针药结合疗法对Graves’病患者外周血TSH受体抗体活性和T细胞亚群数目的影响

Graves’ 病又名毒性弥漫性甲状腺肿,是以甲状腺机能亢进为临床特征的一种自身免疫性甲状腺疾病。近年的研究表明,TSH受体抗体(TRAb)的存在,是导致发病的重要原因,而 TRAb 的产生又与 T 细胞亚群,主要是抑制性 T 细胞(Ts)数目和/或功能的紊乱有关。本研究小组在既往对针刺、针药结合治疗 Graves’ 病的疗效系列研究基础上对免疫学作用机制进行了有关探讨,兹将结果报告如下。

肺炎球菌结合疫苗诱导的抗荚膜多糖抗体活性研究

目的 研究肺炎球菌荚膜多糖-蛋白结合物在小鼠体内诱导产生的功能性抗体活性。方法 用荚膜多糖及其结合物免疫BALB/c小鼠,用ELISA法测定小鼠血清IgG抗体,用KSCN解离法测定IgG抗体的亲和力,用体外调理吞噬实验测定血清的调理吞噬滴度。结果 18C-TT、19F-TT免疫小鼠后,抗体滴度显著升高,有免疫记忆反应,18C-TT第1针和第3针免后的抗体亲和指数(AI)分别为22.3％±4.8％和49.7％±1.8％,调理吞噬滴度分别达到16和32;19F-TT免后AI分别为52.6％±3.0％和61.6％±3.4％,调理吞噬滴度则分别为32和64。结论18C-TT和19F-TT免疫小鼠后,能有效地产生再次免疫应答,其IgG有良好的亲和力和补体依赖的调理吞噬功能,能有效地清除肺炎链球菌的感染。

拟除虫菊酯类农药-抗体活性定量构效关系研究

目的：研究拟除虫菊酯类农药与其类特异性抗体的免疫识别机理。方法：采用逐步多重线性回归法研究了拟除虫菊酯类农药及其类似物和抗体活性（IC50：半数抑制浓度）之间的定量构效关系。在计算拟除虫菊酯及其类似物结构描述符的基础上,构建了二维定量构效模型,分析筛选影响抗体活性的主要因素,并用留一法交叉验证了模型的预测能力。同时,采用偏最小二乘法对计算所得拟除虫菊酯分子片段的结构参数进行了分析,建立了分子亚结构和抗体活性之间的全息定量构效模型,运用不同颜色编码来反映分子片段对抗体活性的贡献。结果：二维定量构效模型和全息定量构效模型的决定系数（R2）分别为0.920和0.917,二者的交叉验证系数（Q2）分别为0.875和0.660,表明两模型具有良好的预测能力。由二维定量构效模型还可得,拟除虫菊酯类农药的疏水性越小,往往和抗体的结合能力就越强。此外,在尝试了多种分子片段组合后,得到了最优全息定量构效模型,其分子片段的大小在4~10之间,分子片段的长度为61,优化的主成分为4,分子片段的类型为B/C/Ch;但拟除虫菊酯类农药指纹图谱的编码结果和试验结果不完全吻合。结论：拟除虫菊酯类农药的疏水性是影响抗体识别的主要因素。

缺血性脑卒中患者血清抗氧化型脂蛋白抗体活性检测分析

目的探讨血清中抗氧化型脂蛋白抗体(ALOA)活性与缺血性脑卒中的相关性。方法分别检测45例缺血性脑卒中患者(男34例,女11例)和45例健康者(男23例,女22例)ALOA的活性及三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)。结果 45例缺血性脑卒中患者,ALOA活性阳性18例,阳性率为40.0%,45例健康对照患者,ALOA活性阳性4例,阳性率为8.9%,缺血性脑卒中组阳性率明显高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);缺血性脑卒中组TG、TC、LDL明显高于健康对照组,HDL明显低于健康对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论缺血性脑卒中患者常伴有ALOA活性升高,ALOA活性与缺血性脑卒中发生、发展具有相关性。

