川崎病患儿治疗前后抗体分泌细胞和免疫球蛋白样受体水平的变化

目的:探讨川崎病(KD)患儿B细胞亚群特异性抗体分泌细胞(ASC)、免疫球蛋白样受体(LILR)表达特征。方法:选取我院2018年1月至2021年3月收治的急性期KD患儿32例为观察组及体检健康儿童19例为对照组。其中11例KD患儿(类固醇组)Egami评分>3分,预测可能存在静脉注射免疫球蛋白(IVIG)无反应,采用类固醇药物治疗,其余21例患儿(IVIG组)均给予IVIG治疗,比较对照组与观察组治疗前后CD19^(+)B细胞群中ASC、白细胞LILR表达情况。结果:观察组KD患儿外周血单核细胞(PBMC)水平、B细胞亚群中ASC水平高于对照组(P<0.05)。IVIG组及类固醇组患儿治疗后PBMC水平、PBMC中CD4^(+) T细胞、CD8^(+)T细胞水平均高于治疗前(P<0.05),ASC水平低于治疗前(P<0.05),且类固醇组ASC占比低于IVIG组(P<0.05)。流式细胞术检查显示,4种抑制性LILR亚型在单核细胞上表达,LILRB1在每个B细胞亚群上表达,而LILRB2或LILRB3在B细胞亚群上的表达在急性期和治疗后均较少;LILRB4在ASC上呈现唯一表达,其急性期水平低于单核细胞;观察组ASC的LILRB1、LILRB4水平高于对照组,且治疗后低于治疗前(P<0.05)。结论:KD患儿急性期ASC呈升高趋势且富含LILRB4表达,治疗结果不受类固醇给药影响。ASC可能在KD发生发展过程中发挥着重要作用。

牛磺脱氧胆酸钠和CpGDNA对灭活H9N2禽流感病毒鼻腔免疫鸭的呼吸道抗体分泌细胞的影响

运用牛磺脱氧胆酸钠和CpG DNA配合鸭源禽流感H9N2灭活病毒滴鼻免疫雏鸭,通过检测鸭呼吸道各组织中IgA和IgG抗体分泌细胞面积的变化对免疫效果进行评价。结果发现:应用牛磺脱氧胆酸钠和CpG DNA配合H9N2灭活病毒鼻腔免疫后3、5和7周,鼻腔、气管和气管叉组织中的IgA和IgG分泌细胞面积显著或极显著(P<0.05或P<0.01)高于单独H9N2灭活病毒免疫后的水平;应用CpG DNA配合H9N2灭活病毒鼻腔免疫后鼻腔和气管组织中IgA和IgG分泌细胞的面积有部分提高(P<0.05);而单独运用H9N2灭活病毒鼻腔免疫后IgA和IgG分泌细胞面积同对照组相比没有显著差异。结果表明:在牛磺脱氧胆酸钠和CpG DNA的配合下,禽流感H9N2灭活病毒鼻腔免疫能够提高雏鸭呼吸道组织中IgA分泌细胞和IgG分泌细胞的面积,有效地增强呼吸道局部的免疫应答水平。

LOS诱导的特异性抗体分泌细胞的ELISPOT法检测

目的 :动态测定卡他性莫拉氏菌 (Moraxellacatarrhalis,M .cat)脱毒脂寡糖 (dLOS)蛋白质结合疫苗诱导的抗体分泌细胞的应答状态。方法 :以M .catdLOS蛋白质结合疫苗滴鼻免疫BALB/c小鼠。应用酶联免疫斑点试验 (ELISPOT)检测免疫小鼠不同免疫诱导部位和免疫效应部位 ,包括 :鼻相关淋巴组织 (NALT)、脾脏、颈部淋巴结、鼻内容物、肺脏和派伊尔氏结的特异性抗体分泌细胞 ,并同时测定血清、鼻冲洗液、肺泡灌洗液、唾液及粪便提取液中特异性IgA、IgG和IgM的水平。结果 :M .catdLOS蛋白质结合疫苗免疫小鼠的NALT、脾脏、颈部淋巴结、鼻内容物、肺脏和派伊尔氏结中 ,均测出分泌LOS特异抗体的抗体分泌细胞 ,以鼻内容物中IgA分泌细胞的数目最多 ,其次是在NALT和肺脏中 ,这与特异性抗体测定的结果相一致。结论 :M .catdLOS蛋白质结合疫苗经滴鼻免疫 ,能刺激产生LOS特异的黏膜和全身抗体分泌细胞的应答。ELISPOT试验具有快速、灵敏、特异的优点 ,为动态分析单个抗体分泌细胞应答规律提供了新方法。

