胶体金实验 酶标法对人类免疫缺陷病毒抗体检测的准确性分析

目的探究胶体金实验与酶标法在人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)抗体检测中的应用价值。方法选取2021年1月—2023年12月在资溪县疾病预防控制中心进行HIV抗体检测的2000例患者,对初筛阳性的25例患者血清标本分别进行胶体金实验与酶标法检测,初筛阳性标本送市疾控确诊。将免疫印迹(western blot,WB)诊断结果作为金标准,分析上述2种检测方法诊断效能,对阳性样本带型分布情况进行统计分析。结果在初筛阳性的25例患者中,WB诊断显示阳性14例、阴性11例;酶标法与WB有着良好一致性,酶标法诊断灵敏度、准确率、阴性预测值高于胶体金实验(P<0.05);在酶标法诊断的HIV阳性患者中,gP120、gP160出现率最高,P55出现率最低。结论在HIV抗体检测中,酶标法有着比胶体金实验更高的诊断效能,能为阳性样本带型分布提供指导。

检测家畜血吸虫抗体的二步金标免疫渗滤法研究

将待检家畜血纸浸出液点在硝酸纤维素膜上，以金标记的血吸虫虫卵可溶性抗原为探针（以下简称血吸虫抗原胶体金），建立了检测家畜血吸虫抗体的二步金标免疫渗滤法（Two-step Dot Immunogold Filtration Assay，T—DIGFA）。家畜血吸虫病阳性血样在50-90S形成肉眼可观察的红色斑点，可进行快速诊断。该法可以检测出人工感染血吸虫尾蚴7d和7d以上的阳性牛和兔血纸抗体，与肝片吸虫、锥虫、蛔虫病之间无交叉反应。T—DIGFA检测粪孵血吸虫毛蚴阳性牛血纸139份、阴性牛血纸130份，与粪孵法阳性符合率为100％，阴性符合率为99．2％；T—DIGFA与斑点酶联SPA法阳性符合率和阴性符合率完全相同。血吸虫抗原胶体金在4～8℃保存期可达6个月、室温保存期为3个月。试验证实，T-DIGFA有很高的敏感性、特异性、重复性和稳定性，适合于基层单位和现场进行家畜血吸虫病抗体的快速诊断、普查和检疫。

快速检测猪囊虫抗体的金免疫层析法的建立及应用

目的 研制一种简便快速检测囊虫抗体的新方法 ,提供基层单位使用。方法 应用胶体金和免疫层析合成技术进行研究 ,建立检测囊虫抗体的金免疫层析法 ;以ELISA为对照 ,观察GICA法敏感性、特异性和稳定性。结果 每ml胶体金中兔抗猪IgG最适标记量为 30 8μg ,最佳抗原包被浓度为 1mg/ml。建立的GICA法检测囊虫病猪血清均为阳性 ,正常猪及其他疾病猪血清 ,结果均为阴性 ;整个实验仅一步操作 ,检测时间 5～ 15min。同ELISA法比较 ,两种方法检测囊虫抗体的相符率达 96 8% (P >0 0 5 )。GICA试纸条分别在 4℃和室温下保存 10 5d及 37℃保存 4 5d ,检测结果均未发现改变。结论 检测囊虫抗体的GICA法简便、快速、敏感、特异、稳定。

口蹄疫抗体免疫金标快速检测试纸法的建立

应用免疫学原理与胶体金层析技术,采用双抗原夹心ELISA建立了检测口蹄疫(O型)抗体水平的“口蹄疫抗体(O型)免疫胶体金快速检测试纸法”。应用该法与“口蹄疫正向间接血凝抗原法”对300份猪、鸡、鸭、牛、羊等血液或血清进行口蹄疫抗体水平检测试验,符合率达100%。试验结果显示,该法与间接血凝法一样,具有微量、特异、准确等优点,且操作简易,不需要任何仪器,检测时间短,结果直观,容易判定,适用于基层兽医站、养猪场使用和大面积口蹄疫抗体普查。

猪伪狂犬病抗体免疫金标快速检测试纸法

应用免疫学原理与胶体金层析技术相结合 ,采用双抗原夹心法建立了检测猪伪狂犬病抗体水平的“猪伪狂犬病抗体免疫胶体金快速检测试纸法” ,用该法与美国Idexx公司的猪伪狂犬病ELISA试剂盒 ,同时对 1 6份猪血液或血清进行抗体水平检测 ,符合率达 1 0 0 %。同时使用金标法对 1 0 0份猪血液和对应血清进行检测 ,结果也相同。试验结果显示 ,金标法与ELISA一样 ,具有微量、特异、准确等优点 ,且操作简易 ,而金标法不需要任何仪器 ,检测时间短 ,结果直观 ,容易判定 ,适用于基层兽医站、养猪场使用和大面积猪伪狂犬病抗体普查。

