三种方法检测弱抗体抗原反应效果分析

目的:对常用盐水法、凝聚胺以及微柱凝胶技术3种方法检测弱ABO抗原抗体反应效果进行评价分析。方法:采用我站发现的2例AxB和A3B标本,分别以其红细胞与10例B型个体的血浆反应,以其血浆与10例AB型的红细胞反应,同时采用3种方法进行检测比较检测效果。结果:没有出现预期的结果中,盐水试管法有4例,凝聚胺法20例,微柱凝胶卡技术29例。结论:检测ABO弱抗原抗体反应能力以盐水法检测灵敏度最高,在交叉配血时,为了确保输血安全,应该不能省略盐水法,以防弱ABO抗体引起的输血反应。

用表面等离子体谐振(SPR)技术测试抗原抗体结合反应

利用自行初步设计的SPR传感仪,对抗原抗体结合反应进行测试,分析研究结合反应中两者的适宜比例。实验表明,所得曲线与理论基本相符。

应用电化学免疫传感器检测大片形吸虫抗原抗体反应的研究

应用电化学免疫传感器,以恒电位法检测了大片形吸虫的抗原抗体反应,结果表明,该传感器可应用于大片形吸虫的抗原抗体反应的检测,阳性血清与阴性血清的电流响应曲线具有明显的离散度;初步试验表明,该法的检测结果相对于ELISA检测结果,其符合率为83.3%;该法还具有操作简便、检测快速、选择性好等特点,测定一个样品用时不到1h,每测一个样品血清用量仅10μl,与羊等多种血清无交叉反应。

微柱凝胶法、盐水法和凝聚胺法在弱抗原抗体反应中的应用

目的比较微柱凝胶法、凝聚胺法以及盐水介质法检测弱抗原抗体反应的效果。方法随机收集老年人和婴儿血浆40份,分别用三种方法检测其与相应的标准RBC反应效果。另收集健康体检者血浆40份,做一系列的倍比稀释,分别用三种方法检测其与相应的标准RBC反应效果。结果在检出弱抗体反应中,微柱凝胶法检出率85%,与凝聚胺法相比,差异有统计学意义(P<0.05),与盐水介质法相比,差异无统计学意义(P>0.05)。当正常人血浆1∶40稀释时,微柱凝胶法检出率与其他两种方法相比,差异有统计学意义(P<0.05);血浆1∶80稀释,三种方法两两相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论微柱凝胶法敏感性最高,结果观察更直观,可作为交叉和血常用的方法。盐水法敏感性也较高,操作简单,影响因素较少,可和微柱凝胶法联合应用于交叉配血试验,以保证输血安全。

海藻糖在不同的抗原-抗体反应体系中的应用

目的比较海藻糖(trehalose)以及其他封闭液在多种抗原抗体反应体系中以及膜基质反应体系中应用的可行性,并观察海藻糖对预包被板抗原、抗体稳定性的保护作用。方法采用间接、双抗体夹心ELISA、Dot-ELISA和Western Blot观察海藻糖作为封闭剂的作用,特别是对糖结合抗原抗体反应体系敏感性与检测本底的影响。结果在一定的时间内,不同浓度的海藻糖封闭液均可以在不影响各反应体系敏感性的前提下,抑制Dot-ELISA和Western Blot体系中的非特异性吸附,封闭效果明显优于其他二糖封闭液与部分传统封闭液;并可有效封闭糖结合抗原的抗体反应;更重要的是,海藻糖封闭液可在20天内有效保护37℃以上高温环境中预包被板蛋白的活性。结论海藻糖能够作为封闭液,应用于糖结合抗原抗体反应体系、部分以PVDF膜为基质的抗原抗体反应体系,并可以在一定时间内保护高温条件下预包被板抗原、抗体的稳定性。