炭疽AVA疫苗特异性抗体分泌细胞检测方法的建立

目的 应用酶联免疫斑点（ELISPOT）技术,建立一种检测炭疽AVA免疫后特异性抗体分泌细胞的方法,用于检测和评价炭疽无菌培养滤液抗原特异性抗体形成细胞的功能.方法 无菌分离小鼠脾细胞,建立一系列特异性ELISPOT检测炭疽无菌培养滤液抗原特异性抗体分泌细胞的参数：包括抗原最佳包被浓度、细胞最适孵育时间、反应体系中细胞浓度以及亲和素抗体工作浓度的确定,同时检测上清中抗体效价,并以不相关抗原包被,检验方法的敏感性和特异性.结果 当抗原包被浓度为7.5μg/mL时,不同细胞浓度反应曲线最稳定 细胞数为5×10^6/mL时,不同包被浓度形成的斑点数适量,易于计数 且在抗体稀释度相同情况下,脾细胞孵育时间为3～6 h所获得的斑点数最清晰,背景着色最浅,容易被仪器识别 同时,特异性抗原包被组所获得的斑点频数高于无关抗原包被组（P＜0.01） 反应体系上清中未检测到抗原特异性抗体.结论 该方法敏感、特异,可用于AVA抗原免疫后体液免疫评价.

多发性硬化症髓鞘素组分特异性抗体分泌细胞

本文用酶联免疫班点法(Elispot)检测了23例临床确诊多发性硬化症(MS)和12例无菌性脑膜炎(AM)患者外周血(PB)和脑脊液(CSF)中髓鞘素碱性蛋白(MBP)、髓鞘素结合糖蛋白(MAG)和含脂质蛋白(PLP)特异性IgG抗体分泌细胞。两组患者CSF中该3种抗体分泌细胞均呈明显增多趋势,MS组尤著,但两组PB中该类细胞数均很少。指示对髓鞘素组分的B细胞免疫应答主要局限于与中枢神经系统(CNS)近邻的CSF中,可能是鞘内合成IgG抗体的重要来源。

检测特异性抗体分泌细胞(ASCs)的固相酶联免疫斑(ELISPOT)技术的建立

ＥＬＩＳＰＯＴ技术是目前国外评价疫苗免疫原性和免疫应答机理研究中最常使用的方法。本文用自制的ＮＣ膜２４孔板为固相支持物，建立了检测小鼠脾细胞中特异性ＡＳＣｓ的ＥＬＩＳＰＯＴ技术，在检测方法的特异性、结果的稳定性上均取得了满意的效果。并对该方法的某些实验条件进行了摸索。

性激素对抗体分泌细胞表面分子表达和抗体分泌的影响

目的:探讨性激素调控抗体分泌细胞游走到生殖道的分子机制和对局部抗体分泌的影响。方法:以鼠源杂交瘤细胞SG2和PA4为对象,检测其性激素受体、CXCR4的mRNA和CD31的表达;用流式细胞术和ELISA检测不同浓度性激素作用下,抗体分泌细胞表面与细胞游走相关分子的表达和抗体分泌的变化。结果:SG2和PA4细胞表达雄激素受体和雌激素受体β,表达CXCR4,但不表达CD31。性激素对抗体分泌细胞表面分子的表达和抗体分泌量并没有明显的影响。结论:性激素对抗体分泌细胞游走的调控作用与细胞自身相关黏附分子的变化关系不大,推测可能主要是通过对内皮细胞地址素表达的影响来实现的。

霍乱流行国家中不同年龄组人群接受口服霍乱疫苗后抗体分泌细胞与粪便IgA应答的动力学

儿童和婴幼儿接种口服肠道疾病疫苗后,免疫应答情况会受到多种因素的影响,如年龄、接种疫苗前曾接触（感染）过相关微生物、母乳喂养等。本项研究旨在通过不同临床样本,确定最佳时间点,评估口服肠道疫苗的免疫应答状况。应答状况的确定,