猪伪狂犬病抗体免疫金标快速检测试纸法的建立和应用

应用免疫学原理与胶体金层析技术相结合,采用双抗原夹心法建立了检测猪伪狂犬病抗体水平的“猪伪狂犬病抗体免疫胶体金标快速检测试纸法”,该法与美国Idexx公司的猪伪狂犬病ELISA试剂盒同时对16份猪血液或血清进行抗体水平检测,符合率达100%。同时对100份猪血液和对应血清进行检测,结果也相同。试验结果显示,本法与ELISA一样,具有微量、特异、准确等优点,且操作简易,而本方法不需要任何仪器,检测时间短,结果直观,容易判定,适用于基层兽医站、养猪场使用和大面积猪伪狂犬病抗体普查。

金标法检测梅毒螺旋体特异性抗体的适用性分析

目的 探讨TP 金标法在梅毒患者检测与献血者筛查中的适用性。方法 2 86 34份无偿献血者标本经RPR、TP ELISA法初、复检 ,阳性标本以TPPA确认 ,同时用TRUST、TP 金标法检测。金标法检测了 2 5例临床梅毒 ,31例自身免疫性疾病标本。结果 RPR、TP ELISA共检出阳性 1 35份 ,两法共阳性 6 7份 ,RPR单阳 4份 ,TP ELISA单阳 6 4份 ;1 35份阳性中TPPA确认阳性 1 1 3份 ,TP ELISA假阳性 1 8份 (1 5 .9% ) ,金标法 5份 (4 .4 % ) ,RPR 4份 (3.5 % ) ,TRUST 1份 (0 .8% ) ;RPR漏检 4 6份 (4 0 .7% ) ,TRUST漏检 35份 (30 .9% )。 2 5例梅毒标本金标法均为阳性 ,31例自身免疫性疾病标本金标法为阴性。结论金标法其灵敏度、特异性与TPPA相比无显著差异 (P >0 .0 5 ) ,比RPR、TRUST好 (P <0 .0 5 )。

免疫层析金标法测粪潜血试验的对比分析

目的 评价 3种粪潜血试验的方法 .方法 采用联苯胺法、试纸法、一步法对粪潜血试验进行对比分析 ,分别进行敏感性、特异性、干扰性评价试验 .结果 联苯胺法、试纸法阳性率高 ,但受某些食物及药物的外来因素干扰 ,特异性欠佳 ,一步法可克服食物及药物干扰 ,特异性较好 .结论 联苯胺法、试纸法适用于过筛 。

分析胶体金免疫层析技术在筛查献血样本梅毒的可行性

目的:探讨胶体金免疫层析技术(GICA)对无偿献血者献血前梅毒抗体快速筛查的可行性。方法:选取2016年10月-2017年8月523例无偿献血者献血样本,分别采用GICA和酶联免疫法(ELISA)对无偿献血者全血标本进行快速检测,比较两种方法的测定准确性及可行性。结果:GICA组检测阳性样本数为13例,ELISA组为11例,两者测定结果差异无统计学意义(χ2=0.042 65,P=0.836 4)。两组一次成功率分别为97.7%和95.6%,差异无统计学意义(P>0.05)。此外,GICA组时间成本及财力成本均低于ELISA组,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:GICA和ELISA均能准确对血液样本中梅毒抗体进行筛查,GICA比ELISA方法更加快速、简便,且耗时短、成本低,特别适用于缺乏检测及诊断设备或经济欠发达的地区。

免疫层析金标法测定甲胎蛋白浓度筛查出生缺陷

目的:用免疫层析金标法测定甲胎蛋白(AFP)浓度,观察其临床适用性。方法:应用AFP金标试条在SC-1金标试条智能测定仪上对102例血清样本进行AFP测定,并与电化学发光免疫测定仪测定结果对比。结果:两种方法测定结果相关性良好,相关系数γ=0.984,两测定值的比值为0.990;其直线回归方程Y=3.391+0.990X。且经自身对照计量比较的t检验得d=1.9015ng/mL,t=1.122,P=0.264>0.05。结论:用免疫层析金标法定量AFP有临床应用价值。

斑点金标免疫渗滤法诊断家畜血吸虫病的敏感性和特异性

研制成家畜血吸虫病斑点金标免疫渗滤法（DIGFA）诊断试剂盒可测出人工感染血吸虫14—42d的病牛、猪和兔的血清及血纸抗体，比病原体检查法提早28d查出病畜，达到早期诊断的要求；同时亦能检出仅感染1对血吸虫病牛抗体，证实DIGFA具有较高的敏感性。血吸虫与肝片吸虫、锥虫、蛔虫、囊虫和旋毛虫病之间未见交叉反应现象，说明本法具有较强的特异性。