固相表面的抗原抗体反应模型与主动式生物芯片系统

为了克服现有被动式生物芯片的不足,我们从抗原抗体反应的基本原理出发,建立了固相表面的抗原抗体反应模型,并根据模型设计了一种新型的主动式蛋白芯片系统,该系统中引入负压发生装置及控制装置,可对硝酸纤维素(NC)膜上发生的抗原抗体反应进行控制。并对该系统进行了仿真,结果表明它具有快速、稳定、鲁棒性好等优点,能满足实际要求。该系统将有助于提高抗原抗体反应的效率,改善芯片检测结果的重复性和准确性。

抗牛CuZn-SOD抗血清与恶性肿瘤患者血清中CuZn-SOD的抗原抗体反应

建立了化学发光免疫分析方法研究抗牛CuZn-SOD抗血清与恶性肿瘤患者血清中CuZn-SOD的抗原抗体反应。应用本法定量检测了210名健康成人,47例良性疾病和106例恶性肿瘤患者血清中免疫学性质改变的CuZn-SOD,结果表明恶性肿瘤患者血清中CuZn-SOD与抗牛CuZn-SOD抗血清之间出现显著的抗原抗体反应,从而发现恶性肿瘤患者血清中存在着免疫学性质改变的CuZn-SOD。

单抗原免疫微珠法在人组织相容性抗原反应抗体检测中的局限性及影响因素分析

人组织相容性抗原反应抗体(human leukocyte antigen-antibody,HLA-Ab)的检测已成为诊断及检测肾移植术后排斥反应的重要指标。单抗原免疫微珠法(single antigen beads,SAB)是一种灵敏度高、特异性强的HLA-Ab检测方法。然而,SAB检测结果的分析和解释较为复杂,需要综合考虑多方面的影响因素。本文将讨论使用此方法对HLA-Ab进行检测时的局限性、影响因素及解决办法。希望可以通过对上述问题的探讨来进一步完善SAB检测结果的解读与应用。

动物抗原和抗体检测的方法

检测动物的抗原和抗体有沉淀反应、凝集反应、补体参与抗原抗体反应。下面介绍前两种。 1沉淀反应 适量的可溶性抗原和相应抗体在溶液和凝胶中结合后形成的复合物，可成为肉眼可见的不溶性沉淀物，称为沉淀反应。利用该反应进行的血清学试验，称为沉淀试验。根据操作方法的不同，可将沉淀试验分为以下几种。

炭末凝集反应(CAT)检测猪瘟免疫抗体试验报告

检测猪瘟免疫抗体对于验证防疫效果、实行疫情监测预报等方面均有重要意义,目前方法虽多,但大多不适用于基层。我们试用炭末凝集反应(CAT)方法,取得较满意的结果,现报告如下。 1 方法 参照李哲明(1984)所报道的方法。用直径15～30微米的化学活性炭(上海活性炭厂,批号834099)悬液0.7毫升。

结核分枝杆菌抗体试验对肺结核的血清学诊断在临床上的意义

目的:探讨结核分枝杆菌抗体试验(TBAb)对肺结核的血清学诊断在临床上的意义。方法:采用高特异性的抗体抗原反应及免疫层析分析技术,通过全球基金结核病诊断手册要求,诊断出为结核病的患者数是2 335例,痰阳1 410例,痰阴925例,排除非结核病患者是3611例。结果:痰检阳性者其结核分枝杆菌抗体试验阳性率是88.3%,痰检阴性者其结核分枝杆菌抗体试验阳性率是73.5%,非结核病患者的结核分枝杆菌抗体试验阳性率是2.18%,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:结核分枝杆菌抗体试验对肺结核的血清学诊断在临床上具有辅助诊断价值。

