猴B病毒抗体ELISA检测试剂盒的制备及准确性评价

目的:以金标准试剂盒为参照,对新研制的猴B病毒抗体ELISA检测试剂盒进行准确性评价,以期为我国实验灵长类动物产业提供优质廉价的检测试剂。方法:利用3个批次共表达猴B病毒gD和g B蛋白的细胞上清分别制备ELISA检测试剂盒,与金标准试剂盒(VRL的ELISA试剂盒)同时对667只食蟹猴血清进行检测,考察新研制剂盒的准确性;然后,挑选强阳性、弱阳性、阴性样品,用另外2个批次ELISA试剂盒检测,考察不同批次试剂盒检测结果的稳定性。结果:金标准试剂盒对667只食蟹猴血清抗体检测结果为阳性280份、阴性387份,而新研制的ELISA试剂盒结果为阳性282份、阴性385份;与金标准相比,阳性样品的符合率为98.93%(277/280),阴性样品的符合率为98.97%(383/387),总体符合率为98.95%(660/667)。对100份强阳性样品、70份弱阳性样品、108份阴性样品及7份差异样品的重复检测表明,除1份弱阳性(金标准为阴性)检测为阴性外,其余样品与前期一致。结论:与金标准相比,新研制的试剂盒具有较高的准确性,可用于猴B病毒抗体的检测。

两种猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒对疫苗免疫猪血清抗体检测的比较试验

为了比较两种猪瘟病毒抗体检测试剂盒对猪瘟疫苗免疫抗体的检测结果,本试验将27头猪瘟抗体阴性仔猪免疫猪瘟活疫苗后7、10、14、17、20、23、27、30、34 d共9个时间点采血,分别用两种猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒进行抗体检测,同时采用OIE指定方法-荧光抗体病毒中和试验对检测结果进行验证。结果表明,虽然两种试剂盒均可在免疫后30 d 100%检测到免疫猪体内的猪瘟抗体,但国产试剂盒在疫苗免疫后第10天便可在6/21猪体内检测到猪瘟抗体,20 d时抗体检测全为阳性,而美国IDEXX公司的试剂盒在疫苗免疫后27 d才在11/21猪体内检测到猪瘟抗体,30 d时才全部变为阳性,而两种试剂盒对6头阴性对照猪血清连续跟踪检测34 d均为阴性。由此可以得出结论:国产试剂盒在疫苗免疫后的早期抗体检测中敏感性明显高于IDEXX公司的试剂盒。

传染性胰坏死病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

以纯化的兔抗传染性胰坏死病病毒(IPNV)VP2重组蛋白多克隆抗体为包被抗体,抗IPNV VP2单克隆抗体为检测抗体建立了IPNV双抗体夹心ELISA方法。优化反应条件为:兔抗IPNV VP2重组蛋白多克隆抗体包被浓度为1.28μg/mL,抗IPNV VP2单克隆抗体的工作浓度为1.34μg/mL,酶标二抗稀释比例为1∶2 000,以P/N>2,且OD490 nm>0.101 494作为阳性判定标准。该方法的重复性变异系数均小于10%,与传染性造血器官坏死病毒(IHNV)、病毒性出血败血症病毒(VHSV)、鲤春病毒血症病毒(SVCV)、轮状病毒(HRV)无交叉反应。对41份虹鳟肝脏样品分别进行双抗体夹心ELISA和RT-PCR检测,结果双抗体夹心法与RT-PCR法检测符合率为97%,表明本实验建立的双抗体夹心ELISA检测方法检测IPNV具有较高的敏感性和特异性,可用于IPNV的病原学检测。

大同市羊布鲁氏菌病免疫抗体实验室检测

羊养殖业是广义农业的组成部分,也是畜牧经济的关键一环,要求加强管理,避免疫病影响养殖产业发展,这也对羊布鲁氏菌病的实验室检测提出了要求。本文首先简述羊布鲁氏菌病的实验室常用检测方法,在此基础上,结合当地羊只为口服布鲁氏菌病S2株疫苗免疫,免疫后2个月应用虎红平板检测法初筛,初筛阳性血清应用抗体ELISA复检,所得实验结果为当地羊布鲁氏菌病免疫及控制提供参考,同时服务羊养殖业、广义农业的发展。