滴金免疫测定法在检测日本血吸虫抗体中的应用

滴金免疫测定法(DIGFA)是以胶体金作为标记物的快速斑点免疫结合试验,抗原、抗体通过渗滤在膜上进行反应,阳性结果出现红色斑点。本文用血吸虫虫卵浸出液为抗原,金标记A蛋白为显示剂,建立了检测血吸虫抗体的DIG-FA。以本法检测血吸虫病患者血清81份,阳性卒92.6％;献血者血清50份,特异性为98％;42份产前检查的孕妇血清均为阴性;6例华枝睾吸虫患者未出现交叉反应;6例并殖吸虫患者中4例出现不同程度的阳性反应,其中3例环卵反应亦为阳性,环沉率8～15％。提示本法的敏感性和特异性与环卵反应相近。

免疫金标法粪便潜血试验的质量控制

目的:对免疫金标法粪便潜血试验进行质量控制。方法 通过灵敏度试验及不同的采样量探讨对潜血试验结果影响的原因。结果 免疫金标法潜血试验的质量问题主要是假阴性结果的产生。结论 试纸条的质量,标本的采样量及稀释液用量的严格控制是潜血试验质量控制的关键。

斑点金免疫渗滤法检测血清抗精子抗体

目的建立检测血清抗精子抗体的斑点金免疫渗滤法 (dot im munogold filtration assay,DIGFA)。方法 采用经 Sephadex G- 75 -抗人全血清柱亲和层析纯化的人精子抗原和胶体金标记的 SPA,根据免疫渗滤原理 ,建立抗精子抗体(ASAb)的斑点金免疫渗滤法检测法。结果 纯化的人精子抗原具有较好的特异性 ;斑点金免疫渗滤法与 EL ISA法比较 ,符合率为 97.7%。特异性为 96 .2 % (TN/ TN+ FP× 10 0 % ) ,敏感性为 88.9% (TP/ TP+ FN× 10 0 % ) ,阳性预测值 84.2 % (TP/TP+ FP) ,阴性预测值 97.2 % (TN/ TN+ FN) .结论 斑点金免疫渗滤法方法检测血清抗精子抗体有较好的特异性和敏感性 ,重复性好 ,试剂稳定 ,操作简便快速 。

斑点免疫金渗滤法检测猪瘟抗体的研究

以猪瘟抗原包被硝酸纤维素膜,然后用胶体金标记SPA,建立检测猪瘟抗体水平的斑点免疫金渗滤法检测试纸盒。通过胶体金标记金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)直接显色,阳性者出现红色斑点,结果易于判断。整个试验过程仅需5min,操作简单,与猪兰耳病、猪伪狂犬病、猪细小病毒、新城疫和禽流感等阳性血清不发生交叉反应。同时将该法与目前猪瘟的常规检测方法Dot-ELISA法和间接血凝试验同时对200份猪血清进行猪瘟抗体检测比较,符合率达98.4％和98.9％。说明该法微量、特异、敏感可靠,检测时间短,效果直观,非常适用于猪瘟的早期诊断和普查以及疫苗免疫效果后抗体水平的检测。

点免疫金渗滤法检测弓形虫IgG抗体

弓形虫（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａｇｏｎｄｉ）是一种可寄生在细胞内的原虫，人群中有较高的感染率。人类和多种动物感染弓形虫后可引起弓形虫病，出现神经系统、眼部和多个脏器的损伤。孕妇感染可引起胎儿畸形，流产或死胎。由于检获弓形虫体比较困难，对弓形虫感染的诊断主...

快速斑点免疫金渗滤法检测血清中囊虫抗体的研究

为建立一种快速敏感、适于基层应用的检测囊虫抗体的方法 ,将囊尾蚴抗原点于硝酸纤维素膜 (NC)上 ,用来检测血清中囊虫抗体 ,通过胶体金标记的金黄色萄萄球菌A蛋白(SPA)直接显色 ,阳性者出现红色斑点 ,结果易于判断。结果表明 ,整个试验过程仅需 5分钟 ,操作简单 ,用该法与酶联免疫吸附试验对比检测 5 7份囊虫患者血清标本 ,2法均阳性为 5 4份 ,2法均阴性为 1份 ,总符合率为 95 %。结果提示斑点免疫金渗滤法简便、快速、适于基层应用 。

酶联免疫吸附法检测罂粟碱研究 (Ⅱ)抗体制备和酶标抗原合成

利用前文制备的罂粟碱 -牛血清白蛋白 (Pap -BSA)偶联物作为免疫抗原 ,免疫新西兰大白兔 ,获得效价为 1:3 2的特异性抗罂粟碱免疫球蛋白 (抗体 )。同时 ,合成了罂粟碱 -辣根过氧化物酶 (Pap -HRP)结合物 (酶标抗原 ) ,抗体和酶标抗原特性的鉴定结果令人满意。