在艾滋病检验中HIV抗体ELISA法筛查结果的分析及价值探讨

探讨在艾滋病检验中HIV抗体ELISA法筛查结果的分析及价值。方法 选择博乐市疾病预防控制中心2023年1月-2023年12月接受艾滋病检测的人员200例,分别对其采用胶体金法检测与HIV抗体ELISA法进行筛查,并将免疫印迹法检测结果作为金标准,对比两组检测方式的结果。结果 HIV抗体ELISA法阳性检出率高于胶体金法检测,P<0.05;HIV抗体ELISA法检测时间高于胶体金法检测,P<0.05;HIV抗体ELISA法检测成本低于胶体金法检测,P<0.05。结论 与胶体金方法相比,ELISA更能准确识别HIV感染,值得临床进一步推广应用。

双抗体ELISA检测人血清弓形虫循环抗原的初步研究

应用抗弓形虫抗体酶联免疫吸附试验夹心法(双抗体ELISA),检测不同人群血清循环抗原(CAg)。肉类加工人员、饮食服务人员的阳性率分别为9.3%(15/161)及3.9%(3/76),献血员未检出阳性者(0/72),肉类加工人员与献血员的CAg阳性率间差异非常显著(P<0.01),提示弓形虫感染与接触肉类食品似有密切关系。该法检测抗核抗体、类风湿因子、抗链球菌溶血素“O”等阳性者血清93份,均为阴性。方法的特异性试验的抑制率>70%;重现性试验的变异系数<10%。结果表明,该法具有较高的敏感性和特异性,认为可作为人体弓形虫急性感染的诊断方法。

抗体ELISA检测联合丙肝病毒核心抗原检测在丙肝治疗中的意义

目的探讨在丙肝治疗中应用抗体ELISA检测联合丙肝病毒核心抗原检测的意义。方法将2012年10月—2013年11月于该院进行临床申请HCV-RNA检测的325例患者(325份标本)作为研究对象,325例患者全部进行抗体ELISA检测和丙肝病毒核心抗原检测,对不同检测方法的检测结果进行分析对比。结果抗体ELISA检测与丙肝病毒核心抗原检测结果均阳性时,两者联合检测的假阴性率为0%,单用抗体ELISA检测的假阴性率为12.9%,与单用抗体ELISA检测相较两者联合检测的假阴性率明显较低(P<0.05);抗体ELISA检测及与丙肝病毒核心抗原检测均阴性时,两者联合检测的假阴性率为0.3%,单用抗体ELISA检测的假阴性率为2.3%,与单用抗体ELISA检测相较两者联合检测的假阴性率明显较低(P<0.05);丙肝病毒核心抗原ELISA检测为阳性而抗体ELISA检测为阴性时,两者联合检测的假阴性率为0%,单用抗体ELISA检测假阴性率为75.0%,与单用抗体ELISA检测相较两者联合检测的假阴性率明显较低(P<0.05)。结论采用抗体ELISA检测联合丙肝病毒核心抗原检测临床样本的假阴性率较低,两者联合检测提高丙肝的诊断符合率,有利于患者预后,具有重要意义。

抗HBsAg单克隆抗体在诊断中应用错位点双单克隆抗体ELISA夹心法的建立

对5种过氧化物酶标记的抗HBsAg单克隆抗体和14种固相物包被用单克隆抗体做了筛选试验,以探讨实际应用中各单克隆抗体的较佳配用方案。试验结果表明,用正交法所得的实验结果中,最佳配用情况下,包被用抗体和主要的酶标记抗体的作用下位点是错位的。即捕捉抗体与标记抗体分别作用在HBsAg的不同位点上,两者之间基本上没有位阻现象。这种双单克隆抗体夹心法的本底很低,可以目测判定结果。敏感性和特异性较好。HBsAg阳性,滴度为1:16(对流电泳法)的患者血清稀释至2^(19)时仍可得到P/N比≥2.1的读数,目测判定结果时至少在2^(16)稀释度下可明确地判定出阳性结果。

