三种ELISA方法与荧光抗体病毒中和试验检测狂犬病抗体的一致性分析

为筛选合适狂犬病抗体检测的试剂盒,该研究以荧光抗体病毒中和试验(fluorescent antibody virus neutralization FAVN)方法为参照,与3个ELISA试剂盒方法进行比对,进行一致性分析,并计算了三种试剂盒的敏感性和特异性。结果显示:三种不同的试剂盒中,试剂盒A与FAVN一致性最好,Kappa值为0.605,有较高的一致性,符合率为86%;试剂盒B次之,Kappa值为0.485,为中度一致,符合率为80%;试剂盒C与FAVN的一致性最差,Kappa值为0.310,符合率也最低,为74%。在敏感性和特异性方面,试剂盒A的敏感性最高,为92.1%,试剂盒B的特异性最高,为72.7%。本研究为临床上科学的筛选试剂盒提供了依据。

汉坦病毒荧光抗体中和试验方法的建立

目的 荧光抗体病毒中和试验（FAVN）技术应用于汉坦病毒中和抗体的检测的探索与改进。方法采用固定病毒稀释血清的方法，将不同稀释度的血清和固定浓度的病毒经37℃中和1h，然后加入到Vero—E6细胞已长成单层的96孔板上，37℃、5％CO，培养7d，经固定和荧光染色，即可在荧光显微镜下判定结果，根据公式计算血清的中和滴度。结果最合适的细胞浓度为4×10^4～4．5×10^4／孔，病毒血清混合液在37℃中和较好。用此方法检测双价灭活疫苗免疫后30份人血清标本的中和抗体，与空斑减少中和试验结果比较，该方法较敏感、稳定。结论荧光抗体病毒中和试验法具有快速、简便、敏感、稳定的特点。

FAVN与RFFIT在动物和人狂犬病中和抗体检测中的比较

目的比较荧光抗体病毒中和试验(FAVN)和快速荧光灶抑制试验(RFFIT)两项技术用于动物和人血清狂犬病中和抗体检测的差异。方法以FAVN和RFFIT两种方法分别对60份动物及人血清进行狂犬病中和抗体的平行定量检测,应用配对定量资料的t检验对所得数据进行统计学分析。结果以0.5IU/mL的国际推荐标准,对同一样品经FAVN和RFFIT两种方法测定的中和抗体效价进行定性判定,二者对全部60份样品的检测符合率为96.67%(58/60)。统计学分析显示,两种检测方法对总体样品及不同动物样品的定量检测结果差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 FAVN和RFFIT可通用于动物和人血清的狂犬病中和抗体检测。

我国部分城乡犬狂犬病中和抗体水平调查

以国际兽疫局(OIE)推荐的荧光抗体病毒中和试验(FAVN)对随机采自广东、河北、北京等地区的573份犬血清进行了狂犬病病毒中和抗体效价的测定,以确定犬群中狂犬病的免疫状况。结果显示,在不同地区或不同城市的动物防疫区域中,犬体内狂犬病病毒中和抗体平均水平存在着明显的差异,城市犬的中和抗体水平较高,有的中和抗体保护水平(0.5IU/mL)阳性率高达100%,少数则达不到保护水平,不同防疫区域狂犬病中和抗体水平为(0.08±0.03)^(4.39±1.45)IU/mL,平均保护水平阳性率为46.3%;乡村看家犬病毒中和抗体水平普遍较低,大部分犬体内无中和抗体,只有个别犬体内存在水平较低的中和抗体,平均保护水平阳性率为1.8%。

