应用DotPPAELISA检测猪布氏杆菌病抗体的研究

本试验以布氏杆菌ＳＡＴ 为对照试验，建立了ＤｏｔＰＰＡＥＬＩＳＡ 检测猪布氏杆菌病抗体的方法，该法检测的猪ＩｇＧ 含量可达６９９２×１０－ ９ｇ，灵敏性高，不同猪抗ＰＲＶ、ＰＰＶ、ＨＣＶ、ＪＥＶ、ＣＨＬ 等阳性血清发生交叉反应，特异性强；此外该法还具有操作简便、快捷不需特殊试验条件、结果客观、肉眼易于判断、反应膜片可长期保存等优点。适宜在广大基层单位应用，对布病的快速诊检有着十分重要的意义。

间接Dot-PPA-ELISA检测猪细小病毒血清抗体

猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)是引起妊娠母猪繁殖障碍的主要病原之一.PPV还可引起仔猪的皮炎[3]和腹泻[2].我国各省市猪场猪细小病毒血清阳性率也很高.目前对该病的诊断准确率高的方法有间接荧光抗体技术、银加强胶体金技术、聚合酶链式反应法等,这些方法技术条件要求高,难在基层推广应用.血清中和试验、血凝和血凝抑制试验等操作较为简便,但准确率不高.

Dot-PPA-ELISA检测仔猪副伤寒血清抗体方法的研究

以沙门氏菌的改良H E 抗原为膜载抗原 ,建立了检测仔猪副伤寒血清抗体的Dot_PPA_ELISA方法。研究选取了特异性良好的抗原 ,确定了Dot_PPA_ELISA的最佳工作条件 ,初步确定了感染仔猪副伤寒的Dot_PPA_ELISA抗体阳性标准为 1∶32。本研究制备的诊断膜片特异性强、敏感性高 ,能够检测到 1∶2 0 4 8稀释的动物试验阳性血清 ;该方法操作简便快捷、结果客观、易于判定、各种试剂材料均可做到标准化 ,适合规模化养猪场仔猪副伤寒的抗体监测以及流行病学调查之用。

斑点酶联A蛋白免疫吸附试验(Dot-PPA-ELISA)检测猪衣原体抗体方法的建立

本研究建立了斑点酶联A蛋白免疫吸附试验(Dot-PPA-ELISA),对猪衣原体IgG的最小检测量为1.21 ng。以间接血凝试验方法为对照,两种方法同时检测120头份猪血清样品,Dot-PPA-ELISA检出43头份(35.83%),效价≥256;间接血凝试验检出26头份(21.67%),效价≥64。诊断膜片与猪瘟、猪布氏杆菌病、猪口蹄疫和猪弓形体病标准阳性血清均不出现有意义的交叉反应。诊断膜片置室温、4℃和-20℃下至少保存3个月其抗原效价不变。试验表明本方法重复符合率为94.44%,且反应效果不受反应板质量和新旧的影响;试剂用量节省,各步骤均可做到严格定量,操作简便,3 h内可出结果,肉眼即可判断,不需要特殊检测仪器。由于辣根过氧化物酶标记的葡萄球菌A蛋白(PPA)是一种广谱诊断试剂,因此Dot-PPA-ELISA还可以用于其它哺乳动物衣原体抗体的检测。

Dot-PPA-ELISA对猪丹毒的免疫监测及抗体保护效价的测定

用猪瘟、猪肺疫、猪丹毒三联疫苗和猪丹毒 1a、2型氢氧化铝吸附甲醛灭活疫苗分别免疫断奶仔猪 ,采用Dot PPA ELISA监测免疫猪血清抗体变化。结果 ,弱毒疫苗免疫后第 7d猪丹毒血清抗体效价开始升高 ,第 2～ 3周达最高值 ;灭活疫苗免疫后第 3～ 4周抗体效价达最高值 ,且灭活疫苗免疫猪的抗体水平明显高于三联疫苗免疫猪。免疫 6周后 ,用C4 30 0 4 (1a型 )、C4 3179(1b型 )和C4 3 12 (2型 ) 3株不同血清型的猪丹毒混合强毒同时对不同抗体效价的免疫猪和对照猪进行了皮肤内接种攻毒 ,并根据其皮肤和体温反应确定 1∶32为猪能抵抗混合强毒攻击的抗体保护效价。经对 4 4头 5 0～ 6 0日龄未免疫的断奶仔猪血清检测 ,其抗体效价在 1∶32以下的猪占88.36 % ,2 78头免疫猪血清的抗体效价在 1∶32或以上的猪占 92 .81%。表明Dot PPA ELISA适用于猪群猪丹毒的免疫监测和免疫力测定。