猴B病毒抗体ELISA检测试剂盒的制备及准确性评价

目的:以金标准试剂盒为参照,对新研制的猴B病毒抗体ELISA检测试剂盒进行准确性评价,以期为我国实验灵长类动物产业提供优质廉价的检测试剂。方法:利用3个批次共表达猴B病毒gD和g B蛋白的细胞上清分别制备ELISA检测试剂盒,与金标准试剂盒(VRL的ELISA试剂盒)同时对667只食蟹猴血清进行检测,考察新研制剂盒的准确性;然后,挑选强阳性、弱阳性、阴性样品,用另外2个批次ELISA试剂盒检测,考察不同批次试剂盒检测结果的稳定性。结果:金标准试剂盒对667只食蟹猴血清抗体检测结果为阳性280份、阴性387份,而新研制的ELISA试剂盒结果为阳性282份、阴性385份;与金标准相比,阳性样品的符合率为98.93%(277/280),阴性样品的符合率为98.97%(383/387),总体符合率为98.95%(660/667)。对100份强阳性样品、70份弱阳性样品、108份阴性样品及7份差异样品的重复检测表明,除1份弱阳性(金标准为阴性)检测为阴性外,其余样品与前期一致。结论:与金标准相比,新研制的试剂盒具有较高的准确性,可用于猴B病毒抗体的检测。

牛布鲁氏菌抗体ELISA试剂盒与国标血清学SAT试验在布病检测中的比较试验

采集的牛血清100份、羊血清250份,分别进行国标布病虎红平板凝集试验(RBT),在牛血清中检出13份布病阳性血清,羊均为阴性。对牛的13份阳性血清分别进行动物布病试管凝集试验(SAT)和牛布鲁氏菌抗体ELISA试验。经SAT试验结果为10份阳性,ELISA试验结果为13份阳性。结果表明牛布鲁氏菌抗体ELISA试剂盒快速,操作简便,敏感性好,特异性优待研究,如果能够证明特异性高,在布病血清学检测的有效的方法。

以PRRSV Nsp2-399重组蛋白为包被抗原建立PRRSV抗体ELISA检测方法

为了获得猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp2-399重组蛋白,以及利用Nsp2-399蛋白建立PRRSV早期感染的ELISA检测方法,试验克隆、原核表达了PRRSV DY株(GenBank登录号为JN864948)Nsp2-399重组蛋白,同时利用该蛋白建立并优化了ELISA检测方法。结果表明:成功克隆表达了PRRSV Nsp2-399重组蛋白,并建立、优化了Nsp2-399 ELISA检测方法。优化后的Nsp2-399 ELISA的最佳抗原包被浓度为1μg/mL,血清最佳稀释度为1∶40,最佳封闭液为10%胎牛血清,酶标二抗的最佳工作稀释度为1∶4 000,最佳显色条件为37℃、15 min。猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒、猪细小病毒阳性血清样品用建立的Nsp2-399 ELISA方法进行检测,S/P值均小于0.21,ELISA方法特异性良好。用本试验建立的ELISA方法和IDEXX ELISA检测试剂盒分别检测血清样品125份,总符合率为94.40%。说明成功建立了Nsp2-399 ELISA抗体检测方法,可用于PRRSV的抗体检测。

