静注人免疫球蛋白抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用测定方法的建立

目的利用转录报告基因细胞,建立静注人免疫球蛋白(pH4)(human Immunoglobulin(pH4)for Intravenous Injection,IVIG)抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)生物学活性测定方法。方法以Jurkat-NFAT-Luc-CD16细胞作为效应细胞,PLC/PRF/5细胞作为靶细胞,将效应细胞、靶细胞和IVIG孵育后,通过检测IVIG Fc段结合效应细胞后活化T细胞核因子释放的荧光素酶,建立IVIG ADCC生物学活性检测方法,同时对试验条件进行优化,以及对该方法进行方法学验证。结果IVIG在该方法中存在量效关系,符合四参数方程。经过试验条件优化,最终确定将PLC/PRF/5细胞作为靶细胞,抗体起始稀释浓度为20 mg/mL,梯度稀释倍数为1∶2,效靶比为1∶3,效应细胞、靶细胞和IVIG共同孵育时间为24 h。三次独立检测的日内和日间起始工作浓度荧光素酶相对光单位(relative light unit,RLU)及半最大效应浓度(concentration for 50%of maximal effect,EC50)的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均<11%,2个不同稀释组回收率样本相对效价分别(23.50±1.69)%,(49.30±2.97)%,对应的回收率分别为(93.50±6.30)%,(96.24±5.43)%,RSD均<11%。结论本研究利用转录报告基因细胞成功建立IVIG ADCC生物学活性检测方法,该方法具有专属性强、重复性好、准确性高等优点,可作为IVIG ADCC生物学活性检测方法。

猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体依赖增强作用研究进展

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起母猪繁殖障碍和仔猪的呼吸道症状而导致高病死率的传染病,PRRSV抗体依赖增强作用(ADE)是造成PRRS免疫失败的重要因素,受到国内外学者的高度重视。近年来,对ADE的机理已进行了深入的研究,主要是巨噬细胞通过FcγR介导摄取PRRSV引发ADE现象。论文综述了PRRSV的结构蛋白和ADE机理,为PRRS的进一步研究和疫苗的研发提供参考。

蛋白质微阵列检测抗原抗体相互作用

为了制备蛋白质微阵列和研究芯片表面抗原 抗体的相互作用 ,研究了如何在玻片表面固化蛋白质和用荧光染料 (Cy3,Cy5 )对蛋白质进行标记 .结果表明 ,在醛基修饰的玻璃表面 ,通过共价偶联的方法将抗原或抗体固定到芯片表面 ,能使二者保持其特异性结合能力 .同时 ,荧光标记后的抗原或抗体仍然具有特异性结合能力 .蛋白质微阵列是通过机械手在玻片表面排阵制作的 .芯片上的荧光信号获取采用了激光共焦荧光扫描系统 .用不同浓度的抗原探针阵列 ,对其相应的抗体靶分子的特异性结合进行了分析和研究 .此外 ,还通过在玻片表面固定兔IgG和固定鼠IgG ,对羊抗兔和羊抗鼠抗体与其相应抗原的特异性相互作用进行了检测 .

HCV感染人滋养层细胞过程中抗体依赖性增强作用的初步研究

目的研究丙型肝炎病毒(HCV)在感染人滋养层细胞的过程中是否存在抗体依赖性感染增强(ADE)作用,探讨HCV母婴传播的分子机制。方法将HCV阳性血清以4种不同方式感染体外培养人滋养层细胞,应用RT-PCR法对标本进行HCVRNA定性检测,并进一步评估不同浓度CD16单抗对感染过程的阻断作用。此外,应用免疫电镜技术观察滋养层细胞感染HCV病毒颗粒情。结果HCVRNA在全血清组、CD81单抗阻断组及LDL-R单抗阻断组多个标本均为阳性表达,且平均拷贝数较高,在FcγRⅢ(CD16)单抗阻断组多个标本内未能检测到HCVRNA的表达,且阳性标本拷贝数较低;CD16单抗对感染的阻断作用随浓度的升高而增强;在全血清组、CD81单抗阻断组及LDL-R单抗阻断组多个标本细胞内可间断测得未脱壳的HCV病毒颗粒,CD16单抗阻断组细胞内未能检出。结论滋养层细胞膜CD81和LDL-R分子不参与HCV感染滋养层细胞的过程,而FcγRⅢ分子则与此过程密切相关。HCV感染人滋养层细胞过程中存在抗体依赖性增强作用。

病毒的抗体依赖性增强作用及其机制

抗体依赖性增强（ADE）作用是指某些病毒在相应抗体协助下复制或感染能力显著增强的现象。使用常规疫苗免疫来防治具有ADE作用的病毒病常常难以奏效,甚至引起某些疾病病情加剧。近年来,关于病毒感染的抗体依赖性增强作用的机制研究取得了很大的进展,对具有ADE现象病毒有效疫苗的研发具有十分重大的意义。

三种新城疫抗原检测法中抗体最适作用浓度的测定

以三种检测方法对兔抗 NDV- Ig G的最适作用浓度进行了测定。结果表明 :在琼脂扩散试验 ( AGP)中兔抗 NDV- Ig G的最适作用浓度为 1 45 0 .0 ug/ml,在免疫荧光抗体试验 ( IFA)为 72 .5 ug/ml,在酶联免疫吸附试验 ( ELISA)中为 1 62 .

