抗冷冻蛋白Ⅲ对玻璃化冷冻小鼠卵母细胞线粒体的影响

【目的】探索抗冷冻蛋白Ⅲ(antifreeze proteinⅢ,AFPⅢ)对玻璃化冷冻小鼠卵母细胞线粒体的保护作用。【方法】以5~8周龄昆明雌性小鼠为试验材料,将收集的小鼠MⅡ期卵母细胞随机分为空白对照组、冷冻对照组(经过玻璃化冷冻-解冻过程)和AFPⅢ添加组(在冷冻平衡液及冷冻液中均添加500 ng/mL AFPⅢ),利用线粒体绿色荧光探针(Mito-Tracker green,MTG)检测线粒体分布及含量,JC-1荧光染色检测线粒体膜电位,溶酶体红色荧光探针(Lyso-Tracker red,LTR)检测线粒体与溶酶体共定位,二氯荧光素二乙酸(DCFH-DA)检测活性氧(ROS)水平,ATP Assay Kit检测线粒体ATP含量。【结果】与空白对照组相比,玻璃化冷冻后小鼠卵母细胞的线粒体含量显著降低,部分线粒体呈现异常的散点状分布,且线粒体-溶酶体共定位情况明显增多,线粒体膜电位显著降低(P<0.05);同冷冻对照组相比,AFPⅢ添加组的小鼠卵母细胞线粒体含量显著升高,异常分布的线粒体和线粒体-溶酶体共定位情况减少,线粒体膜电位显著升高(P<0.05)。与空白对照相比,玻璃化冷冻后小鼠卵母细胞的ROS含量显著升高而ATP含量显著降低(P<0.05);与冷冻对照组相比,AFPⅢ添加组ROS含量显著下降而ATP含量显著升高(P<0.05)。【结论】AFPⅢ有助于改善玻璃化冷冻小鼠卵母细胞的氧化应激反应,对冻融卵母细胞线粒体具有保护作用。

抗冷冻蛋白Ⅲ减少家兔卵巢组织冷冻损伤的效果观察

目的:评价抗冷冻蛋白Ⅲ(AFPⅢ)对玻璃化冷冻家兔卵巢组织的影响。方法:收集家兔卵巢30只,随机分为新鲜卵巢组、添加AFPⅢ玻璃化冷冻组(AFPⅢ终浓度为500 ng/ml)和常规玻璃化冷冻组,各组10只,解冻后分析各组卵巢的组织学结构、卵泡形态正常率、卵巢组织超微结构、卵母细胞凋亡率及卵泡存活率。结果:新鲜卵巢组的卵泡形态正常率(91.6%)、卵泡存活率(81.75%)显著高于两冷冻组(P<0.01),卵母细胞凋亡率(12.0%)显著低于两冷冻组(P<0.01);添加AFPⅢ玻璃化冷冻组卵泡形态正常率(77.5%)、卵泡存活率(45.31%)显著高于常规玻璃化冷冻组(分别为62.1%、37.25%)(P<0.01),卵母细胞凋亡率(25.8%)显著低于常规玻璃化冷冻组(41.2%)(P<0.01)。结论:家兔冷冻卵巢组织的卵泡形态正常率、卵泡存活率显著低于新鲜组织,冷冻保护剂中加入AFPⅢ可减少家兔卵巢组织冷冻损伤。

血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂在治疗急性冠状动脉综合征中的应用

急性冠状动脉综合征的主要发病机制是冠状动脉内粥样斑块破裂，血小板活化聚集．血小板血栓形成，因此抗血小板治疗是治疗急性冠状动脉综合征的关键。血小板糖蛋白Ⅱb／Ⅲa（GPⅡb／Ⅲa）受体拮抗剂是通过抑制血小板聚集的最终共同通路发挥抗血小板作用，其抗血小板作用更彻底。国外血小板GPⅡb／Ⅲa受体拮抗剂应用于临床已经有10余年的历史，也进行了多个大规模、随机、多中心、双盲、前瞻性临床研究（PRISM、PRISMPLUS、RESTORE），

血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂在急性冠状动脉综合征中的应用

抗血小板治疗是急性冠状动脉综合征治疗的重要组成部分。血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂抑制了血小板聚集的最后共同通路,有较强的抗血小板作用。现通过大量临床研究证据,对血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂在急性冠状动脉综合征治疗中的有效性和安全性作一综述。

糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂在抗血小板治疗中的应用及其研究进展

近年来 ,抗血小板药物在基础研究及临床应用方面取得了一些新的进展 ,尤其在心脑血管疾病的预防和治疗中疗效显著。新型的抗血小板药物正在不断进入临床试用 ,特别是抗血小板膜糖蛋白药物在广泛深入的研究之中。

重组糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂的表达和纯化

观察糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂重组GST KGDX(谷胱甘肽S 转移酶 赖 甘 天冬 X)融合蛋白对血小板聚集的抑制作用。设计合成了两条编码KGDX(赖 甘 天冬 X)的寡核苷酸链 ,两端分别为BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点。将该基因插入原核高效表达载体pGEX 4T 1的tac启动子下游 ,获得重组质粒 pGEX 4T 1KGDX ,转化大肠杆菌DH5a,37℃诱导使重组子表达。GST KGDX融合蛋白具有可溶性 ,产量为 35mg/L培养基 ,表达量占菌体总蛋白的 48.0 2 %。破碎菌体上清经谷胱甘肽 琼脂糖悬珠亲和层析法获得纯度为 95 %的重组蛋白。血小板凝聚仪检测活性表明 ,在体外GST KGDX融合蛋白抑制ADP诱导的人血小板聚集作用强于GST(P <0 .0 5或 <0 .0 1 )。全血流式细胞术结果表明 ,GST KGDX能与GPⅡb/Ⅲa受体特异性结合。结论 :大肠杆菌中能够表达出较高产量的GST KGDX融合蛋白 。

血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂ETBT对血小板功能的影响

目的:观察血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPⅡb/Ⅲa)拮抗剂——依替巴肽(Eptifibatide,ETBT)对血小板聚集、释放、收缩血块和促凝活性等的影响。方法:在正常人全血或富血小板血浆(PRP)中加入不同浓度ETBT,分别检测二磷酸腺苷(ADP)诱导的血小板最大聚集率(rPAmax)、血小板CD62p表达百分率、血块收缩率和血小板3因子(PF3)有效性,通过与对照组比较获得ETBT对血小板功能的抑制率。结果:各种浓度(0.5～5.0μM)ETBT均对rPAmax有显著抑制作用(P<0.01),且随ETBT浓度增加而增加;较高浓度(5.0～10μM)ETBT对血块收缩有显著抑制作用(P<0.01);ETBT(0～80μM)ETBT对血小板CD62p表达(P=0.425)和PF3有效性没有明显抑制作用。结论:ETBT显著抗血小板聚集作用,但对血小板CD62p表达和促凝作用的影响较小;ETBT抗血小板聚集及抑制血块收缩的作用与其浓度呈正相关。

血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂在直接经皮冠状动脉介入治疗中的应用

斑块破裂导致血栓形成过程中，血小板首先在血管壁损伤部位黏附、激活，随后通过纤维蛋白原与血小板糖蛋白（GP）Ⅱb／Ⅲa受体结合，使相邻的血小板连在一起，这是血小板聚集的共同最后通路。血小板GPⅡb／Ⅲa受体拮抗剂通过阻断纤维蛋白原与GPⅡb／Ⅲa受体结合，抑制血小板聚集，被认为是目前最强的抗血小板聚集药物。