A型塞内卡病毒单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立

为建立一种快速检测A型塞内卡病毒(SVA)的方法,本研究利用氯化铯密度梯度离心法纯化的SVA粒子免疫BALB/c小鼠3次,采用杂交瘤技术制备SVA单克隆抗体(MAb)。结果显示,共获得7株能够稳定分泌SVA MAb的杂交瘤细胞株。采用过碘酸钠法将其中5株MAb标记HRP(MAb-HRP),并采用ELISA法检测标记效果。将7株MAb与5株MAb-HRP两两组合进行抗体配对试验。结果显示,5株MAb均标记上HRP,且其中各稀释度标记的MAb 2C8-HRP的反应性均最强;当MAb 2G7作为捕获抗体,MAb 2C8-HRP作为检测抗体时,P/N值最大,表明这两种MAb的配对效果最好。在此基础上,通过优化各反应条件初步建立检测SVA的双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)方法。利用建立的DAS-ELISA方法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪瘟病毒、O型和A型口蹄疫病毒和SVA,结果显示,该方法仅能检测SVA,其他常见的猪源病毒均为阴性结果,表明该方法特异性强。利用本研究建立的DAS-ELISA方法分别检测系列稀释的SVA上清液(1~1:80000,对应的病毒滴度分别为107.5TCID50/mL~1.25×10^(2.5)TCID_(50)/mL)和2倍倍比稀释的SVA猪阳性猪血清(1:2~1:256),同时采用猪塞内卡病毒抗原(SVA-Ag)ELISA试剂盒分别检测上述SVA上清液和SVA猪阳性血清,评估本研究建立DAS-ELISA方法的敏感性。结果显示SVA稀释40000倍后,其OD450nm值仍大于临界值0.115,即该方法对SVA上清液的检测限为2.5×10^(2.5)TCID_(50)/mL,且1:64倍稀释的SVA猪阳性血清样品仍为阳性;(SVA-Ag)ELISA结果显示,该方法检测的SVA最大稀释度为1:20000,即对SVA上清液的检测限为5×10^(2.5)TCID_(50)/mL,且仅能检测到稀释至32倍的SVA猪阳性血清,均低于本实验建立的DAS-ELISA方法,表明该方法敏感性高。对4份SVA猪阳性血清和1份SVA猪阴性血清采用DAS-ELISA方法进行批内和批间重复性试验,结果显示批间和批内重复性试验的变异系数均在10%以下,重复性较好。对采集的205份疑似SVA感染的猪扁桃体组织、鼻咽拭子及血清样品分别采用DAS-ELISA及RT-PCR方法检测。DAS-ELISA的检测结果显示,36份样品为阳性,169份样品为阴性;RT-PCR检测结果显示,50份样品为阳性,155份样品为阴性。经计算两种方法的阳性符合率为72%(36/50),总符合率为93%(191/205)。以上结果表明,本研究建立的DAS-ELISA适用于大规模多种临床样品的检测,为SVA的检测及流行病学调查提供技术支撑。

裂谷热病毒NP蛋白双抗体夹心ELISA检测方法的建立

为建立裂谷热病毒(RVFV)的快速检测方法,本研究选取RVFV高度保守的核蛋白(NP)基因,采用哺乳动物真核表达系统表达并纯化重组NP蛋白(r NP),经SDS-PAGE检测无误后将其分别免疫小鼠和大白兔,按常规实验方法制备RVFV鼠源NP单克隆抗体(MAb)5D8和兔源NP多克隆抗体(PAb)rab NP-1,经ELISA检测二者效价均为1:51200。以rab NP-1 PAb作为捕获抗体,5D8 MAb经HRP标记后作为检测抗体,经条件优化后结果显示,该检测方法捕获抗体浓度为1.56 mg/mL,0.2μg/孔;检测抗体浓度为1.17 mg/mL,2.24 ng/孔,初步建立RVFV双抗体夹心ELISA抗原检测方法。利用该方法分别对克里米亚-刚果出血热病毒(CCHFV)、拉沙病毒(LSV)、新冠病毒(SARS-CoV-2)和RVFV的NP以及RVFV Gn蛋白样品进行检测,结果显示,仅RVFV NP蛋白检测结果呈阳性,其余几种病毒蛋白均为阴性,无交叉反应;利用该方法检测2倍倍比稀释(2^(1)~2^(16))的RVFV复制缺陷型灭活病毒样品,结果显示经214倍稀释后的RVFV检测结果仍为阳性,该方法对RVFV检测限为6.1×10^(-1)FFU/mL;利用同一批次和不同批次包被的ELISA板进行批内和批间重复性检测,结果显示批内和批间变异系数均小于8%。使用RVFV灭活病毒对建立的双抗体夹心ELISA检测方法进行验证,结果符合预期。本研究建立的RVFV双抗体夹心ELISA检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于RVFV的快速检测,也可为NP蛋白功能的研究提供技术支撑。