抗人B7-1人-鼠嵌合抗体体内外抑瘤作用研究

目的研究抗人B7-1人-鼠嵌合抗体ch-4E5对高表达B7-1分子的人恶性B淋巴瘤细胞株Raji的抑瘤作用。方法自行制备ch-4E5,经流式细胞术(FCM)分析ch-4E5对Raji细胞膜型B7-1分子的识别及共育后细胞表面Fas及Fas L表达的改变,继而又经MTT法检测细胞增殖的抑制效应;以人外周血PBMC为效应细胞,Raji为靶细胞,分析ch-4E5介导的抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(antibody dependent cell mediated cytotoxicity,ADCC);将Raji细胞经ch-4E5处理后接种Balb/c裸鼠,观察裸鼠成瘤时间并计算成瘤率。结果 ch-4E5与Raji细胞的阳性结合率为97.9%;该抗体可上调Raji表面Fas及Fas L的表达,其阳性表达率分别为15.8%及16.9%,与人Ig G1同型对照组5.1%和2.2%比较具有统计学意义(P<0.01);ch-4E5对Raji细胞增殖的抑制率为39.17%(P<0.01);介导的最大杀伤率为56.47%(P<0.01);经ch-4E5处理的Raji细胞接种Balb/c裸鼠,90 d的观察期内均未见肿瘤形成,而对照组成瘤率高达80%。结论抗人B7-1人-鼠嵌合抗体对高表达B7-1的肿瘤细胞具有抑瘤作用。

靶向人c-Met蛋白单链抗体的制备及其对肺腺癌A549细胞的杀伤作用

目的制备并纯化出靶向细胞间质上皮转化因子(c-Met)蛋白的人源单链抗体(scFv),鉴定其靶向c-Met蛋白的特性及其对肺腺癌细胞的作用。方法将scFv基因插入至p Fuse载体构建真核表达载体,表达融合鼠源Fc段的融合蛋白Met-scFv,经AKTA蛋白纯化系统纯化;将纯化的Met-scFv进行功能性检测:ELISA检测Met-scFv亲和力;流式细胞术和免疫荧光细胞化学染色检测Met-scFv识别并结合肺腺癌细胞的特性;CCK-8法检测Met-scFv对细胞增殖的影响;通过补体依赖的细胞毒性(CDC)、抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(ADCC),用乳酸脱氢酶(LDH)释放试剂盒检测Met-scFv对靶细胞A549细胞的毒性影响。结果 ELISA结果提示,Met-scFv与c-Met呈量效关系;流式细胞术和免疫荧光细胞化学染色实验结果提示,与对照组相比,Met-scFv组信号呈阳性,提示Met-scFv与A549细胞特异性结合;Met-scFv抑制A549细胞增殖并产生细胞毒性,且毒性大小与Met-scFv剂量呈正相关。结论制备出靶向c-Met蛋白的Met-scFv,并可在体外识别并介导杀伤A549细胞。

FCGR3A基因多态性对西妥昔单抗介导抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用杀伤A549细胞的影响

目的探讨FCGR3A基因多态性对西妥昔单抗介导抗体依赖的细胞介导的细胞毒(ADCC)作用杀伤A549细胞的影响。方法选取肺腺癌A549细胞作为靶细胞,NKTm细胞为效应细胞。基因测序法检测NKTm细胞FCGR3A基因多态性,CCK-8法检测西妥昔单抗介导NKTm细胞的ADCC活性。结果 NKTm细胞FCGR3A具有基因多态性,分别为V/V、V/F及F/F表型。西妥昔单抗介导3种表型的NKTm细胞的ADCC活性差异具有统计学意义(P=0.0015),其中FCGR3A-158V/V表型的NKTm细胞的ADCC活性比V/F及F/F表型强(P<0.01),而V/F与F/F表型的NKTm细胞ADCC活性差异无统计学意义(P>0.05)。结论西妥昔单抗介导的NKTm细胞ADCC活性与FCGR3A基因多态性有关。