布地奈德联合孟鲁司特治疗小儿哮喘对抗凝血酶Ⅲ、CD5抗原蛋白和NLRP3炎症小体的影响

目的比较布地奈德单独治疗与布地奈德联合孟鲁司特治疗儿童哮喘的疗效和对患儿血清中抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)、CD5抗原蛋白(CD5L)及单个核细胞中NOD样受体热蛋白结构相关蛋白3(NLRP3)的影响.方法选取哮喘患儿124例,分为布地奈德组(A组)51例、布地奈德联合孟鲁司特组(B组)73例,选取同一时期体检的健康儿童40例作为对照组(C组).A组雾化吸入布地奈德,B组在雾化吸入布地奈德的基础上,服用孟鲁司特.检测3组儿童治疗前后的1秒用力呼气容积(FEV1)、峰流速(PEF);评定布地奈德单独治疗和布地奈德联合孟鲁司特的临床疗效;采用ELISA实验检测患者血清中AT-Ⅲ和CD5L的水平,qRT-PCR实验检测患儿外周血单个核细胞中NLRP3 mRNA水平.结果治疗前,A组、B组与C组相比,FEV1和PEF水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.001).治疗后,A组和B组与治疗前相比,FEV1和PEF水平显著提高(P<0.001),A、B两组间FEV1和PEF差异无统计学意义(P>0.05).B组总有效率90.4%,显著高于A组的84.3%(P<0.05).治疗前,A组与B组AT-Ⅲ、CD5L和NLRP3 mRNA水平差异无统计学意义(P>0.05),但与C组比较,AT-Ⅲ和NLRP3的水平升高,CD5L的水平降低.治疗后,B组AT-Ⅲ和NLRP3的水平降低,CD5L的水平升高;B组AT-Ⅲ水平明显低于A组(P<0.05).结论布地奈德联合孟鲁司特治疗儿童哮喘的疗效显著,可有效降低AT-Ⅲ和NLRP3的水平,提高CD5L的水平.

孟鲁司特钠颗粒联合吸入用布地奈德混悬液治疗小儿支气管哮喘的疗效及其对血清抗凝血酶Ⅲ、CD5抗原样蛋白和补体3水平的影响

目的探讨孟鲁司特钠颗粒联合吸入用布地奈德混悬液治疗小儿支气管哮喘的临床效果及其对患儿血清抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)、CD5抗原样蛋白(CD5L)和补体3(C3)水平的影响。方法选择2016年6月至2017年7月南阳市中心医院收治的138例支气管哮喘患儿为研究对象,根据治疗方法分为观察组和对照组,每组69例。2组患儿均给予吸氧、镇静、止咳平喘等常规治疗,在常规治疗基础上,对照组患儿给予吸入用布地奈德混悬液雾化吸入,观察组患儿给予吸入用布地奈德混悬液和孟鲁司特钠颗粒联合治疗,疗程均为2周。分别于治疗前及治疗后检测患儿用力肺活量(FVC)、呼气流量峰值(PEF)、第1秒用力呼气量(FEV1)、FEV1/FVC及血清AT-Ⅲ、CD5L和C3水平;观察2组患儿治疗期间不良反应发生情况及肺部哮鸣音、喘息、呼吸困难、咳嗽等临床症状缓解时间,并进行疗效评价。结果观察组患儿肺部哮鸣音、喘息、呼吸困难及咳嗽缓解时间短于对照组(P<0.05)。治疗前2组患儿FVC、PEF、FEV1及FEV1/FVC比较差异无统计学意义(P>0.05)。2组患儿治疗后FVC、PEF、FEV1及FEV1/FVC高于治疗前(P<0.05);治疗后,观察组患儿FVC、PEF、FEV1及FEV1/FVC高于对照组(P<0.05)。治疗前2组患儿血清AT-Ⅲ、CD5L、C3水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。与治疗前比较,治疗后2组患儿血清AT-Ⅲ和C3水平降低,CD5L水平升高(P<0.05)。治疗后,观察组患儿血清AT-Ⅲ和C3水平低于对照组,CD5L水平高于对照组(P<0.05)。观察组和对照组患儿治疗总有效率分别为91.31%(53/69)、71.01%(49/69),观察组患儿治疗总有效率高于对照组(χ~2=9.289,P<0.05)。观察组和对照组患儿不良反应发生率分别为1.45%(1/69)、2.90%(2/69),2组患儿不良反应发生率比较差异无统计学意义(χ~2=1.612,P>0.05)。结论孟鲁司特钠颗粒联合吸入用布地奈德混悬液可以快速缓解支气管哮喘患儿的临床症状,改善肺功能,提高治疗效果。

