抗交叉反应性糖类决定簇抗体吸附剂在过敏原体外检测中的应用价值

目的探讨抗交叉反应性糖类决定簇(CCD)抗体吸附剂在过敏原体外检测中的应用价值。方法收集2018年12月至2019年9月杭州师范大学附属医院就诊的92例过敏原特异性IgE(sIgE)阳性患者的静脉血样本,其中CCD指示带阳性62例(CCD阳性组),阴性30例(CCD阴性组)。两组均采用抗CCD抗体吸附剂处理样本后再次进行过敏原检测,对比前后两次检测结果,分析抗CCD抗体吸附剂在过敏原体外检测中的应用价值。结果经抗CCD抗体吸附剂处理后,CCD阳性组有61例CCD指示带转阴,转阴比例为98.4%,其阳性条带数明显减少,部分阳性过敏原sIgE数值明显降低(如树木组合、豚草、艾蒿、蟑螂、葎草、花生、黄豆和蟹);30例CCD指示带阴性过敏原的检测结果处理后无变化。结论抗CCD抗体吸附剂处理样本后可以明显减少CCD干扰引起的假阳性,但不影响真阳性,可以有效提高检测结果的准确性,有利于临床医生确定特异性过敏原,有效预防和控制变态反应性疾病的发生发展。

双抗体夹心酶联免疫吸附法检测鱼糜制品中鸡蛋卵白蛋白

目的建立双抗体夹心酶联免疫吸附(sandwich enzyme linked immunosorbent assay,sELISA)法检测鸡蛋卵白蛋白(ovalbumin,OVA)的方法,组装定量检测鱼糜制品中OVA含量的ELISA检测试剂盒。方法确定各步骤反应时间,使用棋盘法确定捕获抗体和检测抗体的最佳工作浓度,建立检测方法并对其性能进行评价。结果反应最佳条件为:抗原孵育20 min,检测抗体孵育20min,酶促反应显色10 min。兔抗OVA抗体为捕获抗体,工作质量浓度为1μg/mL,辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记兔抗OVA抗体为检测抗体,1:5000(V:V)稀释。采用四参数逻辑曲线拟合标准曲线,所建立sELISA方法的检测范围为8.5~200.0 ng/mL,检出限为3.5 ng/mL,定量限为8.5 ng/mL。批次内和批次间的变异系数分别为2.31%~4.58%和6.06%~12.23%;鱼糜基质中的回收率为80%~130%;测得28种常见食物样品中4种样品的交叉反应率小于0.002%;试剂盒在4℃保存6个月期间,标准品检测结果的变异系数为4.29%~18.91%。结论建立的方法快速、灵敏、准确、稳定性好,可用于鱼糜制品中鸡蛋OVA的定量检测。

384例性病门诊就诊者荧光梅毒螺旋体抗体吸附试验结果分析

目的对384例荧光梅毒螺旋体抗体吸附试验(FTA-ABS)检测结果进行分析,更好地为临床提供梅毒诊断的依据。方法对2012年确诊梅毒并经FTA-ABS检测为阳性的384例患者的血清,同时用梅毒螺旋体明胶颗粒凝集法(TPPA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)进行复核检测,并对其中的40例患者进行脑脊液FTA-ABS检测。结果 384例FTA-ABS检测确诊的阳性病例中,梅毒抗体IgG、IgM同时阳性的59例(占15.4%),抗体IgG阳性IgM阴性的325例(占84.6%)。40例脑脊液中抗体IgG阳性的12例,未见抗体IgM阳性。梅毒合并感染HIV的患者有29例(占7.6%),其中RPR滴度>1∶8有21例(72.4%)。单纯梅毒感染的355例(92.4%),其中RPR滴度>1∶8有97例(27.3%)。结论 FTA-ABS试验敏感性和特异性高,值得在临床中推广。