抗精子蛋白17单克隆抗体对人卵巢癌细胞SKOV-3的抑制作用

目的观察抗精子蛋白17单克隆抗体(anti-Sperm protein 17 monoclonal antibody,anti-Sp17mAb)对卵巢癌细胞系SKOV-3的体外抗肿瘤活性和机制。方法采用MTT法观察抗anti-Sp17 mAb对肿瘤细胞SKOV-3的细胞毒作用;以外周血单个核细胞PBMCs为效应细胞,SKOV-3为靶细胞,在效靶比分别为80∶1、40∶1和20∶1的条件下,观察anti-Sp17 mAb的抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用;以SKOV-3为靶细胞,加入浓度为2.5%、5%、10%和20%的健康人新鲜血清作为补体,观察单抗的补体依赖性细胞毒性。结果 anti-Sp17 mAb对SKOV-3无明显细胞毒作用;与对照组相比,单抗对SKOV-3的ADCC作用呈剂量依赖关系,在效靶比为80∶1,孵育24 h后,细胞生长抑制率约为22%;补体的加入也可显著提高单抗对SKOV-3细胞生长的抑制率,在血清浓度为5%,单抗浓度为10μg/ml时抑制率达到了40%。结论 anti-Sp17 mAb对表达Sp17蛋白的卵巢癌细胞株SKOV-3具有明显的ADCC和CDC效应。

登革病毒prM抗体的中和作用及ADE作用研究

【目的】研究登革病毒(DENV)前膜蛋白(pr M)多克隆抗体对不同型别登革病毒的中和作用和抗体依赖性感染增强作用(ADE),为进一步阐明pr M蛋白在登革病毒致病与免疫过程中的重要作用提供依据。【方法】采用ELISA方法检测登革热患者血清中是否存在pr M抗体;用重组登革病毒2型(DENV-2)pr M蛋白免疫家兔,制备pr M蛋白多克隆抗体;采用空斑减数中和试验和流式细胞术检测pr M抗体对4种血清型登革病毒(DENV-1、DENV-2、DENV-3、DENV-4)的中和作用及ADE作用。【结果】登革热患者血清中存在特异性pr M抗体;pr M抗体对4种血清型登革病毒只有部分中和作用,但在一定浓度范围内对DENV1-4型均有明显的感染增强活性,且对异型DENV的感染增强作用强于同型,其中对登革病毒2型未成熟颗粒(im DENV-2)的感染增强作用最为明显。【结论】登革热患者血清存在pr M特异性抗体;pr M抗体对不同血清型DENV均只有较弱的中和活性,但却呈现出较强的ADE效应,证明登革病毒pr M抗体是一种感染增强性抗体。

病毒感染的抗体依赖性增强作用的机制及其意义

抗体协助病毒进入靶细胞,提高感染率,这一现象就是抗体依赖性增强作用(Antibody-dependentenhancement,ADE)。抗体介导病毒感染的敏感性增强的例子已经被很多种不同病毒属的感染证明,有充分的理由相信在一方面保护免疫的诱导作用和另一方面增强敏感性的诱导作用之间存在微妙的平衡。ADE作用的存在,使常规疫苗免疫来防制这类病毒病常常难以奏效。近年来,关于病毒感染的抗体依赖性增强作用的机制研究取得了很大的进步,对有ADE现象病毒疫苗的研发具有十分重大的意义。

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒体外抗体依赖增强作用的初步研究

为了研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)体外抗体依赖增强作用,试验对HP-PRRSV TJ-92株毒液(1×10^(6.0)TCID_(50)/0.1 mL)进行10倍倍比稀释,与等体积2倍倍比稀释的各稀释度HP-PRRSV TJ-92株特异性阳性血清(中和效价为1∶2~5)中和后,在Marc-145细胞上培养增殖72 h,测定收获毒液的病毒含量。结果表明:能使1×10^(0 )TCID_(50)～1×10^(6.0) TCID_(50 )HP-PRRSV毒液病毒含量增高最大的阳性血清稀释度依次为1∶2~9、1∶2^(10)、1∶2~9、1∶2~8、1∶2~9、1∶2~7、1∶2~8,经计算,HP-PRRSV毒液病毒含量最高可提升1×10^(4.5)TCID_(50)/0.1 mL。说明HP-PRRSV在体外表现出抗体依赖增强作用,且被中和HP-PRRSV含量越低时增强作用越明显。

抗体依赖性增强作用及对新型冠状病毒疫苗研发的思考

通常情况下病毒性疫苗诱导机体产生的中和抗体能与入侵病毒结合并使其失去感染宿主细胞和发生疾病的能力,但在某些情况下疫苗接种后诱导产生的抗体不但未产生保护作用,反而加重了疾病的临床表现,即通过抗体依赖性增强作用导致疫苗增强性疾病。本文对既往疫苗临床研究和冠状病毒动物试验研究中发生的抗体依赖性增强作用及其可能的作用机制等进行了综述和分析,提出了对新型冠状病毒疫苗研发过程中安全性的思考,为尽早发现和认知抗体依赖性增强作用/疫苗增强性疾病并进行风险控制提供参考。