结核抗体检测对活动性肺结核的诊断价值评价

目的 评价结核抗体检测对活动性肺结核的诊断价值。方法 收集2016年8月至2017年8月在重庆市公共卫生医疗救治中心结核科住院的495例活动性肺结核患者（观察组）和158例非结核呼吸道疾病患者（对照组）,均为综合患者的临床表现、胸部影像、痰细菌病原学检测或诊断性抗结核药物治疗有效等资料临床确诊后进行血清学诊断。分析血清MTB免疫球蛋白G（immunoglobulin G,IgG）、免疫球蛋白M（immunoglobulin M,IgM）、脂阿拉伯甘露聚糖（lipoarabinomannan,LAM）,以及相对分子质量16 000（以下采用“16 kD”表示）和相对分子质量38 000（以下采用“38 kD”表示）的蛋白抗体的检测资料,以及单独及联合检测不同结核抗原（LAM、38 kD和16 kD）的结果,评价两组患者结核抗体检测的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值,以及对活动性肺结核的诊断效能。结果 495例观察组患者血清结核抗体检测阳性率[68.7%（340/495）]明显高于158例对照组患者[34.8%（55/158）],差异有统计学意义（χ2=57.50,P＜0.01）;菌阴肺结核患者血清结核抗体检测阳性率[64.0%（210/328）]明显低于菌阳肺结核患者[77.8%（130/167）],差异有统计学意义（χ2=9.83,P〈0.01）。观察组340例结核抗体阳性患者中,LAM、38 kD、IgG抗体联合检测同时均阳性的患者最多[61.8%（210/340）];对照组55例结核抗体阳性患者中,单一IgG抗体阳性最高[67.3%（37/55）]。以临床诊断为标准,血清结核抗体对活动性肺结核的诊断敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值、总符合率、约登指数分别为68.7%（340/495）、65.2%（103/158）、86.1%（340/395）和39.9%（103/258）、67.8%（443/653）、0.34。结论 血清结核抗体检测活动性肺结核患者具有较高的阳性率和敏感度,对诊断活动性肺结核具有一定的辅助价值,其中菌阳肺结核患者的检测阳性率高于菌阴肺结核,LAM、38 kD和IgG联合检测可提高活动性肺结核的诊断阳性率。

土拨鼠肝炎病毒核心蛋白质粒的构建、原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定

目的构建土拨鼠肝炎病毒核心蛋白质粒并进行原核表达、抗体制备。方法应用基因工程技术将编码截短型土拨鼠肝炎病毒核心蛋白(WHcAg1～149aa)的基因片段装入原核表达载体pQE60上,在JM109菌内进行诱导表达,使用切胶回收及Ni-NTA柱两种方法纯化目的蛋白。将纯化蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,并采用酶联免疫吸附实验、免疫组织化学及Western blot检测抗体的灵敏度和特异性。结果成功地构建了含截短型土拨鼠肝炎病毒核心区基因的质粒并获得表达,经纯化得到了分子量约为16.5kD的重组核心蛋白,免疫家兔获得了高效价的特异性多克隆抗体,而且与HBcAg有交叉反应。结论获得的重组截短型土拨鼠肝炎病毒核心抗原(1～149aa)纯度高,免疫原性强。获得的兔抗-WHc效价高,特异性好,与HBcAg有交叉反应。

应用微波技术对脱色后的H．E切片进行免疫组织化学反应的方法及应用

应用微波技术对脱色后的Ｈ．Ｅ切片进行免疫组织化学反应的方法及应用苏红，谷化平，熊正文，胡海霞（中国人民解放军第二五一医院病理科张家口０７５０００）在日常的病理工作中经常会遇到因组织块很小，所获得有意义的组织、细胞数太少，制成的切片很有限，或外地送检的...