犬粪便棘球绦虫抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测法建立与应用

目的研究双抗体夹心酶联免疫吸附检测犬粪便棘球绦虫虫体抗原的方法并评价其在实际工作中的应用价值。方法实验犬12只，分实验组和对照组，实验组用活化绵羊源原头蚴（G1型）作人工感染；感染后0～8周内收集粪便，56d宰杀实验犬，收集成虫；制备成虫抗原和虫体代谢／分泌抗原，蛋白酶K处理抗原并分别免疫成年绵羊和新西兰白兔；绵羊抗血清用80％饱和硫酸铵沉淀、透析，兔抗血清过IgG亲和层析柱，分别获得纯化抗体；观察犬粪便在PBS液中-80℃冷冻3d或在含1％Formalin的PBS液中70℃～80℃加热8h的处理方法对检出结果的影响。运用该方法对四川省甘孜县达通玛区4个乡的580只家犬吡喹酮每6月一次驱虫前后的粪抗原进行监测。结果试验系统的敏感性为92．3％，特异性为80％；粪抗原从感染后的第2～3周可检出；两种样品处理方法都可以灭活虫卵但不影响检出效果；检测方法可同时用于对细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫感染的诊断；达通玛区家犬粪抗原阳性率从2000年的50％下降到2005年的17％。结论检测方法具有较高的特异性和敏感性；推荐粪便用加热的方法处理可以灭活虫卵以防止生物污染；该方法可以在基层推广应用。

梅毒螺旋体抗体酶联免疫吸附试验作为初筛方法的梅毒逆向筛查程序的可行性分析

目的:探讨TP-ELISA作为初筛方法的梅毒逆向筛查程序的可行性分析。方法:选择2016年1月至2017年6月在大连大学附属中山医院各门诊及病房就诊的梅毒筛查者,并收集其标本15378份,采用梅毒螺旋体抗体酶联免疫吸附试验(TP-ELISA)、梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)与甲苯胺红不加热血清学试验(TRUST)筛选分析。以TPPA为标准,比较各种方法的特异性、灵敏度以及总符合率,统计TP-ELISA的S/CO值与TPPA阳性结果的相关性。结果:TPPA筛查阳性率为3. 57%,TP-ELISA筛查阳性率为3. 83%,TRUST筛查阳性率为2. 38%。TP-ELISA的灵敏度(98. 9%)明显优于TRUST(64. 3%),差异具有统计学意义(P <0. 01)。TP-ELISA与TRUST特异性与符合率差异无统计学意义(P> 0. 05)。梅毒筛查时,TP-ELISA与TPPA在梅毒筛查时有较好的一致性(K=0. 945),TRUST与TPPA一致性不明显(K=0. 639)。根据梅毒抗体检测的特点以及实验室TP-ELISA的检测方法,当≤1. 0时,S/CO为阳性,> 1. 0时S/CO为阳性。TP-ELISA检测结果的假阳性样本率为75. 00%(54/72),其主要是发生在S/CO值1. 0～2. 99之间。随着TP-ELISA的S/CO的数值增高,TPPA的符合率也依次增加,S/CO> 5. 0时,TPPA的阳性率为100%。TRUST的检测阳性样本有13例,患者主要有妇产科正常妊娠8例,口腔科牙周炎3例,心内、呼吸2例。TP-ELISA假阴性6例,其中分布为泌尿科患者3例,骨科患者1例,妇产科患者2例,其被疑为梅毒早期。TP-ELISA假阳性患者72例。结论:TP-ELISA的灵敏度和特异性显著优于TRUST,有利于梅毒筛查效果,值得临床上大样本筛查。

抗体夹心酶联免疫吸附法测定鸡白细胞介素-2

利用抗鸡白细胞介素-2(ChIL-2)单克隆抗体作包被抗体、生物素标记的抗ChIL-2多克隆抗体作检测抗体建立了一个抗体夹心酶联免疫吸附测定系统.此系统对鸡白细胞介素-2的检测灵敏度为50 pg/mL.两种抗体与鸡干扰素-α和人白细胞介素-2等细胞因子不产生任何非特异性反应.以不同种类的促有丝分裂剂或鸡病毒刺激鸡淋巴细胞,培养液中分泌产生的天然鸡白细胞介素-2的量用此系统检出.在促有丝分裂剂中,植物血凝素(PHA)导致ChIL-2的产生量最高;在病毒方面,传染性法氏囊病毒最能促使ChIL-2的分泌.本研究建立的抗体夹心酶联免疫吸附测定系统为我们以定量方式测定鸡白细胞介素-2提供了一个灵敏度高、特异性好的工具.