新冠病毒抗体ELISA筛查假阳性反应:不同方法检测结果的内在逻辑

目的在无偿献血人群中,分析新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbnent assay,ELISA)抗体筛查出的反应性标本采用不同检测方法的检测结果。方法对2020年3—4月,深圳地区8632人次献血者血浆中ELISA筛查出SARS-CoV-2总抗体(total antibody,TAb,包括IgG、IgM、IgA)阳性标本(PC组)及其追踪血浆标本(FC组),2020年1—4月疾病对照标本(DC组)采用以下方法检测:(1)ELISA方法检测IgG,IgM和(或不用检测)TAb;(2)假病毒中和抗体试验(pVNT);(3)SARS-CoV-2抗体免疫印迹试验(Western Blot,WB)。2020年2—4月阴性对照标本(NC组),采用ELISA和WB方法检测。结果34例总抗体阳性标本中,2例pVNT试验阳性、初次筛查标本和追踪标本总抗体和IgG均阳性,WB结果阳性,判定为确证阳性;其余2例pVNT试验阳性,WB结果阳性的标本在追踪随访阶段,总抗体、IgG及pVNT结果不符合抗体演变规律,尚不能判定为确证阳性。结论新型冠状病毒ELISA筛查抗体反应性标本感染状态可综合pVNT、WB和追踪标本抗体动态变化的逻辑进行判断。

单克隆抗体竞争ELISA和FAVN检测狂犬病病毒免疫抗体的对比

为对比狂犬病荧光抗体病毒中和试验(FAVN)和单克隆抗体竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法的相关性,用2种血清抗体检测方法分别检测在深圳市收集的798份宠物犬血清样品,利用McNemar检验和Kappa一致性检验对比研究2种方法的检测结果。结果显示:以FAVN方法检测结果为标准,单克隆抗体竞争ELISA方法的符合率为96.7%(95%CI:95.3%~97.8%),敏感性为97.6%(95%CI:96.2%~98.5%),特异性为84.9%(95%CI:72.9%~92.7%),约登指数为0.825。经McNemar检验,2种血清抗体检测方法的检测结果差异不具有统计学意义(P=0.078>0.05);经Kappa一致性检验,2种血清抗体检测方法检测结果不一致是小概率事件(P<0.001),且两者的检测结果一致性高(Kappa系数=0.758)。结果表明,用单克隆抗体竞争ELISA方法代替FAVN用于犬狂犬病病毒免疫抗体的大规模监测具有一定的可行性。

采用不同ELISA试剂盒对猪瘟抗体水平调查结果的影响

本文采用猪瘟抗体间接ELISA和阻断ELISA检测试剂盒对320份血清样本进行猪瘟抗体检测,符合率达80.63%,对检测结果不一致的样品,利用抗体中和试验(FVNT)做定性检测,结果表明,间接ELISA试剂盒的敏感性和特异性均高于阻断ELISA试剂盒,猪瘟间接ELISA试剂盒更适用于我国猪瘟抗体检测。

对乙型肝炎表面抗原弱阳性结果进行确认试验的应用研究

目的评估抗体中和确认试验在乙型肝炎表面抗原（HBsAg）低值弱阳性标本中的应用。方法将由微粒子酶免疫发光法（MEIA）检测的HBsAg结果（S/CO）在1.0-10.0之间的111份弱阳性血清标本进行抗体中和确认试验,并进行乙型肝炎病毒（HBV）酶联免疫吸附试验（ELISA）,对比各试验结果间的差异。结果抗体中和确认试验阳性92例（82.9%）,ELISA检测阳性47例（42.3%）,2项试验检测结果间差异有统计学意义（P=0.033）。结论对HBsAg低值弱阳性标本,ELISA检测漏检率很高,敏感性和特异性均不佳;抗体中和确认试验可做为HBsAg弱阳性标本进一步确认的手段。

猪瘟抗体间接ELISA检测试剂盒的研制和应用

对猪瘟抗体间接ELISA检测试剂盒的稳定性及保存条件等进行了摸索,确定该试剂盒具有良好的稳定性,并可在2℃～8℃环境中的保存9个月。同时,测定了本试剂盒与荧光抗体病毒中和试验的符合率为92.62%;并将该试剂盒应用于免疫动物抗体的动态监测。