Dot-PPA-ELISA联合检测猪PRV.Brucella和Chlamydia抗体方法的建立和应用研究

首次将Dot-PPA -ELISA用于联合检测猪衣原体、伪狂犬病毒和布氏杆菌抗体 ,并进行了较大规模的田间猪血清检测。实验对制作诊断膜片的工艺流程和关键材料做了细致研究 ,并进行同步监测、分析。确定了本方法的最佳反应条件和阳性标准。联合诊断膜片 (简称膜片 )具有良好特异性、灵敏性和稳定性。诊断膜片在 4℃保存 8个月、室温 (15～ 2 5℃ )保存 2个月、37℃保存 1个月灵敏性 ,特异性不变。 1∶6 4、1∶12 8、1∶6 4为联合检测猪伪狂犬病、衣原体病和布氏杆菌病抗体的阳性标准。结果表明 ,Dot -PPA -ELISA联合检测法操作方便、快速 ,结果客观 ,易于判读 ,诊断膜片便于寄送、保存 ,性能稳定、可靠 ,并能同时检测多种疫病等优点 ,适宜应用于猪衣原体病。

禽流感(H9N2亚型)酶标抗体的制备及双抗夹心Dot-ELISA检测方法的建立

采用AIV灭活油乳苗(H9N2)对AIV非免疫鸡进行接种并获取高免血清,取高免血清采用饱和硫酸铵沉淀法,经过Sephadex G25层析柱提纯后可获得纯度很好的IgG。将IgG应用过碘酸钠法标记辣根过氧化酶(HRP),制备禽流感酶标抗体(IgG-HRP),利用所提取的AI-IgG和所制备的禽流感酶标抗体按照双抗夹心Dot-ELISA试验操作步骤,采用方阵法分别摸索包被抗原及酶标抗体的最佳浓度,以及各步反应时间等最佳反应条件,以建立一种优化的AIV双抗夹心Dot-ELISA检测法。结果表明,所制备的AI高免血清HI效价为10log2;AI酶标抗体克分子比值为2.45;优化的Dot-ELISA各条件为:包被AI-IgG最佳稀释倍数为1∶50;最佳封闭剂为1%牛血清白蛋白;AI酶标抗体最佳稀释倍数为1∶100;待检抗原与2种抗体的感作时间均为0.5h(37℃)。优化后的检测方法可在2.5h内诊断结果,制备好的包被膜在4℃下保存2个月不影响其效果。而且敏感性提高了3倍,与新城疫病毒液、传染性支气管炎及减蛋综合症病毒液无交叉反应。

S-CLPT和Dot-ELISA法检测旋毛虫病抗体的研究

目的 探索检测旋毛虫病抗体的简便易行方法。方法 采用玻片法环蚴沉淀试验(S-CLPT)和斑点-ELISA(Dot-ELISA)法检测感染旋毛虫病豚鼠血清。结果 二种方法阳性率分别为97.5％和100％。用此二种血清学方法检测正常豚鼠、血吸虫病兔、蛔虫病人和鞭虫病人血清,除1例蛔虫病人血清Dot-ELISA法出现阳性反应外,其它血清二种方法均为阴性反应。结论 二种方法对旋毛虫病特异性抗体的检测均有较好的敏感性和特异性。

用ABC－Dot－ELISA检测兔弓形虫循环抗体的初步研究

用ＡＢＣ－Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测兔弓形虫循环抗体的初步研究陈艳，毛克强（贵阳医学院寄生虫学教研室）我们利用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ能够克服ＥＬＩＳＡ需较多抗原或抗体包板之不足，再利用ＡＢＣＥＬＩＳＡ较常规ＥＬＩＳＡ灵敏度高４～１６倍的这一优点，将二种方法结...

PPA-ELISA检测试剂盒在猪瘟抗体临床监测中的应用

近年来，我国猪瘟的流行和发病特点发生了很大变化，转变为隐性感染和亚临床感染，临床表现也更加复杂，既有区域性流行，又有零星散发，既有高死亡率的急性症状，又有持续感染的温和性症状，出现了所谓“非典型猪瘟”、“温和型猪瘟”和“带毒母猪综合征”，病理剖检也常常不同于典型猪瘟的病理变化，给兽医临床诊断带来很大困难。尽管血清学抗体检测方法很难有效区分疫苗毒与野毒产生的抗体，但由于其具有使用方便、一次检测量大和血清容易保存等优点而被广泛应用，在猪瘟流行状态监测和流行病学调查等方面有着重要作用，也是免疫猪群抗体水平监测的主要方法，对疫苗免疫效果评价及免疫程序的制定均具有重要意义词。本研究应用猪瘟病毒PPA—ELISA抗体检测试剂盒对436份免疫猪血清样品进行检测，旨在了解猪瘟的疫苗免疫效果，合理指导猪瘟的防疫，为猪瘟的综合防控提供参考。