非洲猪瘟病毒无标签p30-ELISA抗体检测方法的建立及应用

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起猪的一种急性、热性、出血性、高度接触性传染病,临床症状以败血症、皮炎和关节炎为特征,高发病率和高死亡率。为建立临床检测ASFV抗体的间接ELISA检测方法,本研究扩增了ASFV-CP204L基因,通过pET-30a原核表达系统表达p30蛋白,使用Ni-NTA纯化表达产物,通过肠激酶切除外源性蛋白,得到无His-组氨酸标签的p30蛋白,以此为诊断抗原,建立间接ELISA方法。结果显示:表达的无标签p30重组蛋白大小约为30 ku,与ASF阳性猪血清具有较好的反应原性;确定ELISA抗原包被浓度为1μg·mL^(-1),根据ROC曲线下面积确定S/P值>0.398判定为阳性,批内、批间变异系数均<10%;与PCV2、CSFV、PRV-gE、PRRSV阳性血清无交叉反应与INGENASA商品化试剂盒总符合率为97.78%。用该方法分别检测标准阳性血清、动物感染试验血清和收集的区域性临床血清644份,该方法最低可检测到1∶512倍稀释的标准阳性血清样品;检测感染动物血清,其中80%(4/5)的试验动物在第10天抗体为阳性。644份临床猪血清样品中抗体阳性率为7.61%,其中,母猪、后备母猪、仔猪、保育猪和育肥猪抗体阳性率分别为3.03%、0%、4.94%、7.55%和28.7%。本试验建立的ASFV-p30间接ELISA方法具有良好的特异性、灵敏度和重复性,可应用于ASFV的抗体检测,为ASF的诊断和流行病学调查提供了技术手段。

猪伪狂犬病毒gE蛋白单克隆抗体的制备及竞争ELISA抗体检测方法的建立

为了制备抗猪伪狂犬病病毒(PRV)糖蛋白gE的单克隆抗体并制备竞争ELISA猪伪狂犬病病毒gE抗体检测试剂盒,以原核表达系统表达PRV FA株囊膜蛋白gE的主要抗原表位区段(aa52~aa238)的His标签,获得了融合蛋白gE-6×His;将gE-6×His纯化后免疫BALB/c小鼠,取其脾脏制备脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0),进行细胞融合,以感染PRV的PK15细胞的蛋白为样本检测抗体,使用间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞系,获得了2株稳定分泌抗PRV gE单克隆抗体的杂交瘤细胞系。结果显示:制备的抗体特异性好,效价为1∶5120;以单克隆抗体为检测抗体建立的竞争ELISA抗体检测方法灵敏、特异。

简谈口蹄疫ELISA快速检测方法

口蹄疫,属于国家重大传染性疾病,是由口蹄疫病毒感染引发的一类接触性疾病,能够威胁猪牛羊等多种生出类动物。为了有效防范口蹄疫的发生流行,国家制定了强制性免疫接种制度,要求每年春秋两季进行针对性的疫苗免疫接种,确保口蹄疫的免疫接种密度达到100%,抗体水平能够维持在70%以上。在疫苗免疫接种过程中,针对先免后补工作中需要大量口蹄抗体检测工作而提出了一种快速检测方法,适用于口蹄疫A型、O型液相阻断ELISA抗体检测试剂盒,希望通过本次研究,对进一步提高口蹄疫的免疫接种质量有一定帮助。

猪瘟ELISA抗体检测试剂盒的应用效果比较试验

为了评价2种猪瘟ELISA抗体检测试剂盒的检测效果,用其对84份猪血清进行了猪瘟抗体检测。结果表明,A猪瘟ELISA抗体试剂盒检测猪瘟抗体阳性率为61.90%,B试剂盒抗体阳性率为69.05%,差异不显著,两者的总符合率为90.48%。在实际基层工作中,可以根据检测需要,灵活选用。

影响口蹄疫O型液相阻断ELISA抗体检测实验结果因素的研究

口蹄疫是由口蹄疫病毒感染猪、牛、羊等偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病。本病的流行非常广泛，一旦感染，将会给畜禽养殖业造成极大的经济损失，甚至是灭顶之灾，后果严重。目前，有效的防制措施就是用口蹄疫疫苗对猪、牛、羊等易感动物进行免疫接种。动物经接种后所产生的免疫抗体水平的高低，直接关系到能否对动物进行保护的效果，这只能通过抗体水平的检测来判断。口蹄疫的液相阻断ELISA检测技术，是一种成熟的检测技术，是当前国际上认可的一种标准化的检测诊断技术，也是国际贸易中检测口蹄疫的主要手段。