原因不明习惯性流产患者封闭抗体活性与肿瘤坏死因子-α的关系

目的观察原因不明习惯性流产(RSA)患者的封闭抗体效应与辅助性T细胞(Th)1型免疫之间的关系。方法以20例连续发生过3次以上早期自然流产的患者作为观察对象。采用比重离心法从外周血中提取淋巴细胞,以1×106/ml浓度加入含有1%小牛血清的RPMI中。每毫升淋巴细胞悬浮液中加入植物血凝素(PHA)2μg培养72 h。采用酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测培养液中肿瘤坏死因子(TNF)-α的水平。采用混合淋巴细胞培养方法检测研究对象的封闭抗体效应(MLR-BE),>22%为阳性,≤22%为阴性。分析TNF-α水平与MLR-BE的关系。结果20例患者TNF-α的平均浓度为(561.0±522.9)pg/ml,平均MLR-BE为(-6.5±37.6)%(阴性14例、阳性6例)。MLR-BE阴性患者的TNF-α水平为(676.1±585.0)pg/ml,显著高于MLR-BE阳性患者的(292.5±159.5)pg/ml(P<0.05)。TNF-α水平与MLR-BE不相关(R2=0.015,P>0.05)。结论MLR-BE可能影响母体Th1/Th2的平衡,从而导致习惯性流产的发生。

探讨磁珠偶联血型抗体过程对抗体活性的影响

目的探讨磁珠与血型抗体偶联过程对抗体活性的影响,为后续利用液相芯片技术检测血型提供实验依据。方法分别将抗D血型抗体直接或者利用抗人Ig G间接与磁珠偶联,再利用磁力架、显微镜观察其与D抗原阳性红细胞的反应情况。结果 Ig M型抗D与磁珠偶联后与D阳性红细胞可反应,但Ig G型抗D与磁珠偶联后与D阳性红细胞不反应;利用抗人Ig G作为桥联间接偶联磁珠的Ig G型抗D不能与D阳性红细胞结合;Ig G型抗D与D阳性红细胞形成的抗原抗体复合物与磁珠可进一步偶联。结论血型抗体与磁珠偶联后会对其活性产生一定影响,尤其是Ig G型血型抗体。

牛初乳制品具有对EHEC O_(157):H_7抗体活性和中和作用

肠出血性大肠杆菌(EHEC)能引起出血性结肠炎和溶血性尿毒综合征(HUS)等一系列临床症状,目前治疗上强调加强对症处理。本文研究乳汁素(Lactobin)

抗旋毛虫鸡卵黄抗体的活性检测

目的制备特异性抗旋毛虫的鸡卵黄免疫球蛋白,研究其免疫应答规律及其稳定性。方法用纯化的旋毛虫幼虫免疫育龄种鸡,经水稀释法初步纯化浓缩后获得卵黄抗体。应用酶联免疫吸附试验检测卵黄抗体的效价及其敏感性和稳定性。结果通过免疫可成功诱导出高效价的抗旋毛虫抗体,效价可达1∶106以上,免疫应答持续时间可达34周以上。免疫后卵黄抗体敏感性和血清抗体敏感性无显著性差异(P>0.05)。稳定性试验表明IgY敏感性高,在pH4～10及温度不超过60℃条件下活性稳定。结论成功制备出高效价的特异性抗旋毛虫卵黄抗体,其敏感性高,有一定的耐热、耐酸碱性,可进一步用于旋毛虫感染的研究。