检测H6亚型禽流感病毒的双抗体夹心ELISA方法的建立及初步应用

为建立快速检测H6亚型禽流感病毒的血清学方法,试验利用前期制备的两株抗H6亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体,建立检测H6亚型禽流感病毒的双抗体夹心ELISA方法,并进行特异性、灵敏度、稳定性试验以及对活禽市场采集的48份咽拭子样品的检测效果。结果显示:该ELISA方法只与H6亚型禽流感病毒反应,而与H1、H3、H4、H5、H7、H9、H10、H12等其他亚型禽流感病毒,血清4型禽腺病毒、血清8b型禽腺病毒、血清3型鸭腺病毒、传染性支气管炎病毒、新城疫病毒、鹅星状病毒、小鹅瘟病毒、传染性法氏囊病病毒以及禽白血病病毒均无交叉反应;该ELSIA方法可检测2.32×10^(4)TCID50/mLH6亚型禽流感病毒,批间和批内重复试验变异系数均小于10%;该ELISA方法和RT-PCR方法对活禽市场采集的48份咽拭子样品检测结果一致,进一步检测攻毒鸡的咽拭子显示该方法可有效检测咽拭子中H6亚型禽流感病毒。研究表明,基于两株单克隆抗体建立的检测H6亚型禽流感病毒的双抗体夹心ELISA方法具有特异性强、灵敏度高的特点,适用于H6亚型禽流感病毒感染的临床检测。

鸡减蛋综合征病毒中和性单克隆抗体的制备、鉴定及在双抗体夹心ELISA中的应用

为了制备针对鸡减蛋综合征病毒(EDSV)的中和性单克隆抗体,首先纯化得到重组EDSV纤维蛋白,经血凝试验(HA)鉴定纤维蛋白的血凝活性,HA效价为1∶2~7。之后将纤维蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,免疫4次后,小鼠血清的间接酶联免疫吸附试验(iELISA)效价最高达到1∶409 600,间接免疫荧光试验(IFA)效价最高达到1∶12 800。取效价最高免疫小鼠脾细胞进行细胞融合制备杂交瘤细胞,结合iELISA和IFA检测,经过多轮亚克隆,最终成功获得了2株稳定分泌中和性单克隆抗体的杂交瘤细胞株9G12和10E11。iELISA结果显示,单克隆抗体9G12和10E11的腹水效价分别为1∶128 000和1∶1 020 000;IFA效价分别为1∶2 000和1∶8 000。Western blot检测结果显示,单克隆抗体9G12和10E11均不能识别变性的EDSV纤维蛋白,表明二者识别纤维蛋白的构象型表位。病毒中和试验结果表明,单克隆抗体9G12和10E11均具有中和活性,中和效价分别为1∶2~7和1∶2~4。亚型鉴定表明,这2种单克隆抗体的轻链均为Kappa型,重链均为IgG1亚型。将基于单克隆抗体9G12和10E11建立的双抗体夹心ELISA方法应用于临床检测EDSV抗原,与荧光定量PCR检测结果的符合率为91.7%。综上,成功筛选出9G12和10E11杂交瘤细胞株,二者分泌抗EDSV特异性抗体,且这2种抗体具有中和EDSV感染活性,可应用于EDSV的临床检测。

禽腺病毒4型Fiber-2蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立

旨在制备禽腺病毒4型(FAdV-4)Fiber-2蛋白的单克隆抗体并建立Fiber-2蛋白的定量检测方法。本研究将原核表达的Fiber-2蛋白免疫BALB/c雌鼠,通过细胞融合技术制备杂交瘤细胞,并通过免疫印迹、间接免疫荧光和抗体相加试验筛选杂交瘤细胞株;以制备的单克隆抗体为捕获抗体和酶标检测抗体,通过优化捕获抗体包被浓度和酶标抗体稀释度等条件,建立特异性检测Fiber-2蛋白的双抗体夹心ELISA方法。结果:本研究成功筛选到3株能够稳定传代的杂交瘤细胞株1H2、2A9和3E1,其分泌的抗体均与FAdV-4全病毒具有良好的反应性,可识别不同抗原表位;进一步发现,以1H2为捕获抗体、2A9为酶标检测抗体,能够建立检测Fiber-2蛋白的ELISA方法;该方法具有良好的重复性,批内重复及批间重复试验变异系数均小于10%;敏感性高,Fiber-2蛋白检测限为0.078 ng/μL;特异性好,不与FAdV-4的其他结构蛋白及鸭腺病毒3型的Fiber-2蛋白发生反应。综上,本研究成功制备了3株Fiber-2蛋白单克隆抗体,并建立了定量检测Fiber-2蛋白的双抗体夹心ELISA方法,为后续FAdV-4基础研究和Fiber-2亚单位疫苗研究奠定了物质基础。

