重症肌无力患者外周血中IL-21的表达及其与血清抗AChR抗体类别转换的关系

目的:探讨白细胞介素(IL)-21在重症肌无力(MG)发病中的作用及其对血清抗乙酰胆碱受体(AChR)抗体类别转换的影响。方法:采集26例MG患者和18例健康对照者的外周血,应用ELISA技术检测外周血血清中抗AChR-IgG及其亚型IgG1,IgG2,IgG3的水平以及IL-21的浓度,利用RT-PCR技术检测外周血单个核细胞上IL-21RmRNA的表达水平,采用流式细胞学技术检测其中8例患者B细胞上IL-21R的表达水平,并分析它们之间的关系。结果:MG患者组血清中IL-21浓度(31.686±8.499pg/mL)高于正常对照组(15.147±6.366 pg/mL),差异具有统计学意义(P<0.01);MG患者组PB-MCs上IL-21RmRNA的表达(0.139±0.052)高于正常对照组(0.101±0.022),差异具有统计学意义(P<0.05);但二者在眼肌型和全身型亚组中差异均无统计学意义(P>0.05)。8例MG患者B细胞上的IL-21R的表达水平(1.074±0.375)高于正常对照组(0.389±0.391),差异具有统计学意义(P<0.05)。抗AChR-Ab阳性患者血清IL-21浓度与抗AChR-IgG水平呈正相关,相关系数为0.689(P<0.05),但其与IgG1,IgG2,IgG3亚型的水平均无相关性(P>0.05);PBMCs上IL-21RmRNA的表达与血清抗AChR-IgG及其IgG1,IgG2,IgG3亚型的水平均无相关性(P>0.05);B细胞上IL-21R的表达与抗AChR-IgG及IgG1,IgG3亚型水平呈正相关(分别为P<0.05,P<0.01,P<0.05),而与抗AChR-IgG2的水平无相关性(P>0.05)。结论:IL-21可能通过作用于B细胞上的IL-21R,影响MG患者血清中抗AChR抗体向IgG1和IgG3亚型转换,从而对MG发病起促进作用。

IgE抗体类别转换的机制及其在过敏体质研究中的应用探讨

使B细胞从单纯产生免疫球蛋白M(Ig M)转化成能产生免疫球蛋白E(Ig E)的抗体类别转换是过敏疾病的重要机制。文章先从细胞机制、分子机制、基因机制三方面对Ig E抗体类别转换的前期研究进行总结;再通过体质学说"生命过程论""禀赋遗传论""环境制约论"等基本原理与Ig E抗体类别转换机制进行对照,寻求二者之间的内在关联,为今后从Ig E抗体类别转换的角度研究过敏体质作理论上的铺垫。

IgA抗体类别转换在IgA肾病发病机制中的研究进展

IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)是常见的原发性肾小球疾病。血清中IgA的异常增多被认为是IgAN发生发展的启动阶段,而发生在B细胞中的IgA抗体类别转换过程失调导致了IgA的过度产生。该文从黏膜免疫、T细胞、细胞因子及信号通路等方面,对IgA抗体类别转换在IgAN发病机制中的作用,以及可能存在的相关治疗靶点作一综述,以期为IgAN的防治提供新思路。

普通变异型免疫缺陷病研究进展

抗体缺陷是原发性免疫缺陷病的主要亚类,目前根据血清抗体水平及外周B淋巴细胞数目将抗体缺陷分为三类：（1）患者B细胞数量和血清Ig水平明显降低,被定义为无丙种球蛋白血症,由相关信号分子如BTK或前B细胞受体组成成分突变所引起的B细胞发育障碍。（2）患者B细胞数量正常,IgM正常或增高,IgG和IgA明显下降,为抗体类别转换障碍。

