间接ELISA检测猪流感抗体方法的建立及应用

近年来流感病毒已突破宿主限制,猪作为人与禽类流感病毒的中间宿主,更是有着不可忽视的作用,对猪流感病的预防和诊断就具有重要的公共卫生意义。而防治的关键需借助于准确的检测方法,

GICA检测高致病性禽流感抗体方法的建立

〔目的〕 建立可快速、简便地检测微量禽流感的抗体的方法。〔方法〕 利用灭活的高致病性禽流感病毒H5N1建立禽流感病毒浓缩纯化样品体系,获得大量纯度较高的禽流感病毒(1:5 12 )。将2 .80mg/mL纯化病毒与一定大小的胶体金颗粒偶联,吸附在玻璃纤维上,制作的高致病性禽流感病毒抗体胶体金检测试纸条,用于高致病性禽流感定量(合格)检测。〔结果〕 显色反应良好,条带稳定,检测获得成功。〔结论〕 其反应特异性、敏感性、重复性良好,具备微量、快速、简便的特点,适合于进出境现场检疫和疫情普查。

一种检测二恶英的单链抗体方法

本发明公开了一种检测二恶英的单链抗体方法。该单链抗体基因来源于小鼠，克隆到表达载体pET20b，在大肠杆菌BL21中表达，利用表达蛋白上带有的His-tag标记可通过亲和层析纯化单链抗体蛋白，并利用C-myc标记检测单链抗体蛋白。本发明克隆到鼠源的抗二恶英类化学物质的单链抗体，该抗体能应用于检测二恶英类化学物质，检测成本低，应用前景广泛。

双抗原夹心法检测抗HIV-1/2总抗体方法的建立和评价

目的 进一步提高HIV感染诊断试剂的敏感性。方法 以人工合成的HIV 1gp4 1.1(sp1)、gp4 1.2 (sp2 )、gp12 0 (sp3)、p2 4 (sp4 )和HIV 2gp36 (sp5 ) 5条多肽 ,采用双抗原夹心酶链免疫吸附试验 (ELISA)原理 ,以sp1、sp3、sp4和sp5混合包被酶标板作为固相抗原 ,辣根过氧化物酶标记sp1、sp2、sp4和sp5多肽为标记物 ,建立了检测抗HIV 1 2总抗体的双抗原夹心ELISA法。结果 检测卫生部药品生物制品检定所第 2代 4 0份质控参比血清 ,其特异性和灵敏度均为 10 0 % ,高于间接ELISA法(特异性为 90 % ,灵敏度为 6 5 % )。检测 2 10份其他病种患者血清均为阴性 ,与雅培HIVAB试剂比较检测 90份健康献血员血清和 88份HIV感染者血清 ,符合率为 10 0 %。结论 本方法特异性强、敏感性高 ,操作简便 ,适用于献血员的筛选和临床HIV感染的检测。

间接ELISA法测定猪源大肠杆菌外膜蛋白抗体方法的建立

大肠杆菌是条件性致病菌，是引起仔猪黄痢、白痢和成年猪水肿病的重要病原。大肠杆菌病对规模化猪场哺乳仔猪的危害较严重，给养猪业造成了严重经济损失。

吸收放散试验及抗体增强方法在ABO疑难血型鉴定中的应用

目的探讨吸收放散试验及抗体增强方法在ABO血型抗原减弱和血清抗体效价降低及高效价冷凝集素引起疑难血型鉴定中应用的可行性。方法对30例ABO血型正反定型不相符的血标本,采用不规则抗体筛选、抗体增强方法、吸收放散试验及直接抗人球蛋白试验,观察患者血型抗原及血清中抗体的检出情况。结果 30例患者不规则抗体筛选和直接抗人球蛋白试验阴性,被患者红细胞吸收后的人源抗A或抗B血清效价有所降低;患者红细胞放散液与A型或B型试剂红细胞出现预期的血型抗原抗体反应,凝集强度由常规方法的混合外观凝集(MF)~1+增加到吸收放散试验及抗体增强方法的1+~3+,ABO血型正反定型相符。结论吸收放散试验能起到浓缩血清及初步纯化抗体的作用,抗体增强方法可增加低效价血清抗体的凝集强度,在输血相容性检测中联合应用ABO正反定型、吸收放散试验及抗体增强方法,可准确鉴定ABO疑难血型及解决部分交叉配血不合的问题。

脑囊虫病抗体检测方法研究进展

囊虫病是由猪带绦虫幼虫——猪囊虫引起的一种重要的人畜共患病。猪囊虫可寄生于猪、野猪、人、骆驼、猫等动物的肌肉、大脑、皮下和跟部等多个器官等，能引起不同程度的发病。仔猪患该病后发育不良，肉品质下降。人感染囊虫会引起不同部位的病变，其中最为严重的是脑囊虫病，它主要是由于人摄入猪带绦虫虫卵或猪带绦虫病患者自体感染所致。脑囊虫病的主要临床症状是癫痫、头痛和神经紊乱，愈后易留下癫痫、脑积水和痴呆等后遗症。该病流行范围甚广，呈世界性分布，除因宗教信仰而禁食猪肉的国家和民族以外，