甘州区外调羊小反刍兽疫阻断ELISA抗体检测

[目的]肉羊跨区调运。[方法]小反刍兽疫阻断ELISA抗体检测实验,共检测血清35944份[结果]检出阳性血清样品共32822份,阳性率为91.31%。[结论]群体抗体水平达到了国家标准(群体免疫阳性率≥70%),有效防止了小反刍兽疫的发生和流行。

口蹄疫O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒与其改进型试剂盒的比对试验

为了评估田东县动物疫病预防控制中心兽医实验室检验质量,了解同一检测项目不同检测试剂盒检验结果的差异情况,实验室于2020年11月25日进行了口蹄疫O型抗体检测试剂盒比对试验。目的在于检验口蹄疫O型抗体不同检测试剂盒对检验结果的影响及敏感度,以及时发现存在问题,解决问题,不断提高实验室检测能力水平。

猪肺炎支原体乳酸脱氢酶基因的克隆、表达、纯化及其间接ELISA检测方法的建立

根据GenBank中的猪肺炎支原体乳酸脱氢酶(LDH)基因序列设计1对引物,PCR扩增LDH基因,首先将扩增片段连接到克隆载体pMD18-T上,然后连接到表达载体pGEX-KG上,经测序正确后诱导表达。重组质粒在大肠杆菌中表达的目的蛋白以可溶性蛋白和包涵体2种形式存在。将超声波破碎的诱导菌液高速离心,其上清用Glutathione Sepharose 4B bead亲和层析纯化。用猪肺炎支原体的标准阳性血清对纯化蛋白作Western-blot检测,出现目的条带;以纯化蛋白为抗原建立了检测猪肺炎支原体抗体的间接ELISA方法,该方法具有较好的稳定性和重复性,较高的特异性与敏感性。用建立的ELISA方法与中国兽医药品监察所研制的IHA试剂盒同时检测120份临床血清,二者总符合率为92.5%。用建立的ELISA方法检测了671份临床送检不同年龄阶段的猪血清,结果显示断奶前仔猪猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopnenmoniae,MHP)感染率为44.3%,保育猪为3.0%,育肥猪为17.44%,种猪为73.41%,这初步反映了猪喘气病在各个年龄阶段的感染率。

猪蓝耳病和猪瘟疫苗免疫后抗体检测分析

[目的]仔猪在14日龄接种蓝耳病毒疫苗,25日龄接种猪瘟疫苗,检测接种蓝耳病疫苗和猪瘟疫苗后的免疫合格率。[方法]采用猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒检测抗体表达量。[结果]猪蓝耳病疫苗免疫3 d后,6.7%免疫个体为抗体阳性,免疫7 d后,26.7%免疫个体为抗体阳性,免疫14 d后,85%免疫个体为抗体阳性,免疫后30 d 100%免疫个体为抗体阳性;猪瘟疫苗免疫3 d后,13%免疫个体为抗体阳性,免疫7 d后,40%免疫个体为抗体阳性,免疫14 d后,58.3%免疫个体为抗体阳性,免疫30 d后,83.3%免疫个体为抗体阳性。[结论]仔猪在蓝耳病疫苗免疫3 d后抗体效价最低,30 d后免疫效果很好,接种猪瘟疫苗3 d后抗体效价最低,仔猪不足以抵抗病毒侵袭,虽然蓝耳病疫苗和猪瘟疫苗接种后30 d,抗体水平都达到了农业部规定的70%的标准,但是猪瘟疫苗免疫效果不能达到100%理想效果。

口蹄疫抗体检测试验的试验设计

目的改进试验方法和试验步骤,降低试验成本。方法改进型口蹄病毒O型液相阻断ELISA抗体检测实验。结论试验每份血样的检测成本为4元。

高致病性猪蓝耳病疫苗免疫抗体效价试验报告

本试验选用30日龄非免仔猪188头,随机分为3个试验组。每个试验组选用不同厂家猪繁殖与呼吸综合征疫苗,分别在30日龄对非免仔猪进行首免,首免前采用前腔静脉采血检测母源抗体,首免后28天采血检测免疫抗体,及时进行强免,于强免后28天采血检测免疫抗体。采用猪繁殖与呼吸综合征(美洲毒株)ELISA抗体检测试剂盒进行检测;结果:第1、3组猪瘟疫苗免疫效果优于第2组。。要提高肉鸡经济效益,必须加强肉鸡的饲养管理。