抗红细胞H抗原单链抗体中可变区重链和轻链顺序对其活性的影响

目的探讨抗红细胞H抗原单链抗体(scFv)中可变区重链(VH)和轻链(VL)顺序对该单链抗体活性的影响。方法采用PCR方法从质粒pMD-18T-2E8scFv(VH-linker-VL型)中克隆出VL和VH可变区基因,通过重叠引物延伸法将这2种基因连接,并引入连接肽(linker)编码序列,构建VL-linker-VH型的单链抗体基因,将VL-linker-VH和原有的VH-linker-VL2种形式的单链抗体基因分别插入到原核表达载体pET-his中,转化BL21(DE3)plysS细胞,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物用镍亲和层析柱纯化;免疫荧光法、竞争ELISA和低离子聚凝胺法检测纯化后scFv活性。结果酶切及测序表明VL-linker-VH型单链抗体表达载体构建成功,SDS-PAGE和Western blot分析表明VL-linker-VH和VH-linker-VL2型抗人红细胞scFv均在BL21菌中获得高效表达,重组蛋白的相对分子质量(Mr)为27kD,表达产物以包涵体形式存在,分别占菌体总蛋白的26.8%和27.6%,纯化后获得了高纯度的scFv;免疫荧光、竞争ELISA和低离子聚凝胺试验分析证明2种单链抗体均可特异结合红细胞表面H抗原,VH-linker-VL结合活性高于VL-linker-VH。结论成功制备了VL-linker-VH型2E8scFv;VH-linker-VL型2E8scFv抗原的纯合活性高于VL-linker-VH型2E8scFv。

天然水体主要因素对特异性鸡蛋抗体活性的影响

以抗中华鳖红脖子病病原菌—嗜水气单胞菌的特异性鸡蛋抗体为研究对象 ,重点考察了鳖池天然水体中主要不利因素对特异性鸡蛋抗体活性的影响 .试验证明 ,在所考察的天然水体中特异性鸡蛋抗体的活性可以保存 40h .在比较差的环境下 ,适当添加一些保护剂等 ,可使鸡蛋抗体的活性保持延长 .这不仅对养鳖业 ,也为其它各种养殖业用浸泡法被动免疫防治疾病提供了应用基础 .

重组集成干扰素α在不同动物长期毒性实验血清中中和抗体的产生及活性研究

目的研究重组集成干扰素α在金黄地鼠和猕猴长期毒性实验血清中中和抗体的产生及抗体活性的强弱。方法将金黄地鼠与猕猴分别分为10、30、100μg/kg与1、10、100μg/kg3个剂量组,均每日皮下注射重组集成干扰素α1次,各连续用药60、30d,取给药期和恢复期不同时间的血清,采用细胞病变抑制法进行检测。结果金黄地鼠的30、100μg/kg剂量组与猕猴的3个剂量组从给药第3wk起,在血清中检测到具有中和活性的抗体,抗体滴度在给药第4wk或恢复期第1wk达最高峰,并持续到恢复期结束。其中,猕猴10、100μg/kg剂量组的中和活性高于同期1μg/kg剂量组,10、100μg/kg剂量组之间则无显著性差异(P>0.05),1μg/kg剂量组在恢复期结束时已检测不到中和活性。结论金黄地鼠和猕猴重复注射重组集成干扰素α,血清中均能检测到中和抗体(低剂量组除外),抗体滴度和持续时间与注射剂量呈正相关。