猪传染性胃肠炎病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

为建立猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的快速检测方法,本研究以抗TGEV N蛋白单克隆抗体(MAb)为包被抗体,纯化的抗TGEV N蛋白多克隆抗体(PcAb)为检测抗体建立了TGEV双抗体夹心ELISA方法,优化其反应条件为:抗TGEV N蛋白MAb包被浓度为0.4μg/mL,抗TGEV N蛋白PcAb和酶标二抗的工作浓度分别为3.5μg/mL和1∶5 000,以P/N>2,同时OD490nm≥0.316作为阳性判定标准。该ELISA的重复性变异系数小于10%,与猪流行性腹泻病毒、猪细小病毒、猪瘟病毒、猪轮状病毒等无交叉反应。对22份临床猪粪便样品RT-PCR的阳性检出率为31.8%;ELISA的阳性检出率为22.7%,二者符合率达81.8%,结果表明本研究建立的双抗体夹心ELISA方法检测TGEV具有较高的特异性和敏感性,可以用于TGEV的病原学检测。

奶牛布鲁菌病奶液抗体检测方法的初步应用

布鲁菌病（以下简称布病）目前在国内一些地区广泛流行,不但影响畜牧业的健康发展,也严重威胁人类健康。布鲁菌感染奶牛的主要症状是网状内皮系统和妊娠期细胞的炎症反应,通常会导致妊娠5至7个月的奶牛胎儿流产和死亡,伴随着流产,大量的布鲁菌会被排出，继而感染同群动物中的其他个体。

提高抗体库容量和亲和力方法的新进展

抗体库为抗体工程带来了革命性的突破,其核心是将抗体的基因型与表型耦联,从抗体库中找到针对特异抗原的抗体基因。但是抗体工程发展所面临的两大难点是如何构建大库容量的抗体库和提高抗体的亲和力。抗体库方法和技术的出现使得改造工程抗体更方便、更有效。利用不同抗体库方法构建大库容量的突变抗体库,然后通过抗体库技术在体外模拟抗体亲和力成熟过程获得高亲和力的抗体。本文简要综述了抗体库方法和技术的最新进展。

弓形虫感染间接荧光抗体检测方法的建立

弓形虫是一种专性细胞内寄生原虫,寄生于人和多种动物的有核细胞内,引起人兽共患的弓形虫病。弓形虫呈世界性分布,估计全世界至少有1/3的人感染弓形虫,中国人群平均感染率为7.88%,并呈逐年上升趋势。正常人感染后多呈带虫状态而不发病,当机体免疫功能受损或低下时可出现弓形虫性脑炎等致死性病变,而先天性弓形虫感染可导致流产、早产、畸胎、死胎等,因此,弓形虫病的诊断和治疗显得十分重要。弓形虫病的诊断当以病原学检查为依据,但病原体的检测费时且不易成功,

检测禽副粘病毒2型抗原的双抗体夹心ELISA方法的研究

以禽副粘病毒 2型 (Yucaipa株 )群特异性单抗 7E5为基础建立了检测PMV_2抗原的双抗体夹心ELISA方法。该方法对Yucaipa病毒的最低检出量为 1.6 96 2 μg/ml,对PMV_2不同形式病毒及各分离株也都有很好的检出率。用Yucaipa病毒尿囊液人工感染 10日龄SPF鸡 ,于感染后不同时间采集心、肝、脾、肺、肾、法氏囊、气管等病科及泄殖腔拭子 ,经处理后用建立的方法进行检测 ,结果表明PMV_2病毒在感染鸡的法氏囊组织内大量存在 ,感染后 3天就可从法氏囊组织内检测到PMV_2病毒 ,粪便中仅个别有检出阳性者。

传染性胰坏死病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

以纯化的兔抗传染性胰坏死病病毒(IPNV)VP2重组蛋白多克隆抗体为包被抗体,抗IPNV VP2单克隆抗体为检测抗体建立了IPNV双抗体夹心ELISA方法。优化反应条件为:兔抗IPNV VP2重组蛋白多克隆抗体包被浓度为1.28μg/mL,抗IPNV VP2单克隆抗体的工作浓度为1.34μg/mL,酶标二抗稀释比例为1∶2 000,以P/N>2,且OD490 nm>0.101 494作为阳性判定标准。该方法的重复性变异系数均小于10%,与传染性造血器官坏死病毒(IHNV)、病毒性出血败血症病毒(VHSV)、鲤春病毒血症病毒(SVCV)、轮状病毒(HRV)无交叉反应。对41份虹鳟肝脏样品分别进行双抗体夹心ELISA和RT-PCR检测,结果双抗体夹心法与RT-PCR法检测符合率为97%,表明本实验建立的双抗体夹心ELISA检测方法检测IPNV具有较高的敏感性和特异性,可用于IPNV的病原学检测。

免疫过氧化物酶单层细胞试验检测猪圆环病毒Ⅱ型抗体方法的建立

猪圆环病毒病（PCVD）是由猪圆环病毒Ⅱ型（PCV-2）引起的猪传染性疫病，是继猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）之后新发现的又一重要疫病，临床主要表现为生长迟缓、进行性消瘦、呼吸困难、黄疸、腹泻、皮炎、繁殖障碍、震颤等。自1997年Clark等人首次分离到PCV-2以来，该病已给全世界养猪业造成巨大的经济损失，我国为养猪大国，PCV-2感染也相当严重，全国各大小猪场均存在PCV一2感染的报道。

猪链球菌2型ELISA抗体检测方法的建立及应用

猪链球菌按照荚膜多糖抗原的不同可分成35个荚膜血清型,提纯猪2型链球菌荚膜多糖抗原包被酶标板,建立了检测猪2型链球菌血清抗体的间接ELISA检测方法,并将该方法应用于四川省2005年夏季猪血清流行病学调查和2005年上半年湖北、河南、湖南三省的猪血清流行病学调查。