对照组;两组3级以上不良反应总体发生率按ITT分析分别为71.2%和54.3%(0R 2.23,95%CI:1.74～2.86),治疗组3级以上不良反应总体发生率和皮肤损害、腹泻、低镁血症发生率均高于对照组。结论:EGFR单抗可明显提高结直肠癌,尤其是转移性或进展期结直肠癌患者对治疗的反应率,伴3级以上不良反应发生率增高。

表皮生长因子受体自身抗体在原发性肺癌与肺结核鉴别诊断中的意义

目的比较表皮生长因子受体(EGFR)自身抗体在健康志愿者、肺癌患者及肺结核患者血清中的差异,并探讨相关的临床意义。方法利用间接ELISA方法检测100名健康志愿者,112例肺结核患者,317例非小细胞肺癌患者血清中EGFR自身抗体的含量。结果EGFR自身抗体在健康志愿者血清中的相对含量(1.475±0.806)与肺癌患者血清中的相对含量(1.625±0.988)相比,差异无统计学意义(t=1.533,P=0.127);而EGFR自身抗体在肺结核患者(2.298±1.414)与健康志愿者(1.475±0.806),肺结核患者(2.298±1.414)与肺癌患者(1.625±0.988)血清中的相对含量的差异均有统计学意义(t=5.277,P=0.022;t=4.566,P=0.043)。结论EGFR自身抗体在肺结核患者中含量最高,在健康志愿者血清中含量最低,EGFR自身抗体血清含量的差异有可能为肺结核和肺癌患者的鉴别诊断提供线索和依据。

金纳米链及抗表皮生长因子受体抗体/金纳米链共轭物近红外热疗可启动细胞凋亡通路

背景:金纳米颗粒在近红外激光照射下对肿瘤细胞具有杀伤效应。目的:评价金纳米链及抗表皮生长因子受体抗体/金纳米链共轭物近红外热疗对人喉癌Hep-2细胞的热杀伤作用并探讨其凋亡通路。方法:取生长良好的人喉鳞癌Hep-2细胞,分别应用金纳米链或抗表皮生长因子受体抗体/金纳米链共轭物溶液进行干预,在此基础上应用8W/cm2近红外激光(808nm)照射6min,以单独应用1640培养液培养及单独给予近红外激光照射的细胞作对照。结果与结论:透射电镜观察发现,金纳米链热疗后Hep-2细胞有明显的损伤,抗表皮生长因子受体抗体/金纳米链热疗后细胞的损伤程度最重。Westernblot检测显示,金纳米链热疗和抗表皮生长因子受体抗体/金纳米链热疗后细胞热休克蛋白70和促凋亡蛋白Bax表达明显增高,而抑凋亡蛋白Bcl-2表达明显降低。说明金纳米链及抗表皮生长因子受体抗体/金纳米链共轭物近红外热疗可通过启动细胞凋亡通路杀伤人喉癌Hep-2细胞。