抗体夹心酶联免疫吸附法测定重组E.coli L-天冬酰胺酶及药代动力学研究

目的 建立大鼠血浆中重组E .coliL 天冬酰胺酶的抗体夹心酶联免疫吸附测定法 ,并进行药代动力学研究。方法 应用重组E .coliL 天冬酰胺酶免疫家兔 ,分离IgG ,用DEAE 纤维素柱色谱纯化 ,辣根过氧化物酶标记抗体 ,建立抗体夹心酶联免疫吸附法 ,测定大鼠血浆中重组E .coliL 天冬酰胺酶浓度。结果 方法的线性范围为 1～6 4U·L- 1 ,血药浓度与时间的关系符合二房室模型 ,初期和末端的T1 2 分别为 0 5 0～ 0 5 7h和 2 4 5～ 3 0 2h ,AUC与剂量成正比。结论 建立的抗体夹心酶联免疫吸附法在灵敏度、特异性、线性范围、精密度和回收率等方面 ,满足药代动力学研究要求。实验方法和重组E .coliL

ELISA法与胶体金吸附法检测丙肝抗体特异性比较

目的比较丙型肝炎病毒(HCV)抗体酶联免疫吸附试验(ELISA)与胶体金吸附试验的特异性。方法采用酶联免疫吸附试验方法和胶体金免疫吸附试验方法同时检测500例临床输血前患者血清。如ELISA法为阳性,再采用胶体金吸附试验方法重新检测抗HCV。结果在500例标本中,抗HCV ELISA法阳性9例,阳性率1.8%;胶体金吸附试验法阳性5例,阳性率1%。结论ELISA法检测抗HCV检出率高出胶体金检测法0.8%。

双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测布氏菌抗原的实验研究

目的 建立检测布氏菌抗原特异、敏感和快速的试验方法。方法 在制备高滴度布氏菌抗体辣根过氧化物酶结合物及其冻干制品基础上 ,建立检测布氏菌抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验 (DAbS -ELISA) ,包括常规DAbS -ELISA及快速DAbS -ELISA。用建立的两种DAbS -ELISA法对布氏菌菌体抗原及可溶性抗原进行有关其特异性及敏感性对比观察 ;同时对模拟的这些抗原污染的饮用水标本进行对比观察。结果 常规DAbS -ELISA检测布氏菌 5 44A、16M、13 3OS及 10 4M的菌体抗原以及布氏菌 16M可溶性抗原的敏感性分别为 0 .2 2万菌 /ml、12 0万菌 /ml、190万菌 /ml、2万菌 /ml和 0 .0 12 μg/ml ;用快速DAbS -ELISA法的敏感性分别为 2 2万菌 /ml、12 0万菌 /ml、190 0万菌 /ml、2 0万菌 /ml和 1.2 μg/ml;同时用这两种DAbS -ELISA检测上述抗原污染的饮用水标本其敏感性分别为 0 .2 2万菌 /ml、190 0万菌 /ml、2 0万菌 /ml和 0 .0 12 μg/ml ;以及 2 2万菌 /ml、12 0万菌 /ml、190 0万菌 /ml、2 0 0万菌 /ml和 1.2 μg/ml。而且这两种DAbS -ELISA法检测不含布氏菌抗原的所有对照均为阴性反应。结论 双抗体夹心酶联免疫吸附试验是检测布氏菌抗原的特异、敏感、快速和适用的试验方法。

甜菜丛根病的双抗体夹心酶联免疫吸附测定

对甜菜丛根病毒采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定(Double antibody sandwich assay,DAS-ELISA)法进行了检测,并对测定方法及检测结果进行了分析讨论。

双抗体夹心酶联免疫吸附法检测杏仁过敏原苦杏仁球蛋白

提取中国甜杏仁过敏原蛋白苦杏仁球蛋白,分别制备兔和鼠多克隆抗体,建立双抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA)法。结果表明:对甜杏仁中苦杏仁球蛋白的检测限为(6.36±1.02)μg/L;对中国苦杏仁及美国大杏仁中苦杏仁球蛋白的检测限分别为(12.11±1.70)μg/L和(18.95±1.52)μg/L,且与常见的14种植物性蛋白没有交叉反应,表明该方法具有良好的特异性。将该方法用于法式小面包、饼干和脱脂牛乳中杏仁过敏原的检测,苦杏仁球蛋白的添加回收率为78.94%～125.15%,且相对标准偏差均低于5.81%。