抗体分泌细胞免疫酶斑检测法的建立

本文报道用滤过免疫酶斑检测方法测定抗体分泌细胞（ＡＳＣ）。用国产硝酸纤维素滤膜作为固相抗原载体，经免疫酶染色在滤膜上形成ＡＳＣ酶斑。滤膜经二甲苯透明后可以在显微镜下直接计数ＡＳＣ酶斑。实验比较了包被抗原浓度、培养细胞浓度、酶标二抗浓度以及细胞培养时间等因素对ＡＳＣ酶斑形成的影响。

重组弓形虫热休克蛋白70不同途径免疫小鼠诱导的小肠黏膜IgA抗体分泌细胞及sIgA抗体的动态变化

目的分析重组弓形虫热休克蛋白70(rTgHSP70)鼻内或皮下免疫小鼠诱导的小肠黏膜IgA抗体分泌细胞(IgA antibody-secreting cells,IgA-ASCs)与小肠冲洗液sIgA抗体的动态变化及二者的相关性,探讨其上调小肠黏膜免疫应答的作用机制。方法 BALB/c小鼠90只,随机均分3组:鼻内组(20μg rTgHSP70/只,滴鼻,免疫2次,间隔2周)、皮下组(80μg rTgHSP70/只,背部皮下注射,免疫2次,间隔2周)、对照组(不免疫)。分别于末次免疫后第1、2、3、4、5、6周,每组取小鼠5只,脱颈椎处死,免疫组化法检测十二指肠、空肠及回肠黏膜IgA-ASCs数量,ELISA法检测小肠冲洗液sIgA水平。结果 IgA-ASCs分布于小肠黏膜的固有层中,且鼻内组小肠黏膜IgA-ASCs数量明显高于皮下组和对照组(P<0.001),鼻内组小肠冲洗液sIgA水平在免后1～4周均处于上升阶段,第4周达到高峰,显著高于皮下组和对照组,差异有统计学意义(P<0.001);鼻内组和皮下组小肠冲洗液sIgA水平与十二指肠、空肠、回肠黏膜固有层IgA-ASCs的数量呈正相关(P<0.05)。结论 rTgHSP70经鼻内或皮下免疫小鼠均可诱导小肠黏膜固有层IgA-ASCs和小肠冲洗液sIgA水平的持续高表达,且二者呈正相关,鼻内免疫上调小肠黏膜免疫的作用优于皮下免疫。

肠黏膜免疫：刚地弓形虫感染中抗体分泌细胞及sIgA的地位

病原体经口感染机体后，肠相关淋巴组织受刺激，促进肠黏膜内IgA抗体分泌细胞（IgAASC）的形成，并向肠腔分泌大量的分泌型免疫球蛋白A（sIgA），IgA ASC和sIgA在肠黏膜免疫应答中起了重要作用。BALB／c小鼠经口感染弓形虫RH速殖子后，小鼠小肠黏膜固有层IgA ASC大量增殖，小肠冲洗液sIgA水平持续增高，发挥抗虫效应。小肠冲洗液sIgA水平与十二指肠黏膜IgA ASC数量呈正相关（r=0．732，P〈0．01）。用可溶性速殖子抗原（STAg）鼻内免疫小鼠可诱导十二指肠黏膜固有层IgA ASC高表达，小肠液和血清sIgA水平升高，表明在抗弓形虫感染中STAg鼻内免疫发挥了作用。

系统性红斑狼疮和其他结缔组织病的髓鞘素抗体分泌细胞

系统性红斑狼疮和其他结缔组织病的髓鞘素抗体分泌细胞王维治张凤山闫晓波任潞雪赵晓和系统性红斑狼疮（ＳＬＥ），特别是神经精神性狼疮（ＮＰ－ＳＬＥ）的发病机理迄今未明，类风湿关节炎（ＲＡ）等其他结缔组织病（ＣＴＤ）则少有中枢神经系统（ＣＮＳ）损害的临床表现...

