采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源抗肾癌抗体基因库

目的采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源抗肾癌抗体基因库。方法分离肾癌患者的外周血淋巴细胞(PBMC),提取PBMC的总RNA,采用RT-PCR的方法扩增抗体全长Kappa型轻链(LCκ)和重链可变区(VH)基因,分别插入载体pDGB-HC-TM,电击转化感受态大肠杆菌TOPO10,构建轻、重链抗体基因库,然后将轻、重链抗体基因库联合转染293T细胞,流式细胞仪分析全长人源抗体在293T细胞表面的表达。结果成功构建IgG1-Kappa型抗肾癌抗体基因库,随机挑选的克隆经DNA序列分析显示轻、重链库的序列正确性达90%(9/10)和80%(8/10),流式细胞仪分析显示来自轻、重链库的上述克隆各有7个可检测到相应基因在293T细胞表面的表达,可表达抗体库库容量高达7.5×1010。结论 IgG1-Kappa型抗肾癌抗体基因库转染293T细胞后能够在细胞表面表达全长人源抗体,抗体的多样性为下一步筛选特异性抗体奠定良好的基础。

入侵检测免疫模型中抗体基因库的生成和进化

文中简要分析了当前入侵检测技术存在的问题和发展方向,结合人体免疫理论,提出一种基于检测代理的分布式网络入侵检测免疫模型。为了提高免疫系统识别异常的轻负荷和适应性,引入粗集理论的约简算法,用于待检数据的预处理和抗体基因库的生成,并结合抗体进化原理不断对基因实施进化。该模型可降低待检数据的冗余,保持抗体基因的进化和适应性,提高入侵检测的效率和准确性。

鼠抗人转铁蛋白抗体轻链与重链可变区基因库的制备

以纯化的人转铁蛋白免疫小鼠,测其血清效价,合乎要求后杀鼠取脾脏并以异硫氰酸胍和酚的混合溶液将其匀浆,再以氯仿抽提、异丙醇沉淀和乙醇洗涤,所得总RNA以oligo(dT)纤维素离心柱分离纯化制备mRNA,使mRNA达到cDNA合成所需的浓度后,反转录制备出cDNA,在合成的cDNA中加入轻、重链引物,扩增制备出小鼠抗人转铁蛋白抗体的轻、重链可变区基因库。

用导向选择链更替技术建立抗肝癌抗原HAb18G的人源性Fab基因库

目的 :在嵌合HAb18 Fab抗体的基础上 ,利用载体pComb3X ,采用导向选择链更替技术建立全人源性Fab基因库。方法 :用RT PCR自肝癌患者外周血单个核细胞 (PBMC)中 ,扩增全套人抗体Fd基因片段和L链基因。首先 ,将Fd基因克隆入已含嵌合L链基因的展示载体pComb3X/CL中 ,建立人 -鼠杂合的Fab基因库 ,以原核表达的非融合HAb18G的胞外区片段为抗原 ,筛选杂合的Fab基因 ,以得到人Fd基因。然后应用筛选出的Fd基因与人L链基因库配对 ,建立全为人Fab的基因库 ,并筛选全人Fab基因。将IPTG诱导的表达菌裂解 ,取其上清对pⅢ Fab融合蛋白的功能进行分析 ,并对其编码基因进行测序。结果 :建立了库容为 2× 10 7的杂合Fab基因库 ,经 6轮筛选后得到 7株杂合Fab基因。利用筛选的人Fd基因建立了库容为 0 .8× 10 7的全人Fab基因库 ,经 4轮筛选得到 2株亲和力较高、特异性强的人Fab基因。测序结果显示 ,2株Fab基因具有相同的Fd基因序列 ,与亲本抗体同属IgG2亚类 ;L链基因为κ型 ,可变区均属于Vκ3家族。结论 :利用导向选择链更替技术 ,筛选出特异性较强、完全人源化的抗肝癌抗原HAb18G的Fab抗体 ,为进一步的工作打下了基础。

单克隆抗体技术的发展——基因工程抗体

DNA重组技术的发展促进了基因工程抗体的研究,近些年来有多种基因工程抗体相继问世.本文对新发展起来的基因工程抗体技术进行了概述.

哺乳动物细胞表面展示全长类风湿关节炎抗体库的构建

目的采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源类风湿关节炎抗体库。方法分离类风湿关节炎患者的外周血淋巴细胞,提取总RNA,采用RT-PCR的方法扩增抗体全长轻链基因和重链可变区基因,分别插入哺乳动物细胞表达载体pDGB-HC-TM,电击转化感受态大肠杆菌TOPO-10,分别构建抗体轻链基因库和抗体重链基因库,然后将抗体轻链、重链基因库联合转染293T细胞,用流式细胞仪分析全长人源抗体在293T细胞表面的表达。结果成功构建了类风湿关节炎患者来源的IgG1-Kappa型抗体基因库,随机挑选单克隆经DNA序列分析显示轻链库、重链库的序列正确率分别为80%和60%,可表达的抗体库多样性为6.13×1010。结论类风湿关节炎抗体基因库转染293T细胞后能够在细胞表面表达全长人源抗体,所展示的抗体库具有良好的多样性,能够为下一步筛选特异性抗体奠定基础。

生物免疫原理在网络入侵检测中的应用

针对目前入侵检测系统存在的问题,根据生物免疫原理,提出基于生物免疫原理的分布式网络入侵检测模型,对该模型中关键部分检测器的建立和检测规则进行重点研究.该模型通过现有检测规则对入侵行为的检测,抗体基因库不断自动进化,新的检测规则不断自动产生,从而提高了入侵检测系统对未知入侵的识别能力和系统的自适应性,提高了入侵检测效率.

一种基于人工免疫理论的入侵检测模型

基于智能技术的异常检测正成为IDS研究的一个重要方向,其研究目标主要是提高检测系统的准确性、实时性、高效性以及自适应性,借鉴生物免疫系统的计算机免疫系统将成为解决入侵检测问题的有效手段。本文分析了生物免疫系统的原理,结合生物免疫理论,提出一种基于检测代理的分布式网络入侵检测免疫模型。

抗体高通量体外筛选技术及规模制备的构建

医用人源抗体是当今新药研究的重点。科学研究已证明，患者含有抗疾病抗体基因。因此，从患者外周血中构建抗体基因库，筛选抗体是开发人源抗体新药的一条有效途径。

国内外大事记

<正> ▲中国外逃贪官大限将至 8月27日,全国人大批准了《联合国打击跨国有组织犯罪公约》。《公约》主要针对有组织犯罪集团,洗钱、腐败和妨碍司法四大类犯罪。《公约》除了强调国家与国家间的司法合作,还明确提出“引渡”的义务。这个《公约》将于9月29日生效。