体外抗体亲和力成熟的几种策略

抗体在疾病诊断、治疗和预防方面发挥着举足轻重的作用。随着抗体工程技术的不断发展 ,抗体已经成为生物制药领域中的热点。而抗体工程发展所面临的两大难点问题之一就是如何提高基因工程抗体的亲和力。本文综述了有关基因工程抗体体外抗体亲和力成熟方面的最新进展。

全人源单克隆抗体体外亲和力成熟的策略

单克隆抗体已广泛地应用于临床治疗。人源化的单克隆抗体是目前已上市的治疗性抗体的主要形式。不管是来源于杂交瘤细胞还是噬菌体展示库的抗体,其亲和力在治疗应用上可能都需要改善。抗体体外亲和力成熟是解决这一问题的重要途径。作者将就全人源单克隆抗体亲和力成熟的策略方面进行综述。

具有高亲和力和稳定性的人源性抗PD-L1二硫键稳定Diabody的制备

目的:对天然噬菌体抗体库进行筛选并对抗体进行体外亲和力成熟,获得高亲和力人源性抗PD-L1抗体,然后对该抗体进行二硫键稳定改造,获得具有高亲和力和稳定性的人源性抗PD-L1的二硫键稳定Diabody。方法:首先以PD-L1重组蛋白为抗原在天然噬菌体Fab抗体库中筛选Fab抗体,其次分析结合能力较好的抗PD-L1的Fab抗体可变区基因中的热点,通过对轻链、重链CDR3区的7处热点随机突变构建噬菌体抗体突变库,从中筛选出亲和力得到提高的抗体。最后在抗体骨架区引入两个二硫键,构建二硫键稳定的抗PD-L1的ds-Diabody,并在毕赤酵母GS115中进行表达。结果:该方法筛选获得了6株特异性抗PD-L1噬菌体Fab抗体,对结合能力较好的其中一株抗体CDR3区的热点进行随机突变,成功构建库容为1.14×108 CFU/mL的噬菌体抗体突变库,并从中筛选出亲和力提高约6倍的噬菌体抗体突变株。对该抗体骨架区进行二硫键引入,成功构建与表达二硫键稳定的ds-Diabody。结论:构建的ds-Diabody比Fab抗体与PD-L1结合亲和力高、稳定性好,为药物开发、肿瘤治疗等研究PD-1/PD-L1途径提供有力依据。