抗冷冻蛋白基因遗传转化草菇的研究

采用RT PCR技术从瑞典的北极云杉卷叶蛾幼虫中扩增出抗冷冻蛋白基因 ,利用基因枪法遗传转化草菇。PCR检测和Southern杂交结果证明 ,抗冷冻蛋白基因已整合进草菇基因组。低温胁迫试验结果表明 ,转基因草菇具有较强的耐低温能力。转基因草菇生物学特性观测结果显示 ,大多数草菇转化子的生长速率明显地慢于对照的宿主菌株 ,多数转化子的菌丝也明显地比宿主菌丝细弱。转化子筛选结果表明 ,采用三轮的转化子筛选程序 ,即第一轮在固体培养基上筛选、第二轮和第三轮在液体培养基中筛选 ,有利于获得真实转化子和淘汰假转化子。转基因草菇一代低温胁迫结果证明 ,转基因草菇后代仍然具有较强的低温耐受能力 。

抗冷冻蛋白基因转化甜菜的研究

抗冷冻蛋白基因转化甜菜的研究＠李天然，张剑峰，李旭刚￥内蒙古大学生物学系甜菜，抗冷冻蛋白（ＡＦＰ）基因，遗传转化，根癌农杆菌，ＰＣＲ扩增抗冷冻蛋白基因转化甜菜的研究李天然，张剑峰，李旭刚（内蒙古大学生物学系，０１００２１，呼和浩特）ＳｔｕｄｙｏｎＴｒａｎ...

抗冷冻蛋白Ⅲ对玻璃化冷冻小鼠卵母细胞线粒体的影响

【目的】探索抗冷冻蛋白Ⅲ(antifreeze proteinⅢ,AFPⅢ)对玻璃化冷冻小鼠卵母细胞线粒体的保护作用。【方法】以5~8周龄昆明雌性小鼠为试验材料,将收集的小鼠MⅡ期卵母细胞随机分为空白对照组、冷冻对照组(经过玻璃化冷冻-解冻过程)和AFPⅢ添加组(在冷冻平衡液及冷冻液中均添加500 ng/mL AFPⅢ),利用线粒体绿色荧光探针(Mito-Tracker green,MTG)检测线粒体分布及含量,JC-1荧光染色检测线粒体膜电位,溶酶体红色荧光探针(Lyso-Tracker red,LTR)检测线粒体与溶酶体共定位,二氯荧光素二乙酸(DCFH-DA)检测活性氧(ROS)水平,ATP Assay Kit检测线粒体ATP含量。【结果】与空白对照组相比,玻璃化冷冻后小鼠卵母细胞的线粒体含量显著降低,部分线粒体呈现异常的散点状分布,且线粒体-溶酶体共定位情况明显增多,线粒体膜电位显著降低(P<0.05);同冷冻对照组相比,AFPⅢ添加组的小鼠卵母细胞线粒体含量显著升高,异常分布的线粒体和线粒体-溶酶体共定位情况减少,线粒体膜电位显著升高(P<0.05)。与空白对照相比,玻璃化冷冻后小鼠卵母细胞的ROS含量显著升高而ATP含量显著降低(P<0.05);与冷冻对照组相比,AFPⅢ添加组ROS含量显著下降而ATP含量显著升高(P<0.05)。【结论】AFPⅢ有助于改善玻璃化冷冻小鼠卵母细胞的氧化应激反应,对冻融卵母细胞线粒体具有保护作用。

抗冻蛋白质——转移冷冻抗性的前景

大量的海洋栖息的动物和陆地的昆虫都能产生大分子的抗冻物质,以有助于它们生存在它们的不被保护的血液和血淋巴的体液的冰点之下的温度环境中。用这些抗冻物质结合和抑制冰晶生长的非浓度相关的方式。这样它们对一旦冰晶形成后的冰的融点就没有多大的影响了,所以研究者比较确切地将这类物质描述为热滞留蛋白质,因此这些蛋白质就成了检测抗冻能力的基础。

抗冷冻蛋白基因(afp)转化大豆的研究

目的:通过农杆菌介导法遗传转化大豆。方法:通过热激法将质粒pCAAFP66导入根癌农杆菌菌株EHA105中获得含有抗冷冻蛋白基因(afp)及除草剂抗性筛选标记基因(bar)的农杆菌工程菌株;以大豆品种华春6号和马祖1号种子的下胚轴为外植体,经过农杆菌介导将抗冷冻蛋白基因导入大豆基因组中,在含有除草剂草丁膦(PPT)的培养基中筛选、并经过PCR鉴定获得大豆转化植株。结果:PPT的最佳筛选浓度为1.0mg/L,华春6号和马祖1号的阳性植株数分别为6株和2株,转化效率分别为3.70%和0.94%。结论:不同基因型大豆的转化率存在差异,抗冷冻蛋白基因成功遗传转化进大豆细胞中。

棉花抗黄萎病研究获得突破

中国科学院遗传与发育生物学研究所副研究员王义琴通过用蛋白提纯、测序和cdna文库筛选等方法从天麻中克隆到一个天麻抗真菌蛋白基因，命名为gafp，并证明gafp对包括黄萎病在内的多种真菌具有较好抗性，进一步筛选天麻基因组文库发现，天麻中存在着4个gafp基因。