酶联免疫吸附试验乙型肝炎表面抗原弱阳性血液标本中3种检测方法的结果分析

目的分析酶联免疫吸附试验(ELISA)乙型肝炎表面抗原(HBsAg)弱阳性标本中3种检测方法[增加标本的离心时间和提高离心速度、时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)、抗体中和确认试验]的应用。方法选取2014年1月至2015年12月来该院检验科验血的200例检验报告作为血样获取目标,其中HBsAg弱阳性的血液标本112例,即作为该研究的血液标本;分别通过增加标本的离心时间和提高离心速度、TRFIA、抗体中和确认试验进行检测,继而对不同方法检出的结果进行分析比较,其中以经抗体中和确认试验检测出的结果作为金标准。结果ELISA检测过程中,与ELISA初测(3 000r/min离心8 min)阳性率(61.6%)相比,增加离心时间和提高离心速度(3 500r/min离心20min)后,ELISA检测阳性率(48.2%)明显偏低,差异有统计学意义(P<0.05)。以抗体中和确认试验检测结果作为金标准,ELISA检测112例HBsAg弱阳性血液标本,其敏感度为57.3%(47/82),漏检35例,占比42.7%(35/82),另外误检7例,占比23.3%(7/30);TRFIA检测112例HBsAg弱阳性血液标本,其敏感度为93.9%(77/82),漏检率6.1%(5/82),错检率3.3%(1/30),并且TRFIA敏感度明显高于ELISA,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ELISA检测HBsAg可能出现假阳性结果,通过增加标本的离心时间和提高离心速度可有效减少假阳性例数;TRFIA敏感度较ELISA更高。

胶体金免疫层析试验检测乙肝两对半时HBsAg假阴性结果的处置

目的胶体金免疫层析试验(GICA)检测乙肝两对半时,对乙型肝炎表面抗原(HBsAg)结果疑似假阴性的标本分别用酶联免疫吸附试验(ELISA)和时间分辨荧光分析法(TRFIA)定量试验进行HBsAg检测,并用抗体中和确认试验进行确认,以获得一个处理GICA检测HBsAg产生假阴性结果的可靠方法。方法 2014年1月至2015年2月用GICA检测乙肝两对半的标本3 078例,选取其中结果为单乙型肝炎核心抗体(抗-HBc),或单乙型肝炎e抗体(抗-HBe)为阳性,或抗-HBc和抗-HBe同为阳性,而HBsAg、乙型肝炎表面抗体(抗-HBs)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)均为阴性的标本86例,分别用ELISA和TRFIA检测其HBsAg,对检测为阳性的标本进行抗体中和确认试验确认。结果 86例标本经抗体中和确认试验确认阳性的为35例;ELISA检出阳性标本28例,其中2例为假阳性;TRFIA检出阳性标本35例与抗体中和确认试验符合率100%。结论 GICA检测乙肝两对半时,对HBsAg结果疑似假阴性的标本可选用TRFIA进行复查确认。

应用ELISA检测犬狂犬病抗体水平的探讨

为了解应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测犬狂犬病抗体水平的效果,对东莞市采集的54份犬血清应用ELISA进行检测,采用Synbiotics软件进行分析,同时将该批血清送至军事医学科学院军事兽医研究所作荧光抗体病毒中和试验(FAVN)比较。ELISA检出阳性数35份,阳性率为64.82%,与军事医学科学院军事兽医研究所的测定结果差异不显著,符合率为85.19%。证明应用ELISA检测犬狂犬病抗体水平定性检测具有较高的准确率,适合在短时间内监测大批量的血清样品。