抗人血小板膜糖蛋白Ⅲa单克隆抗体抑制兔血栓形成的实验研究

目的 评价抗人血小板膜糖蛋白Ⅲa单克隆抗体SZ2 1抑制兔血栓形成的能力。方法不同浓度的SZ2 1( 0、10及 2 0 μg/ml)分别加入兔富血小板血浆 (PRP)中 ,进行二磷酸腺苷 (ADP)诱导的兔血小板聚集试验 ;体内注射SZ2 1( 1 5mg/kg) ,注射前及注射后 5、30及 6 0分钟时制备兔PRP ,分别进行聚集试验 ;用颈动静脉旁路血栓模型研究SZ2 1对兔血栓形成的作用 ,2 0只新西兰兔随机分成 4组 ,体内注射SZ2 1,剂量为A组 0 1mg/kg ,B组 0 4mg/kg ,C组 0 75mg/kg ,D为对照组 (SZ391mg/kg) ,然后测定血栓重量。 结果 体外 2 0 μg/ml的SZ2 1对兔血小板抑制率为 80 % ;SZ2 1体内注射 6 0分钟时完全抑制血小板聚集功能 ;血栓模型分组试验 ,各组平均栓重为A组 31mg ,B组 2 1mg ,C组 2 0 2mg ,D组 31mg ,B、C组与对照组间有明显统计学差异 (P <0 0 1)。 结论 单克隆抗体SZ2

抗P-selectin及血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa抗体检测在特发性血小板减少性紫癜与原发性干燥综合征伴血小板减少鉴别诊断中的意义

目的：探讨抗P-选择素（P-selectin）及血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa（GPⅡb/Ⅲa）抗体测定在鉴别特发性血小板减少性紫癜（ITP）和原发性干燥综合征（pSS）伴血小板减少鉴别诊断中的意义。方法采用ELISA法分别测定40例ITP患者，36例pSS伴血小板减少患者及40名正常人血浆中的抗P-selectin及GPⅡb/Ⅲa抗体。结果 pSS伴血小板减少组、ITP组抗P-selectin及GPⅡb/Ⅲa抗体水平及阳性率均高于正常对照组（P＜0.01）；pSS伴血小板减少组抗P-selectin抗体水平及阳性率显著高于ITP组（P＜0.01）；而pSS伴血小板减少组抗GPⅡb/Ⅲa抗体水平及阳性率与ITP组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论抗P-selectin及GPⅡb/Ⅲa抗体测定在ITP和pSS伴血小板减少鉴别诊断中有显著的临床意义。

血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂治疗急性缺血性卒中的研究进展

血小板活化在血栓形成中起着重要作用,虽然阿替普酶(alteplase,rt PA)静脉溶栓是治疗急性缺血性卒中(acute ischemic stroke,AIS)的标准治疗,但国内外一直在探索联合或单独使用各类抗血小板药物在治疗AIS中的作用。抑制血小板聚集过程最后共同通路的新型抗血小板药物血小板糖蛋白(GP)Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂,在急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)等心血管疾病中的安全性和有效性已得到验证,但在AIS中的作用尚存争议,本文拟就相关临床研究作一综述。

白花丹素钇(Ⅲ)配合物的合成、抗肿瘤活性及与牛血清白蛋白作用研究

以从传统中药白花丹中提取出来的白花丹素为配体,合成白花丹素钇(Ⅲ)的配合物[Y(PLN)_3(H_2O)_2],通过MTT法研究其对细胞株BEL7404的抗肿瘤活性,通过光谱学方法研究白花丹素钇(Ⅲ)与牛血清蛋白(BSA)的相互作用,结果表明白花丹素钇配合物具有一定的体外细胞毒活性,浓度20μg/m L时,抑制率为55.965%,PLN-Y(Ⅲ)与BSA的结合亲和力较弱,推测是由于PLN-Y(Ⅲ)配合物产生的空间位阻的影响,研究结果为进一步研究基于中药活性成分的稀土金属类抗肿瘤配合物提供实验参考.

国产血小板膜糖蛋白Ⅱb／Ⅲa受体拮抗剂盐酸替罗非班治疗PCI术后亚急性血栓患者的临床评价

2005年“中国多中心药物洗脱支架急性或亚急性血栓的调查”显示支架术后的血栓并发症是导致术后死亡的主要因素，近年来我们不断强化抗血小板治疗仍未能避免支架术后的血栓事件，支架术后的血栓问题将成为介入心脏病学研究的新热点。按支架置入后到发生血栓的时间长短将支架内血栓分为急性、亚急性和晚期血栓，其中以亚急性血栓（subacute stent thrombosis，SST）最为多见，SST指支架置入术后1-30天内形成的血栓。SST形成与血小板的活性密切相关，局部血栓多为富含血小板的血栓，常规的溶栓治疗往往不能取得很好的效果。盐酸替罗非班（tirofiban）为一种可逆性非肽类血小板膜糖蛋白（GP）Ⅱb／Ⅲa受体拮抗剂，由美国Merck公司研制开发，于1998年5月首次在美国上市，目前国产盐酸替罗非班（商品名：欣维宁）已上市。我们观察了11名PCI术后SST患者使用该药的效果，现报告如下。