抗犬细小病毒纳米抗体的制备及其中和活性鉴定

【目的】建立抗犬细小病毒(CPV)纳米抗体(Nb)库,从中筛选出具有中和活性的Nb。【方法】以高免比格犬脾脏组织cDNA进行重链可变区(VH)扩增,与pBSD载体连接,构建pBSD-Nb库。结合细菌展示、流式细胞仪检测,在pBSD-Nb库中筛选高亲和力的Nb,获得阳性克隆并测序。利用Primer Premier 5.0软件设计Nb基因的上、下游引物,将阳性克隆质粒中Nb基因片段进行PCR扩增。利用pET-27b表达目的蛋白,通过变性、复性手段纯化目的蛋白,用SDS-PAGE分析纯化后的蛋白。将Nb包被96孔板,采用ELISA法检测Nb对CPV的亲和力。通过病毒微量中和试验检测Nb抑制CPV感染猫肾细胞(F81)的情况。【结果】PCR扩增结果显示,在384 bp处可见明显条带,与预期大小相符,证明pBSD-Nb库构建成功。细菌展示后,流式细胞术检测结果显示,有9株阳性峰偏移率高的Nb,分别命名为Nb1、Nb2、Nb3、Nb4、Nb5、Nb6、Nb7、Nb8和Nb9。PCR扩增9株Nb基因片段,获得384 bp的条带。SDS-PAGE结果显示,在约14 ku处有一条带,说明成功获得纯化蛋白。ELISA检测结果表明,9株Nb中有6株Nb对CPV的亲和力较强。体外病毒中和试验检测发现,1株Nb能够中和病毒,抑制F81细胞病变,中和病毒的有效浓度为0.05 mg/mL。【结论】本研究成功建立pBSD-Nb库,筛选出6株对CPV具有高亲和力的Nb,并成功获得1株具有中和活性的Nb,为CPV治疗性抗体制剂的开发提供了新的思路。

疫苗中和抗体体外检测方法的研究进展

中和抗体是抗病毒免疫的主要因素，也是疫苗免疫治疗效果的重要检测指标之一。预防疫苗的免疫保护性主要体现于是否可诱导出高滴度的中和抗体，因此中和抗体活性也是疫苗评估和质控的重要依据。迄今为止，根据已知抗原特性、抗原与抗体反应特点以及结果判定方法的不同，已建立了多种病毒中和抗体活性的体外测定方法。本文就近年来关于中和抗体活性体外测定方法的最新研究进展做一综述。

纯化ETEC K88菌毛特异性卵黄抗体的加工贮藏及体外抗粘附性研究

分离、纯化产肠毒素大肠杆菌(ETEC) K88ac菌毛蛋白,将其免疫产蛋鸡,经喷雾干燥制备抗ETEC菌毛抗原特异性卵黄抗体粉。间接ELISA法检测卵黄抗体效价,试验结果表明,喷雾干燥(140℃进气,65℃出气)对卵黄抗体活性无影响,加工前后抗体滴度均为1∶1280;卵黄抗体粉在90℃干热条件下处理5min后抗体效价下降50%,而90℃湿热条件下处理5min抗体效价无明显变化,但处理15min后下降75%;经过1h的干热或湿热处理,抗体均基本失活;4℃和常温下放置半年对卵黄抗体粉活性无影响;体外抑制粘附试验表明,抗K88卵黄抗体能抑制K88对肠上皮细胞的粘附。

因子Ⅷ抗体研究的进展

自40年代初Laurence等报道首例因子Ⅷ抗体患者以来,人们对因子Ⅷ抗体的研究已渐深入至理化及生物学特性、检测、治疗诸方面,这对于防治该抗体发生、延长患者寿命无疑具有重要意义。一、患病率及其影响因素因子Ⅷ抗体可以发生在血友病甲患者,也可以发生在有免疫功能失调背景的人(如系统性红斑狼疮、风湿性关节炎、风湿性心脏病、某些恶性肿瘤、肠道炎性疾病、剥脱性皮炎、梅毒、呼吸道疾病、青霉素过敏等),甚至既往健康者或产后妇女.

乙型肝炎表面抗体与年龄的相关研究及影响因素

目的研究乙型肝炎(后简称乙肝)表面抗体(HBsAb)随年龄增长而降低的原因。方法测定HBsAb,按照一定比例稀释标本直至HBsAb<10U/L;测定巨细胞病毒IgG(CMV-IgG),按照一定比例稀释标本直至抗CMV-IgG<14U/mL。比较分析抗体活性的变化。结果 "2和(或)3抗体"阳性组中,青年组HBsAb活性水平高于中年组,差异有统计学意义(P<0.05);中年组CMV-IgG活性高于青年组,差异有统计学意义(P<0.05)。青年组中"2和(或)3抗体"阳性组HBsAb活性水平高于单抗体阳性组,差异有统计学意义(P<0.05);中年组中"2和(或)3抗体"阳性组HBsAb活性水平高于单抗体阳性组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HBsAb随年龄增长而降低,可能与乙肝病毒感染进程中抗体反应模式不同有关。