检测肺炎衣原体血清IgM抗体ELISA的建立和应用

特异性抗体测定是目前诊断肺炎衣原体（Chlamydia pneumoniae，C．pn）感染较敏感的方法。

单克鹰抗体ELISA一孔一期培育法检测HBeAg与抗-HBe

本文介绍一种使用单克隆抗-HBeα与单克隆抗-HBeβ作为试剂,以一孔一期培育法同时鉴定待检血清中的HBeAg或抗-HBe的ELISA新技术.82例HBV标志物均阴性的正常人血清,无一例检出HBeAg或抗-HBe.1,481例HBsAg阳性血清中的1,260例(85.1%),能被本法确定为HBeAg或抗-HBe阳性.110份HBsAg阳性血清同时使用本法以及RIA法,由不同操作者检测.109例两者取得完全一致的结果,仅l例用RIA法属抗-HBe阳性,本法阴性.本法是一种简便、节约、灵敏、特异的方法,效果满意.

牛病毒性腹泻病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

将牛病毒性腹泻病毒超免疫血清以常规方法提取IgG,采用过碘酸钠法标记辣根过氧化物酶(HRP),建立了从粪样中检测牛病毒性腹泻病毒抗原的双抗体夹心ELISA。结果,抗体的最佳包被量为150μg/mL,酶标抗体最适工作浓度为1∶200;封闭液为50mL/L的兔血清;待检粪样及酶标抗体的感作时间为37℃120min;底物显色时间为室温15min。应用建立的检测方法对河北省8个大中型奶牛场298份乳牛腹泻粪样进行了检测,结果,阳性检出率为42.6%。

双抗体夹心ELISA检测排泄物PEDV

用蔗糖密度梯度离心法纯化猪流行性腹泻病毒(PEDV)免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术获得2株分泌抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)单克隆抗体,建立检测PEDV的双抗体夹心ELISA方法。结果表明,该双抗体夹心ELISA最佳反应条件为,兔抗PEDV抗体稀释度为1:800包被37℃1 h加4℃12 h,样品反应时间为90 min,酶标抗体工作浓度为1:2 000作用45 min,以OD490nm≥0.37作为阳性判定标准。该ELISA的重复性变异系数小于10%,最低检测限为5×103.67TCID50/m L,并与猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒无交叉反应。用该ELISA方法和RT-PCR方法检测48份临床粪便样品,结果显示,ELISA阳性检出率为39.6%,而RT-PCR方法检测卡的阳性检出率为43.8%。表明双抗体夹心ELISA方法具有特异性强、灵敏性高和重复性好等优点,可用于PEDV快速检测。

双抗体夹心ELISA定量检测血清Cap43蛋白方法的建立与评价

目的建立定量检测血清Cap43蛋白表达双抗体夹心ELISA法,并初步探讨血清Cap43蛋白表达水平在肺癌患者与正常人群间有无差异,以及该蛋白表达水平的高低与肺癌组织学分型间的关系。方法建立双抗体夹心ELISA方法对肺癌患者与正常人群血清中Cap43蛋白的含量进行定量检测。结果双抗夹心ELISA包被Ⅰ抗羊抗人NDRG1多克隆抗体(PcAb)、Ⅰ抗兔抗人Cap43PcAb以及辣根酶(HRP)标记的羊抗兔Ⅱ抗的最佳工作浓度分别为1∶750,1∶1200,1∶350,标准蛋白曲线的回归方程为:y=0.53566+0.00046x,R2=0.9939,P<0.0001。应用该方法初步检测结果显示:肺癌组血清标本Cap43蛋白含量明显高于正常对照组(P<0.01),且肺腺癌组病人血清Cap43含量高于肺鳞癌组(P<0.01)。该方法的敏感度(SE)为84.51%,特异度(SP)为35.00%。结论建立了一种敏感度高,重复性好的定量检测血清中Cap43蛋白的双抗体夹心ELISA方法;Cap43蛋白在肺癌患者血清中呈现高表达,且在肺腺癌组病人血清中表达水平高于肺鳞癌组。