最新ACC/ESC血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa抑制剂相关指南解读

抗血小板治疗是急性冠状动脉综合征（ACS）患者和经皮冠状动脉介入治疗（PCI）患者的治疗基石。血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体介导的血小板聚集是血栓形成的最后共同途径。因此,血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa抑制剂（GPI）成为治疗ACS和PCI患者的有效手段。但是,在降低缺血事件的同时增加出血风险一直是GPI的主要缺陷,而出血并发症有增加远期死亡率的可能。随着近期临床研究结果的公布,

新型抗血小板药物——GPⅡb／Ⅲa受体抑制剂在冠心病防治中研究进展

越来越多的研究表明血小板高活性在冠心病患者心肌缺血的发生、发展过程中起着重要作用。因此抗血小板药物的研究成为冠心病治疗的一个重要方面。近年来一类新型的抗血小板膜糖蛋白受体的药物日益受到人们的重视，其中最突出的就是对血小板GPⅡb／Ⅲa受体抑制剂的研究。本文就近年来运用该类药物在心血管血栓性疾病的防治方面所进行的一系列基础和临床研究作一综述。

金创抗菌膏对糖尿病难愈性皮肤溃疡中Ⅰ、Ⅲ胶原及MMP-13表达的影响

目的:探讨金创抗菌膏对治疗糖尿病难愈性皮肤溃疡Ⅰ、Ⅲ胶原及MMP-13表达的影响。方法:32只糖尿病大鼠模型造模成功的雄性SD大鼠随机分为生理盐水组和金创抗菌膏治疗组(每组16只),另外选择16只健康雄性SD大鼠作为对照组,三组大鼠同时制作创面模型。创面造模成功后,每天每组分别换药,于第7 d、14 d,每组处死8只大鼠。HE染色观察压疮皮肤形态改变;免疫组织化学技术检测基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase 13,MMP-13)的表达变化,RT-PCR技术检测MMP-13 m RNA的表达;苦味酸-天狼星红染色观察Ⅰ、Ⅲ型胶原面积变化。结果:HE染色显示金创膏组较生理盐水组更早出现肉芽组织,且成纤维细胞排列规则呈"指纹状";对照组成纤维细胞极性消失及胶原纤维排列紊乱,肉芽组织出现较晚。免疫组化及RT-PCR显示,金创抗菌膏治疗组MMP-13表达比对照组和生理盐水组均降低(P<0.05)。苦味酸-天狼星红染色显示与其它两组比较,金创抗菌膏组Ⅲ胶原面积最大,Ⅰ型胶原面积最小。结论:金创抗菌膏可以促进大鼠糖尿病皮肤溃疡的愈合,可能与调控创面皮肤Ⅰ、Ⅲ胶原基因及MMP-13的表达相关。

重组人源化Ⅲ型胶原蛋白对皮肤功能性相关基因表达的影响

重组人源化Ⅲ型胶原蛋白(RHCⅢ)由人胶原原始基因序列经过优化重组表达所得,与人体天然胶原氨基酸序列高度一致。为探究重组人源化Ⅲ型胶原蛋白应用在化妆品中,对减缓皮肤皱纹的功效作用,通过测试其作用于人皮肤成纤维细胞和角质形成细胞,在皮肤功能性基因层面验证其抗皱功效。结果表明,5 mg/mL RHCⅢ作用于人皮肤成纤维细胞可显著促进胶原合成相关基因CollagenⅠ,CollagenⅢ和Smad3的表达;同时,在UVA刺激条件下可显著抑制胶原降解相关基因MMP-1,MMP-3,c-jun和c-fos的表达。作用于角质形成细胞可显著促进皮肤屏障修复和保湿相关基因LOR,TGM1,IVL,OCLN1,DSG1,FLG,Caspase14和K1的表达。综上所述,样品重组人源化Ⅲ型胶原蛋白在5 mg/mL的给药质量浓度下具有抗皱功效。