抗痢疾志贺氏菌卵黄抗体的制备及其稳定性

目的制备特异性抗痢疾志贺氏菌的鸡卵黄免疫球蛋白,研究母鸡对痢疾志贺氏菌的免疫应答规律及抗体的稳定性。方法以两种不同剂量的痢疾志贺氏菌作为抗原免疫产卵母鸡,应用酶联免疫吸附测定法检测抗痢疾志贺氏菌IgY的效价及其稳定性。结果初次免疫后第12天,卵黄中开始出现抗痢疾志贺氏菌的IgY,免疫应答持续时间超过25周。稳定性试验表明IgY在pH3-11,温度不超过60℃,蔗糖质量浓度不高于700 g/L的渗透压条件下活性稳定。结论用痢疾志贺氏菌免疫母鸡制备的IgY效价高,理化性质稳定。

慢性肝病患者肝螺杆菌血清抗体水平分析

目的分析不同病因慢性肝病患者血清肝螺杆菌抗体(抗H.hepaticus-IgG)相对抗体活性(RAA)以及螺杆菌抗原之间的交叉反应。方法随机选取不同病因的慢性肝病患者(CLD)76例(其中慢性乙型病毒性肝病27例、慢性丙型病毒性肝病25例、自身免疫性肝炎8例和慢性酒精性肝病16例)、健康献血者80名以及体检人群80名,应用ELISA方法检测吸收试验前后血清中抗H.hepaticus-IgG相对抗体活性。结果 CLD患者抗H.hepaticus-IgG抗体的RAA明显高于献血者和普通人群组(P<0.001);CLD患者和普通体检人群抗H.pylori-IgG抗体的RAA平均值明显高于献血者(P<0.001);CLD患者中除自身免疫性肝炎患者外,慢性乙型肝炎患者、慢性丙型肝炎及酒精性肝病患者抗H.hepaticus-IgG抗体的相对抗体活性反应均明显增高,慢性丙型肝炎患者抗H.hepaticus-IgG抗体的RAA值明显高于其他肝病患者(P<0.001),吸收试验前后抗H.hepaticus-IgG抗体的RAA值无显著性变化(P>0.05)。结论 H.hepaticus和H.pylori的细胞表面蛋白具有较高的交叉反应,慢性肝病患者抗H.hepaticus-IgG抗体反应在吸收试验后仍保持较高水平。

鼠疫单克隆抗体(McAb)某些理化性质的研究

我们曾报道了应用鼠疫F_1抗原免疫BALB/C小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,建立了能分泌抗鼠疫F_1—McAb的杂交瘤细胞株(F_(43)和F_(165))。将此McAb从小鼠腹水和培养上清液中分离纯化,用其进行了鼠疫McAb反向血凝试验,已获得成功。本文是对鼠疫F_1—McAb的某些理化性质进行了研究,现将结果报导如下:

抗轮状病毒卵黄免疫球蛋白的制备及其活性

采用婴幼儿轮状病毒抗原免疫产卵母鸡，然后用ＰＥＧ两步沉淀分离鸡卵黄中抗轮状病毒免疫球蛋白（抗－ＨＲＶＩｇＹ），经离子交换层析及凝胶层析纯化抗－ＨＲＶＩｇＹ此ＩｇＹ经免疫扩散、免疫电镜、ＥＬＩＳＡ检测均证实其具有特异抗ＨＲＶ活性。母鸡经免疫后第１１ｄ，卵黄中开始出现抗－ＨＲＶＩｇＹ，加强免疫后抗体活性迅速达到高水平，并在高水平上维持一年之后仍未见有明显下降的趋势。结合鸡的其他一些生物学特点，表明利用免疫鸡制备抗体是一种简便、经济。