2009—2010年山东地区蛋鸡禽白血病病原学和血清学调查

为了解山东地区蛋鸡禽白血病(Avian Leukosis,AL)的流行病学情况,从泰安、临沂、青岛、聊城等4个地区的祖代种鸡场及其具有亲缘关系的父母代、商品代鸡场采集1 827份血清,其中祖代鸡血清597份、父母代鸡血清710份、商品代鸡血清520份;并采集1 209份泄殖腔棉拭子,其中祖代鸡棉拭子597份、父母代鸡棉拭子460份、商品代鸡棉拭子152份。通过ELISA检测试剂盒进行了血清的ALV-J、ALV-AB抗体检测、泄殖腔棉拭子的P27抗原检测。结果显示:祖代鸡ALV-J抗体、ALV-AB抗体、P27抗原的平均阳性率分别为0、0.84%、17.93%,其中不同地区P27抗原阳性率存在较大差异,泰安、聊城、青岛地区P27抗原阳性率分别为52.5%、0.58%、0;父母代鸡ALV-J抗体、ALV-AB抗体、P27抗原的平均阳性率分别为8.45%、3.10%、30.48%,不同地区之间三者差别较大;而商品代鸡ALV-J抗体、ALV-AB抗体、P27抗原的平均阳性率分别为13.46%、8.65%、18.42%,不同地区之间三者也存在较大的差别。祖代、父母代及商品代间抗体或抗原阳性率高低的明显相关性,提示存在垂直感染的可能性。山东地区祖代种鸡未检测到ALV-J抗体,ALV-AB抗体检出率极低,仅为0.84%,但个别祖代鸡场P27抗原的阳性率极高,可能存在免疫耐受感染;父母代、商品代鸡群抗体阳性率和抗原阳性率均比祖代高,说明它们已有ALV-J、ALV-AB的感染;父母代及商品代鸡群ALV-J抗体水平都高于ALV-AB抗体水平,说明山东省内AL以ALV-J感染为主,应注意研究其传播途径,加强检疫净化。

传染性支气管炎弱毒疫苗不同方法免疫雏鸡的效果比较

试验选择1日龄的父母代雏鸡16000只,随机分成2组进行传染性支气管炎疫苗免疫,气雾免疫10000只,点眼免疫6000只。气雾免疫组和点眼免疫组在饲养管理和其他免疫方式等均相同。结果表明:气雾免疫在免疫应激反应、免后抗体水平和对生产性能的影响方面与点眼免疫无明显差异,但气雾免疫省时、省力,并能降低雏鸡点眼免疫应激、节约用人成本,适用于规模化饲养模式。

黔南黑猪规模养殖场伪狂犬病的净化及效果

为提高黔南黑猪的养殖效益与品质,对黔南黑猪某养殖场使用伪狂犬病病毒gE基因缺失疫苗免疫前后的猪群分别进行伪狂犬病gE-ELISA、gB-ELISA检测,经过4次采样检测,结合对野毒感染猪采取淘汰净化措施。结果:猪群伪狂犬病野毒抗体阳性率显著下降,生产效益显著提高。

专染性支气管炎弱毒疫苗不同方法免疫雏鸡的效果比较

试验选择1日龄的父母代雏鸡16000只，随机分成2组进行传染性支气管炎疫苗免疫，气雾免疫10000只，点眼免疫6000只。气雾免疫组和点眼免疫组在饲养管理和其他免疫方式等均相同。结果表明：气雾免疫在免疫应激反应、免后抗体水平和对生产性能的影响方面与点眼免疫无明显差异，但气雾免疫省时、省力，并能降低雏鸡点眼免疫应激、节约用人成本，适用于规模化饲养模式。

云南省昌宁县猪伪狂犬病血清学调查

为了解云南省昌宁县猪伪狂犬病流行情况,2015年以昌宁县养猪示范基地、规模户、公猪站为对象,采集7个乡镇115家养猪场的2 943头种猪血液,用ELISA法分别检测了感染抗体和免疫抗体。结果表明:昌宁县种猪伪狂犬病免疫抗体阳性率为78.70%,感染抗体阳性率为4.79%;种母猪的免疫抗体阳性率为80.30%,感染抗体阳性率为4.84%;种公猪的免疫抗体阳性率为60.34%,感染抗体阳性率为4.22%,猪场伪狂犬病的感染率低于全国平均值。说明昌宁县猪群伪狂犬病得到了一定的控制。