miR-155在全身型重症肌无力中的作用及地塞米松对miR-155的影响

目的:探讨miR-155在重症肌无力发病中的作用及地塞米松(dexamethasone,DXM)对miR-155的影响。方法:采用qPCR检测全身型重症肌无力(generalized myasthenia gravis,GMG)患者组和健康对照组B细胞,以及DXM干预后miR-155的相对表达量。用MTT法检测B细胞的增殖反应,流式细胞术检测DXM和PBS干预组B细胞表面CD80和CD86的表达,ELISA检测两组细胞上清液中抗AChR-IgG及其亚型IgG1,IgG2,IgG3的水平。结果:GMG外周血B细胞中miR-155的相对表达量高于健康对照组。DXM组B细胞中miR-155相对表达量低于PBS组;但两组之间B细胞的增殖及CD80和CD86的表达均无明显差异;DXM组培养上清中抗AChR-IgG1的水平低于PBS组,而抗AChR-IgG及其亚型IgG2,IgG3的水平无明显差异。结论:miR-155高表达可能参与重症肌无力的发病;糖皮质激素抑制miR-155的表达,可能通过调节B细胞的抗体类别转换发挥其治疗作用。

黏膜相关淋巴组织淋巴瘤诊断进展

黏膜相关淋巴组织(mucosa-associated lymphoid tissue,MALT)淋巴瘤是起源于生发中心后边缘区记忆B细胞,常发生于黏膜获得性淋巴组织的淋巴瘤。MALT淋巴瘤组织学形态多样,缺乏特异性的免疫表型,诊断较困难,目前主要采用排除性的诊断方法。随着分子病理学技术快速发展,鉴别诊断手段日益增多,如采用PCR技术检测MALT淋巴瘤Ig基因重排,荧光原位杂交技术检测MALT淋巴瘤中Ig H基因断裂以及t(11;18)(q21;q21)、t(1;14)(p22;q32)、t(14;18)(q32;q21)、t(3;14)(p14;q32)4种独特的染色体改变等。该文对MALT淋巴瘤的病因学、临床病理学特征、遗传学特征等研究进展进行综述,探讨其对MALT淋巴瘤诊断及鉴别诊断、治疗和预后判断的临床意义。

应用CRISPR/Cas9介导的基因编辑系统研究B细胞中转录因子T-bet的调控作用

目的·通过优化后的CRISPR/Cas9基因编辑系统,研究原代B细胞中转录因子T-bet对抗体类别转换的调控作用。方法·系统性分析GEO公共数据库中体外诱导分化的B细胞转录组测序结果,探索转录因子T-bet对抗体类别转换的调控。构建靶向基因为Tbx21(T-box 21,编码T-bet)的小向导RNA(small guide RNA,sgRNA)反转录病毒表达载体,使用Plat-E细胞系作为病毒包装细胞系获得装有sg-Tbx21质粒的反转录病毒并对其浓缩。使用B细胞受体抗体、抗CD40抗体和Toll样受体激动剂体外协同刺激Cas9转基因小鼠的脾脏B细胞,感染高滴度反转录病毒颗粒实现基因编辑。流式细胞术分选感染细胞,提取基因组DNA进行PCR扩增后对靶向序列进行测序,利用ICE CRISPR分析工具计算基因敲除效率。体外诱导B细胞分化为浆细胞,采用ELISA检测基因编辑后B细胞培养上清液中IgM、IgG2c、IgG3抗体类别的丰度,通过独立样本t检验比较sg-NC组与sg-Tbx21组细胞上清液中抗体水平的差异。结果·①经分析GEO数据库发现,γ干扰素可以诱导B细胞中Tbx21基因的表达,且在T-bet的转录调控下,B细胞展现抗体类别转换相关通路活化的转录组特征。②使用浓缩后的高滴度病毒感染激活的B细胞,可以构建高效的反转录病毒感染原代B细胞体系。③Cas9转基因小鼠原代B细胞转染sg-Tbx21质粒后成功实现Tbx21基因敲除,敲除效率约为59%。④在体外诱导B细胞分化为浆细胞的条件下,sg-Tbx21转染后的B细胞培养上清液中IgG2c水平显著降低(P=0.000),IgM和IgG3的水平无明显的变化。结论·通过浓缩反转录病毒和协同刺激激活原代B细胞的方式可提高sgRNA递送的效率,在Cas9转基因小鼠原代B细胞中敲除Tbx21基因;应用这一系统证明了T-bet敲除后阻碍了IgG2c抗体类别的产生。