阳江地区某猪场塞内卡病毒抗原和抗体的检测与分析

塞内卡病毒是新发现的一种小RNA病毒,能使猪产生类似水疱样病变,并引起仔猪死亡。塞内卡病毒作为外来病原,近几年呈现蔓延趋势。从广东阳江地区某猪场采集病变组织和血清进行检测分析,针对塞内卡病毒VP1-2A基因进行RT-PCR扩增,得到特异性的单一条带。对PCR产物序列分析表明,与2015年美国毒株USA/GBI29/2015的同源性最高、为99.2%,而与我国2017年毒株CH-HN-2017的同源性为97.1%。将水泡皮处理后接种PK-15细胞,盲传4代产生显著病变,滴度可达107TCID50/0.1mL。对采集的16份血清进行抗体中和试验表明,发病种猪的抗体效价最高达到1︰4096,9头种猪全部感染SVA,发病率为66.7%,总感染率为68.8%。

狂犬病毒ELISA抗体检测试剂盒的初步应用

以灭活纯化的狂犬病毒SRV9株作为包被抗原，制备了5批次狂犬病毒ELISA抗体检测试剂盒中试产品。与FAVN法、商品化进口试剂盒相比，该试剂盒与二者总符合率为90.80%和94.25%，且敏感性较高。5批次试剂盒批内变异系数为1.47%~8.34%，批间变异系数为2.05%~8.64%，说明该试剂盒重复性良好，可用于血清中狂犬病毒抗体常规检测。

猪瘟抗体间接ELISA检测试剂盒的应用分析

探讨猪瘟抗体间接ELISA检测试剂盒的稳定性和保存条件.经研究表明,该试剂在2～8℃的环境下具有良好的稳定性,能够保存11个月.与此同时,本试验对大量的猪瘟抗体阴、阳性血清进行检测,也对本试剂盒与荧光抗体病毒中和试验的符合率进行了测评,发现其符合率为93.5％.按相关标准将该试剂盒用于动态监测免疫动物抗体.

酶联免疫吸附试验与中和抗体试验检测麻疹抗体比较研究

目的探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)和中和抗体试验(NT)在麻疹抗体检测中的应用价值。方法以NT为"金标准",同时用德国Virion/Serion的定量ELISA试剂盒检测364份麻疹抗体滴度,将两种方法测定的结果进行比较。结果 NT的阳性率为57.69%,几何平均滴度(GMT)为1∶5.48,ELISA的阳性率为42.86%,平均抗体活性值为48.57IU/L。定性结果发现,ELISA特异度为99.35%,其敏感度即阳性符合率为73.81%,且阳性符合率随着滴度增加呈现增高的趋势(z=-5.99,P<0.001)。Fisher精确概率法发现,滴度1∶2组、滴度1∶4组与其他各组阳性符合率差异均有统计学意义(P<0.05),滴度1∶8组与滴度≥1∶64组阳性符合率差异有统计学意义(P<0.05),其余各组间阳性符合率差异均无统计学意义(P>0.05)。定量结果发现,ELISA抗体活性值与NT滴度呈明显正相关,相关系数r=0.884,P<0.001。结论德国Virion/Serion的定量ELISA试剂盒在检测低滴度麻疹抗体时易出现假阴性,检测高滴度麻疹抗体时,两种方法敏感性接近;滴度临界值为1∶8～1∶16。该试剂可推荐用于健康人群麻疹抗体水平监测。

基于微量病毒中和抗体试验的新冠肺炎临床确诊病例血清样本的抗体检测方法评价

目的使用新冠肺炎确诊病例血液样本对荧光免疫层析法、胶体金法和微量病毒中和抗体试验等血清学方法进行评价,比较3种试验方法检测结果的差异,为临床治疗和流行病学调查提供技术手段。方法采用新型冠状病毒(2019 novel coronavirus,2019-nCoV)IgG/IgM抗体联检试剂(荧光免疫层析法)和2019-nCoV抗体检测试剂盒(胶体金法)及由广东省疾病预防控制中心实验室分离的2019-nCoV病毒株建立的微量病毒中和抗体试验对临床确诊患者血液样本进行检测。结果本研究收集广东省第二人民医院2019-nCoV临床确诊患者血液样本113份,患者年龄中位数为47.50(32.00,57.00)岁,性别比2.77∶1;患者微量病毒中和抗体试验最高滴度1∶1024;以微量病毒中和抗体试验结果作为金标准时,胶体金法检测灵敏度高于免疫层析法(94.74%vs 82.46%),两者Kappa值分别为85.84%和75.24%,阴性和阳性预测值分别为94.44%、91.53%和83.87%、92.16%。结论在检测2019-nCoV的血清学方法中,以微量病毒中和抗体试验为金标准时,相比荧光免疫层析法,胶体金法灵敏度和Kappa值更高,更适宜于2019-nCoV病例的快速检测。