动物医院临床血清样品中干扰抗体的筛查及干扰消除

为了筛查动物医院临床血清样本中的干扰抗体以避免其实验室检测结果呈现假阳性,影响临床诊断,试验采用一种独立于物种的双抗体夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)法对来自于福建省部分地区动物医院接诊的犬、猫血清样本进行干扰抗体筛选和评估,用鸡IgY替换纯化小鼠IgG进行干扰抗体消除试验,并对干扰抗体阳性率与样本基本特征进行关联性分析。结果表明:在83份犬血清样本中,有19份样本为干扰抗体阳性,阳性率为22.9%;在81份猫血清样本中,有11份样本为干扰抗体阳性,阳性率为13.6%。经干扰抗体消除试验后,所有阳性血清样本中的干扰抗体均得到了有效消除。不同年龄、性别、绝育情况与品种犬之间的干扰抗体阳性率均差异不显著(P>0.05);不同年龄猫之间的干扰抗体阳性率显著差异(P<0.05),不同性别、绝育情况与品种之间的干扰抗体阳性率差异不显著(P>0.05)。说明所检测的犬、猫血清样本中存在干扰抗体,用鸡IgY替换纯化小鼠IgG可对干扰抗体进行有效消除。

抗体夹心酶免疫吸附法测定重组E.coli水蛭素HV3研究

将重组E. coli水蛭素HV3和BSA交联后免疫豚鼠和家兔,DEAE-纤维素柱层析纯化IgG.用这两种抗体和酶标二抗羊抗兔IgG-HRP建立三抗体夹心酶联免疫吸附法,测定重组E. coli水蛭素HV3的含量.本测定方法的线性范围为0～2 ng/ml,灵敏度为0.04 ng/ml.建立的三抗体夹心酶联免疫吸附法测定重组E.coli水蛭素HV3具有良好的精密度、回收率、灵敏度和特异性.

抗体交叉吸附－解离测定毛发ABO血型

抗体交叉吸附－解离测定毛发ＡＢＯ血型法医学教研室王建文，陈巧凤关键词热解离法；毛发血型；胶粘；抗体交叉吸附中图号Ｄ９１９．２６０年代以来，热解离法已作为国内外法医学测定毛发ＡＢＯ血型的常规方法［１］，尽管不断有人对此法进行研究探讨，仍然有假阴性或假阳...

鸭血管紧张素转换酶2(ACE2)双抗体夹心ELISA检测方法的建立与应用

为建立鸭血管紧张素转换酶2 (angiotensin converting enzyme 2, ACE2)双抗体夹心酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)定量检测方法,首先利用纯化的鸭ACE2重组蛋白,成功制备了兔抗鸭ACE2多克隆抗体,间接ELISA法确定抗体效价为1∶800;然后利用制备的鼠抗鸭ACE2多克隆抗体作为捕获抗体,通过戊二醛二步法对兔抗鸭ACE2多克隆抗体进行HRP标记,并将HRP标记的兔抗鸭ACE2多克隆抗体作为检测抗体,纯化获得的鸭ACE2重组蛋白作为标准品,建立鸭ACE2双抗体夹心ELISA定量检测方法,并对抗体浓度、捕获抗体最适包被条件、孵育条件、封闭条件及显色条件等进行优化;通过Western blot法检测正常白鸭与患传染性浆膜炎的病鸭不同组织间ACE2表达的变化;利用RT-qPCR方法检测正常鸭与患传染性浆膜炎的病鸭不同组织中ACE2基因的相对表达量。结果表明:所建立的双抗体夹心ELISA方法最低检测浓度为5 ng·mL^(-1),最佳线性范围为25~1 600 ng·mL^(-1),批内变异系数为1.65%~5.62%,批间变异系数为3.66%~6.81%,可检测出麻鸭各组织中ACE2含量。传染性浆膜炎组白鸭以及健康鸭心脏、肝脏等组织样品ACE2含量或表达存在差异,心脏组织中显著升高或上调;鸭传染性浆膜炎组心脏中ACE2 mRNA水平显著上调,肝脏组织中ACE2 mRNA水平升高不明显。采用该ELISA方法对不同畜(大鼠、猪、羊)、禽(鸭、鸡、鹅)的不同组织中ACE2进行了定量测定,证实该方法在不同畜禽上存在较大种属差异,仅适用于家禽ACE2的定量检测。综上,该研究成功建立了鸭ACE2检测的双抗体夹心ELISA方法,可用于禽类样品中ACE2的快速定量检测。