应用PPA—ELISA检测鸡传染性法氏囊病卵黄抗体的研究

应用PPA-ELISA检测了北京市某种鸡场三个父母代鸡群种卵卵黄传染性法氏囊病的抗体水平,结果表明。卵黄抗体效价与血清抗体效价基本相同,证实了运用卵黄替代血清进行鸡传染性法氏囊病抗体水平的监测是一种省力。省时有效,实用的抗体监测手段;同时,利用几种不同方法进行卵黄抗体的提取,结果聚乙二醇和氯仿处理获得的卵黄抗体提取液用于检测效果最好。

三抗体间接法Dot—ELISA检测牛副结核病IgG_1抗体的研究

本试验建立了检测副结核病牛血清中特异性抗体的一种新的免疫学诊断方法——三抗体间接法斑点酶联免疫吸附试验(Dot一ELISA)。并与粪便培养法,常规 ELISA,补体结合反应(CFT)及二抗体间接法 Dot一ELISA 进行了比较,试验结果表明,三抗体间接法Dot——ELISA 比常规 ELISA、CFT 和二抗体间接法 Dot——ELISA 显著敏感,而且快速、简易、经济,适用于大规模的现场检疫。

Dot—ELISA检测PRRSV抗体方法的建立

南京农业大学动物医学院PRRSV研究小组建立了适于基层生产单位检测PRRSV抗体的,Dot—ELISA方法。此法与进口PRRSV抗体ELISA诊断试剂盒(Herd Chek,IDEXX,美国)进行了 比较,结果如下:1、敏感性:检测了5份PRRSV阳性猪血清效价,Dot—ELISA的敏感性略高于进口试剂盒1—2个滴度。2、检出率:检测了采自华北地区猪场的35份猪血清。

应用FA及PPA-ELISA技术对猪瘟的检测

用免疫荧光抗体诊断技术及单克隆抗体纯化酶联免疫吸附试验诊断技术对疑为猪瘟病毒感染猪进行了检测 ,重点阐述了 2种方法的技术原理和操作过程。通过用免疫荧光抗体诊断技术检测了 5份病料 ,其中有 2份为阳性 ,阳性率为 40 % ;用单克隆抗体纯化酶联免疫吸附试验诊断技术检测了猪瘟血清抗体 ,在 40头母猪血清样品中 ,猪瘟弱毒抗体效价 OD值较高 ,有 1 0 0 %的保护率 ,但是发现母猪群中有 1 0 %隐性猪瘟感染 ,其强毒抗体效价 OD值大于 0 .5,体内带有猪瘟病毒。结果及过程表明此两种诊断方法检测快速、鉴别准确。

Dot—ELISA检测循环抗原在急性血吸虫病中的临床应用

1990年7～10月,我所收治急性血吸虫病(急血)97例,采用单克隆抗体(McAb)斑点酶联试验(Dot—ELISA)检测循环抗原(SCA)70例,应用于临床诊断及疗效考核。 材料与方法 一、待测血清:“急血”病人血清70份,取自本所住院病人。其中粪便单项检查阳性血清25份,双项检查粪阳及IHA(或COPT)阳性血清30份,IHA(或COPT)单项检查阳性血清13份,症状、体征阳性血清2份。经治疗6个月后病人血清40份。 二、粪检及IHA、COPT测定方法:均按血防手册方法。以粪检(1送1检)为依据,以IHA(冻干诊断血球由人民解放军163医院提供,批号:910406)、COPT(虫卵抗原由本所自制干虫卵粉,批号:9102)作对照。

Dot—ELISA检测血吸虫循环抗原的现场应用

我们于1990一1991年在潜江市现场查治病工作中,应用单克隆抗体斑点酶联免疫试验检测血吸虫循环抗原,并以粪检作对照.现将结果报告如下.材料与方法1 单克隆抗体试剂盒 由中国预防医学科学院寄生虫病研究所提供.2 试验血清 采自潜江市5个村,共409份;10例急性血吸虫病人经治疗1个月后采血复查,2个月后复查8例.

用Dot—ELISA检测NDV

作者用快速斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)检测新城疫病毒(NDV)效果明显,用该试验检测禽粪样123份,阳性57份(46.3％),检测76份禽的前胃或脾组织匀浆,阳性40份(52.6％)。为了与间接免疫荧光抗体试验(IFT)比较检测效果,用NDV的IFT抗体试验检测禽粪样67份,阳性30份(44.7％),检测禽组织匀浆39份,阳性20份(51.3％)。证实两种试验的敏感性相似。新建立的Dot-ELISA的操作时间需要30分钟,不需要昂贵的设备,制备的硝酸纤维膜使用前可保存几个月。

用Dot—ELISA诊断山羊弓形虫病

巴西学者Bahia,M.T等近来建立了诊断山羊弓形虫病的Dot—ELISA。他们用弓形虫速殖子制备的抗原致敏硝酸纤维素滤膜。对从流行区采集的169份山羊血清,用间接荧光抗体试验(IFAT)检出115份(68％)为弓形虫阳性,抗体滴度范围为1:16—1:16384。