乙型肝炎表面抗原ELISA检测假阴性样本的分析

目的对酶联免疫吸附试验（ELISA）测定乙型肝炎表面抗原（HBsAg）为假阴性的样本，以微_拄子酶克发光法（MEIA）来检测并进行确认，提供一个处理ELISA检测HBsAg产生假阴性的方法。方法选定武汉亚洲心脏病医院2007年8月～2008年10月ELISA测定乙型肝炎血清学标志物的样本3831例，收集其中单乙型肝炎核心抗体（抗-HBc）阳性和／或乙型肝炎e抗体及抗-HBc同为阳性而HBsAg、己型肝炎表面抗体、乙型肝炎e抗原均为阴性的样本，符合条件的76例样本入选，所有入选的样本均用MEIA法进行HBsAg检测，并对检测为阳性的样本进行抗体中和确认试验确认。结果76例样本中，经MEIA法检测HBsAg为阳性的样本49例，占64．5％；经抗体中和确认试验确认为阳性的样本33例。占43．4％．结论ELISA检测HBsAg弱反应性样本的漏检率很高．需用曼好的检测手段来确认．

牛病毒性腹泻病毒灭活疫苗的制备及其免疫效果

本试验全面开发针对于牛病毒性腹泻病毒(BVDV)流行毒株新型疫苗,通过BVDV-1b型毒株以及白油视为疫苗株的佐剂,制备出了病毒油乳剂灭活性疫苗。同时经过抗体消长规律以及免疫攻毒保护试验,针对灭活疫苗免疫成效进行分析。结果证实:此类疫苗安全性较佳。另外也具备一定的免疫原性。其能够为中国研发出具有自主知识产权的BVDV疫苗奠定重要基础。

新型狂犬病病毒中和抗体检测方法的建立

目的建立一种安全、快速、经济的新型狂犬病病毒中和抗体的检测方法。方法在狂犬病病毒弱毒株HEP-Flury基因组Ψ区插入增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein eGFP)基因,利用反向遗传技术,拯救重组病毒rHEP-eGFP,分别采用荧光显微镜观察、直接免疫荧光染色鉴定及电镜观察等方法对rHEP-eGFP病毒进行鉴定;分别绘制rHEP-eGFP和亲本毒株HEP-Flury的生长动力学曲线;将rHEP-eGFP在BHK-21细胞中连续传代9次,测定各代次rHEP-eGFP的滴度,荧光显微镜下观察eGFP的表达;采用TCID50法检测狂犬病病毒标准攻击毒株CVS-11和rHEP-eGFP的毒力;以rHEP-eGFP病毒为抗原,建立新型荧光抗体病毒中和试验(fluorescent antibodyvirus neutralization,FAVN)-eGFP,对25份犬血清的抗体效价进行测定,并与标准FAVN检测结果进行比较。结果经荧光显微镜观察、直接免疫荧光染色鉴定和电镜观察表明,成功拯救出rHEP-eGFP病毒;重组病毒rHEP-eGFP与亲本病毒HEP-Flury的生长特性相似;rHEP-eGFP连续传代9次,均能稳定表达eGFP;CVS-11的毒力为108TCID50/ml,rHEP-eGFP的毒力为107.3TCID50/ml;FAVN-eGFP与FAVN测定25份犬血清抗体效价的结果具有良好的一致性。结论建立的新型狂犬病病毒中和抗体检测方法(FAVN-eGFP)准确度高,特异性好。