肾移植受者血清抗血管内皮细胞特异性抗体的提取和纯化

目的探讨肾移植术后出现排斥反应的受者血清中抗血管内皮细胞特异性抗体的提取和纯化方法。方法首先分离培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)。收集肾移植术后肾功能不良受者的血清样本,应用流式细胞术进行抗血管内皮细胞特异性抗体的筛选;用Luminex抗体检测平台检测血清中抗人类白细胞抗原(HLA)和主要组织相容性复合体Ⅰ类相关链A(MICA)的抗体。在确定血清标本中存在有抗血管内皮细胞特异性抗体后,用HUVEC将其吸附。洗涤细胞后再将吸附的抗体从细胞膜上洗脱下来,再用Protein-A/G磁珠再次纯化和浓缩洗脱液中的抗体Ig G。采用流式细胞术检测洗脱液中抗体活性,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)凝胶和免疫印迹法鉴定纯化的抗血管内皮细胞特异性抗体(Ig G)。结果在386例肾移植受者的血清中,选取血清肌酐(Scr)>400μmo I/L、抗HLA抗体阴性、抗MICA抗体阴性和荧光反应强度(MFI)>16的5例受者的血清样本,纯化后的抗血管内皮细胞特异性抗体Ig G在SDS-PAGE凝胶显示免疫球蛋白重链(纯度>95%)。流式细胞术结果显示纯化的抗体具有重新结合血管内皮细胞表面抗原的特性。结论采用人脐静脉血管内皮细胞吸附肾移植受者血清中抗血管内皮细胞特异性抗体的提纯方法可取得较好效果。

化学发光微粒子免疫分析法检测梅毒螺旋体抗体的应用评价

目的评价化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)在梅毒实验诊断中的应用。方法以荧光密螺旋体抗体吸附试验(FTA-ABS)为金标准,以梅毒螺旋体胶凝试验(TPPA)为相对标准,将CMIA用于1 090份来自住院和皮肤科门诊患者的血清标本中梅毒抗体检测。结果1 090份血清标本中,FTA-ABS检测阳性125例,阳性率为11.47%;TPPA检测阳性124例,阳性率为11.38%;CMIA检测阳性126例,阳性率为11.56%。CMIA与FTA-ABS阳性率比较,差异无统计学意义(χ2=0.005,P>0.05);CMIA与TPPA阳性率比较,差异亦无统计学意义(χ2=0.018,P>0.05);以FTA-ABS为金标准,CMIA敏感性为100.00%(125/125),特异性为99.90%(964/965)。以TPPA为相对标准,CMIA敏感性为100.00%(124/124),特异性为99.79%(964/966)。结论CMIA具有自动化、量化、检测周期短的特点,值得推荐为梅毒抗体的实验室批量检测。其与FTA-ABS的检出率相当,是否能用于临床诊断尚待进一步的探讨与评估。

白色念珠菌烯醇化酶抗原双抗体夹心法的建立及应用

目的建立定量检测白色念珠菌烯醇化酶抗原的双抗体夹心法,为后续定量检测念珠菌性阴道炎患者阴道分泌物中的烯醇化酶抗原提供方法学基础。方法用方阵滴定法确定最佳包被抗体浓度和最佳酶标二抗浓度,建立检测白色念珠菌烯醇化酶抗原的ELISA法,用该法检测白色念珠菌标准菌株SC5314培养上清中烯醇化酶抗原的浓度,初步探索应用于诊断外阴阴道念珠菌病。结果最佳包被抗Eno单抗浓度为4.15μg/mL;酶标二抗HRP标记的抗烯醇化酶多抗最佳稀释倍数为1∶1000。在第12小时时白色念珠菌培养上清中的烯醇化酶抗原开始检出,随着培养时间的延长,其上清中Eno抗原的浓度也随着逐渐增高,第48小时时达到峰值后趋于稳定。阴道分泌物上清中烯醇化酶抗原浓度随着真菌培养菌落计数的增加其浓度也在增加,有很好的相关性。结论成功建立了定量检测白色念珠菌烯醇化酶抗原的双抗体夹心ELISA方法,可应用于评价念珠菌性阴道炎患者阴道分泌物中的烯醇化酶抗原的水平。