抗牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体的制备及双抗夹心ELISA检测方法的建立

为建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)双抗夹心ELISA检测方法,本研究将BVDV 890病毒株(BVDV-2)浓缩并纯化后免疫BALB/c小鼠,经常规技术进行细胞融合并筛选得到一株稳定分泌IgG的杂交瘤细胞株,命名为3F9。以BVDV单克隆抗体(MAb)IgM为捕获抗体,生物素标记的3F9为检测抗体,初步建立BVDV特异的双抗体夹心ELISA检测方法(BAS-ELISA)。采用建立的BAS-ELISA方法检测35份临床病牛血清样品,检出阳性样本13份;与RT-PCR的符合率达到94.29%;表明本研究所建立的BAS-ELISA方法可用于BVDV感染的临床诊断,为BVDV的免疫学研究奠定了基础。

转基因玉米中膦丝菌素乙酰转移酶双抗体夹心ELISA检测方法的建立

【目的】以单克隆抗体（monoclonal antibody,mAbs）为基础，建立检测膦丝菌素乙酰转移酶（the phosphinothricin acetyltransferase,PAT）的双抗体夹心ELISA方法,为转基因玉米PAT蛋白的检测提供参考。【方法】由P3301质粒扩增出膦丝菌素乙酰转移酶基因（blalaphos resistance gene）bar，并与表达载体pET28a构建重组质粒，诱导表达产生外源性PAT蛋白；以纯化后的PAT蛋白为免疫原，制备mAbs，建立双抗体夹心ELISA方法，并与PCR检测方法进行比较，确定该方法的准确性和可靠性。【结果】应用mAbs 4D5和3E8成功建立了检测PAT蛋白的双抗体夹心ELISA方法，其有效检测范围为3.125～50 ng/mL。采用该夹心ELISA方法对36份已知转基因背景的玉米样品进行了检测，根据阴阳性判定值OD450〉0.210，检测出含PAT蛋白的Bt176阳性样品4份，以bar基因为检测目标利用传统PCR方法也检测出相同的Bt176样品4份，2种检测方法的符合率为100%。【结论】利用建立的双抗体夹心ELISA免疫学检测方法，可以对转基因玉米中的PAT蛋白进行准确、特异、有效的检测。

Pfs25蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA的建立

目的:制备恶性疟原虫子孢子囊表面膜蛋白Pfs25的单克隆抗体(mAb),建立检测Pfs25蛋白的双抗体夹心ELISA方法。方法:纯化毕赤酵母表达的重组Pfs25蛋白,并免疫BALB/c小鼠,采用骨髓瘤细胞Sp2/0与免疫BALB/c鼠脾细胞杂交的细胞融合技术,通过间接ELISA检测获得分泌抗Pfs25抗体的阳性杂交瘤细胞株,通过免疫F1鼠诱生腹水,纯化腹水,并进行mAb的各项生物学鉴定。辣根过氧化物酶(HRP)标记纯化后的抗体,以4B7为包被抗体,1B4为酶标抗体,建立了双抗体夹心ELISA法。结果:获得3株抗Pfs25的杂交瘤细胞株,其中2株有良好的稳定性和特异性。并建立了双抗体夹心ELISA检测法,检测有效范围在0.07～1 mg/mL,其检测灵敏度为41.6 ng/mL。结论:成功制备抗Pfs25蛋白的单克隆抗体,并建立了一种可用于Pfs25蛋白检测的双抗体夹心ELISA法,为Pfs25蛋白制备传播阻断型疟疾疫苗奠定了基础。