疑似伤寒患者肥达反应检测阳性的探讨

肥达反应是由法国医师FermandWidal在 1896年建立的抗原 -抗体混合反应 (Widalagglutinationtest ,WAT) ,该试验一直用于临床伤寒的辅助诊断或进行流行病学的调查。但是非伤寒沙门菌引起的其他疾病 (疟疾、登革热、粟粒性结核病、心内膜炎、慢性肝病、布鲁杆菌等 )的病人血清抗体也会与伤寒沙门菌抗原发生交叉反应 ,该反应增加了WAT结果的假阳性率 ,降低了WAT特异性[1 ] 。 2 0 0 2年 9月 ,增城市石头村上百村民陆续发热 ,头痛 ,食欲不振和恶心呕吐 ,少数病人有腹痛腹泻 ,住进了医院 ,临床诊断疑似伤寒、副伤寒 ,对 45位病人先后两次抽血采样 ,作细菌学和血清学方面的检验 ,未检出伤寒沙门菌 ,肥达氏反应抗体滴度第一次普遍升高 ,而第二次的抗体滴度显著下降 ,同时作的登革热血清学检查结果呈典型的阳性 ,最后确认为登革热病毒流行病[2 ,3] 。目前对近期流行的SARS病的病人血液作肥达氏检验 ,发现肥达氏抗体滴度也有略微升高 ,这些现象可能是与免疫系统功能紊乱或发生免疫交叉反应以及免疫回忆有关 。

2种方法检测血清标本中HLA抗体的效果比较

目的目前检测血清中HLA抗体的方法主要有:标准微量淋巴细胞毒(LCT)技术、流式细胞术(flow cytometry,FCM)、酶联免疫吸附试验(ELISA)及液态芯片技术(Luminex法)。本试验的目的,在于初步比较Luminex法与ELISA法检测血清标本中HLA抗体的效果。方法酶联免疫吸附试验(ELISA)是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面,使抗原抗体反应在固相载体表面进行,用洗涤法将液相中的游离成分洗除,最后通过酶作用于底物后显色来判断结果。液相芯片技术是集流式细胞技术、激光技术、数字信号处理技术及传统化学技术为1体的新型生物分子检测技术。

戊型肝炎病毒基因Ⅳ型病毒样颗粒的表达和抗原性分析

目的表达戊型肝炎病毒(HEV)基因Ⅳ型(G4)结构蛋白ORF2 截短的基因片段,观察病毒样颗粒(VLP)的装配情况,对纯化的VLP进行抗原性分析.方法为了制备HEV病毒样颗粒,将结构蛋白ORF2的N末端111个氨基酸残基截掉,然后将112至660共549个氨基酸残基的基因与杆状病毒基因重组,在昆虫细胞Tn5表达.首先用聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western Blotting检测基因是否正确表达,再用超速离心检测是否形成病毒样颗粒,最后用免疫电镜和ELISA分析病毒样颗粒的抗原特异性.结果含有截掉了N末端111个氨基酸残基的HEV G4的ORF2基因的重组杆状病毒感染昆虫细胞Tn5,除了可以表达最初的产物(相对分子质量为58×103的蛋白分子)外,也产生了一些可能经过宿主细胞酶类处理的蛋白分子,相对分子质量分别为57×103、56×103和54×103,并分泌到培养液中.经超速离心和密度梯度离心,电镜观察发现只有54×103的蛋白分子可以自行组装成VLP,颗粒直径为23～24 nm,浮密度为1.285 g/cm3,与HEV G1比较,G4 VLP具有相同的大小和浮密度,但表达量低.G4 VLP与HEV病人血清可以发生抗原抗体反应,用G4 VLP作抗原可以检测HEV的G1、G3、G4型特异性IgM和IgG抗体.结论该研究证实截短的HEV G4的ORF2结构蛋白基因可以在重组杆状病毒表达系统高效表达.形成的VLP具有HEV病毒颗粒类似的抗原活性,可用于制备抗HEV诊断试剂和开发预防用疫苗.

热力对冻干IgG免疫原性和免疫反应性的影响

冻干ＩｇＧ经８０℃２小时和１００℃３０分钟干热处理后，其抗原决定簇未见明显改变，活性抗原量与对照相同，抗－ＨＢｓ和抗人ＩｇＧ等抗体活性未受明显影响。