人冠状病毒抗体依赖增强作用的研究进展

抗体依赖性增强作用(ADE)已成为病毒致病机制、抗体药物治疗和疫苗开发的关键因素。在特定情况下,抗体能介导冠状病毒与其病毒受体或Fc受体(FcR)结合,增强病毒感染能力,进而导致ADE。ADE的发生受病毒和宿主一系列复杂因素的调节,如病毒包膜蛋白结构、与受体的亲和力、抗体水平等。文章综述了近年来ADE在多种人冠状病毒研究中的最新进展,为疫苗设计、抗体相关药物及免疫治疗等提供一定的理论依据。

B7-H3单抗交联作用对Mo-DC体外生物学功能的影响

探讨B7-H3分子对人外周血单核细胞来源树突状细胞(Mo-DC)体外成熟和生物学功能的影响。采用常规方法从健康人外周血单核细胞诱导DC,在诱导过程中,加入B7-H3单抗21D4共培养,经流式细胞术检测Mo-DC上B7-H3分子和其他共刺激分子的表达,ELISA试剂盒检测培养上清中细胞因子IL-10和IFN-γ的分泌量,并采用3H-TdR掺入法测定T细胞的增殖。结果:B7-H3分子在未成熟和成熟Mo-DC上均有高水平表达,抗人B7-H3单抗21D4能上调Mo-DC表面CD80、CD86和CD83的表达,提高Mo-DC的共刺激能力,促进T细胞的体外增殖,并能显著促进T细胞分泌IL-10。由此表明,B7-H3单抗21D4交联作用可以促进Mo-DC体外成熟,上调其共刺激T细胞的能力。

益母草多糖对小鼠免疫调节作用的影响

目的:探讨益母草多糖对小鼠免疫调节作用的影响。方法:采用水提醇沉法提取益母草多糖,用卵清蛋白为抗原给小鼠注射后,将48只小鼠随机分为4组,分别为益母草多糖低、中、高剂量组及对照组,每组12只。各组小鼠灌胃7天,检测相应抗体生成水平和血清中γ-干扰素(IFN-γ)生成水平。结果:益母草多糖中剂量组卵清抗体生成水平、IFN-γ激发水平均显著高于对照组(P<0.05,P<0.01)。结论:益母草多糖对正常小鼠机体免疫功能有增强作用。

人类新细胞因子CKLFSF2羧基端蛋白在大肠杆菌中的表达纯化、抗体制备与鉴定

哺乳动物细胞表达的人类新细胞因子——趋化素样因子超家族成员-2(CKLFSF2)存在分泌形式,位于CKLFSF2分子的羧基端,具有细胞趋化作用.为进一步研究CKLFSF2羧基端蛋白的结构和生物学功能及抗体制备,构建了GST-CKLFSF2C51原核表达质粒,经原核表达、亲和层析、凝胶过滤,获得GST-CKLFSF2C51融合蛋白和CKLFSF2羧基端蛋白(CKLFSF2C51),纯度可达到95%以上.GST-CKLFSF2C51融合蛋白用于制备多克隆抗体,ELISA方法检测抗体效价阳性,蛋白质印迹检测CKLFSF2哺乳动物细胞超表达细胞裂解液,获得特异性条带与预期大小一致.CKLFSF2C51经N端测序,质谱鉴定与预期结果一致,该蛋白质具有对PC-3细胞趋化的活性,并且该活性可被制备的多克隆抗体中和.上述结果表明,原核CKLFSF2羧基端蛋白具有与CKLFSF2真核表达蛋白类似的细胞趋化活性,原核CKLFSF2羧基端蛋白制备的多克隆抗体可用于免疫组织化学、蛋白质印迹检测,并能中和CKLFSF2蛋白的趋化活性作用.

海帕刺桐碱药理作用的研究

目的:探讨海帕刺桐碱的药理作用。方法:采用小鼠耳廓肿胀法、免疫器官重量和溶血素生成方法,四氯化碳(CCl4)和异硫氰酸萘酯制备肝损伤模型;观察海帕刺桐碱抗炎、免疫增强和抗肝损伤作用。结果:海帕刺桐碱大、小剂量组均明显减少小鼠耳廓重量;增加小鼠胸腺、脾脏重量,提高小鼠血清溶血素水平;明显降低CCl4和异硫氰酸萘酯所致肝损伤小鼠血清中转氨酶活性及胆红素含量。结论:海帕刺桐碱具有抗炎、免疫增强和抗肝损伤作用。