β-BGT结合蛋白免疫的小鼠脾脏中特异性抗体分泌细胞与血清抗体的观察

用β-ＢＧＴ结合蛋白兔疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠、以免疫酶点技术（ＥＬＩＳＰＯＴ）和ＥＬＩＳＡ方法观察免疫后１～８周小鼠脾脏中特异性抗体分泌细胞和相应时期血清抗体的产生情况。结果免疫后２周小鼠脾脏中即产生特异性ＩｇＧ型抗体分泌细胞，７周以后渐趋消失；血清中ＩｇＧ抗体滴度则在第５周以后才开始增高，并持续在恒定水平至８周以后；实验观察期间仅见小鼠毛发枯干、活动少现象，但未见明显肌无力症状出现。上述结果提示：β-ＢＧＴ结合蛋白具有较好的免疫原性，但在重症肌无力（ＭＧ）发病中的致病作用则有待进一步研究。

蛇源裂头蚴感染小鼠空肠免疫球蛋白A抗体分泌细胞数量及分泌型免疫球蛋白A水平观察

目的 观察蛇源裂头蚴感染小鼠诱导免疫球蛋白A（IgA）抗体分泌细胞（IgASCs）数量及分泌型IgA（sIgA）抗体应答水平，了解IgASCs及sIgA在抗裂头蚴入侵中的作用。方法 选取清洁级昆明小鼠100只，雌雄各半，体重为20 ~ 25 g，按体重采用随机数字表法分为对照组和实验组，每组50只。用蛇源裂头蚴喂饲实验组小鼠，每只喂5条；对照组不感染。分别于感染后1、7、14、28、56 d从2组中各取10只小鼠进行解剖，收集空肠液和空肠段组织。采用免疫组织化学法检测空肠黏膜中IgASCs数量，酶联免疫吸附实验（ELISA）检测空肠液sIgA水平。结果 IgASCs分布于空肠黏膜的固有层中，实验组IgASCs数量（以IgASCs阳性细胞率表示）于感染后1 d达到峰值［（64.24 ± 0.60）%］，随后下降，至感染后14 d［（41.98 ± 0.42）%］低于对照组［（43.52 ± 0.94）%，t = - 4.727，P 〈 0.01］。实验组sIgA水平于感染后7 d达到峰值［（22.05 ± 1.43）mg／L］，随后呈下降趋势，于感染后56 d［（21.26 ± 2.59）mg／L］与对照组［（20.00 ± 0.42）mg／L］比较差异无统计学意义（t = 1.516，P 〉 0.05）。实验组感染后7 d，空肠黏膜IgASCs数量与空肠液sIgA水平呈正相关（r = 0.663，P 〈 0.01），而在感染后14 d，二者呈负相关（r = - 0.542，P 〈 0.05）。结论 小鼠感染蛇源裂头蚴后，可诱导IgASCs高水平的表达及sIgA水平的升高，二者在感染后7 d呈正相关。

γ辐射对B淋巴杂交瘤细胞抗体分泌功能作用研究

分泌特异性抗体的Ｂ淋巴杂交瘤细胞，是高度分化的免疫活性细胞。在６０ＣＯγ射线作用下，抗体分泌总量随受照剂量的增大而降低。然而每个克隆细胞的抗体分泌量却随受照射剂量的增加而有上升趋势。抗体分泌细胞受照射后抗体分泌浓度增加的效应，经细胞传代、冻行后丧失。表明抗体分泌功能的增强，是由于电离辐射一过性刺激的结果。实验表明，高度分化了的抗体分泌细胞在电离辐射作用下，存在着潜在致死性损伤，但这种损伤不影响存活细胞的抗体分泌功能。因而提示在放射损伤治疗中，使用能促进免疫细胞分裂、增殖的因子或药物，可能有利于机体免疫功能的恢复。

抗ds-DNA抗体及其分泌型B淋巴细胞对系统性红斑狼疮的病情监测

目的 探讨抗ds-DNA抗体及抗ds-DNA抗体分泌型B淋巴细胞在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)病情监测中的应用价值。方法 选择宁夏回族自治区人民医院2019年1月至2020年10月收治的40例SLE患者为SLE组,同期40例非SLE患者为非SLE组,40例体检结果健康者为健康对照组,对所有研究对象免疫学指标的检测结果进行分析。结果 SLE组患者的抗ds-DNA抗体、抗ds-DNA抗体分泌型B淋巴细胞等检测阳性率均高于非SLE组、健康对照组(P均<0.05);抗ds-DNA抗体、抗ds-DNA抗体分泌型B淋巴细胞的敏感性、阳性预报价值、阴性预报价值高于其他几项抗体诊断价值(P均<0.05);抗dsDNA抗体联合抗ds-DNA抗体分泌型B淋巴细胞的检测特异性及敏感性均优于其他指标(P均<0.05)。结论 抗ds-DNA抗体及抗ds-DNA抗体分泌型B淋巴细胞具有一定的诊断特异性、敏感度,联合检测所获得检测价值更优于其他指标,临床指导价值明显。

弓形虫感染鼠小肠IgA分泌细胞数量与IgA水平动态变化

目的动态观察弓形虫速殖子经口感染小鼠诱导IgA分泌细胞(IgASCs)数量和抗体应答水平。方法BALB/c小鼠96只,随机选取12只以PBS灌胃(0.5ml/只),其余小鼠用RH株弓形虫速殖子灌胃(1×104个/只),分别于感染后2、4、6、8、10、12和14d各随机处死12只。免疫组化检测小鼠十二指肠、空肠和回肠黏膜中IgASCs数量,ELISA测定小肠液和血清IgA水平。结果IgASCs分布于小肠黏膜固有层中,不同肠段IgASCs数量的变化规律各异。随感染后时间的推移,十二指肠黏膜IgASCs数量呈上升趋势。感染后2～8d,空肠黏膜的IgASCs数量升高,随后下降,至14d降至感染前水平。回肠黏膜IgASCs数量在感染后2～6d升高,随后下降,12d降至低于感染前水平。感染后小肠液IgA水平持续增高,血清IgA无明显变化。十二指肠、空肠和回肠黏膜的IgASCs数量与小肠液IgA水平的相关性分别为r=0.732(P<0.01)、r=0.116(P>0.05)和r=-0.429(P<0.01)。结论弓形虫速殖子经口感染小鼠可诱导十二指肠IgASCs高水平表达和小肠液IgA水平增高,两者呈正相关。小肠液中高水平的IgA主要由十二指肠黏膜IgASCs分泌。

刚地弓形虫STAg鼻内免疫小鼠诱导小肠IgA分泌细胞数量及sIgA水平动态变化

目的动态观察刚地弓形虫（简称弓形虫）可溶性速殖子抗原（STAg）鼻内免疫小鼠对小肠IgA分泌细胞（IgASCs）数量和分泌型IgA（sIgA）水平的影响。方法 5～6周龄BALB/c小鼠96只,随机均分为免疫组和对照组。免疫组小鼠用STAg（20μg/只,悬于20μl PBS）滴鼻免疫2次,间隔2周;对照组用等量PBS代替。末次免疫后1周,灌胃感染RH株弓形虫速殖子（1×10~4个/只,溶于0.5 ml PBS）,记录小鼠健康状况及体重。于感染后6、7、8、9、10和1 1 d随机处死每组小鼠各8只,免疫组化检测小鼠的十二指肠、空肠和回肠黏膜IgASCs数量,ELISA测定小肠冲洗液sIgA水平。结果感染后所有小鼠均发病,但免疫组症状较轻,体重增加幅度明显高于对照组（P〈0.05）,感染后第7天对照组小鼠死亡2只。两组小鼠小肠冲洗液sIgA水平均呈升高趋势,但免疫组高于对照组（P〈0.05）。十二指肠IgASCs数量,对照组的略有增加,而免疫组持续升高至9 d后维持较高水平为20.65±1.67,对照组为12.30±2.67,对照组和免疫组十二指肠IgASCs数量与小肠液sIgA水平的相关性分别为r=0.378（P〈0.05）和r=0.566（P〈0.05）。空肠IgASCs数量,对照组的呈下降趋势,免疫组的持续升高至9 d后略下降。对照组和免疫组空肠IgASCs数量与小肠液sIgA水平的相关性分别为r=-0.557（P〈0.05）和r=0.218（P〉0.05）。对照组回肠IgASCs数量持续下降,免疫组的始终保持较高水平,对照组和免疫组回肠IgASCs数量与小肠液sIgA水平的相关性分别为r=-0.685（P〈0.05）和r=-0.053（P〈0.05）。结论 STAg鼻内免疫能使经口感染弓形虫小鼠空肠和回肠IgASCs数量增加,小肠黏膜免疫屏障功能增强。

Th17细胞在肾脏疾病中的作用研究进展

迄今为止，辅助性T（T help，Th）细胞按照其分化和功能可分为几大亚群：Th1细胞、Th2细胞、调节性T细胞（regulator T cell，Treg）和Th17细胞。早期发现的Th1细胞参与细胞免疫和迟发型超敏反应；Th2细胞辅助B细胞分化为抗体分泌细胞，与体液免疫应答相关；