抗冻肽基因在热激表达盒式载体中的构建

克隆于细菌表达载体ｐＧＥＭ－３ｚｆ（－）中的ＡＦＰ基因经ＳａｌＩ和ＫｐｎＩ消化后，插入到热激盒式表达载体ｐＭＡ４１２的ＳａｌＩ和ＫｐｎＩ位点中，连接于一可融合的报道基因（β－葡萄糖醛酸苷酶基因）之后，共同受玉米热激蛋白启动子控制，构成一表达单元．并将此带有ＡＦＰ基因的热激盒式表达单元亚克隆于植物双元表达载体ｐＢＩｎ１９中，成功地构建成ｐＸＭ０５，进而构建了ｐＸＭ１５表达载体．

抗冻肽基因在植物表达载体中的构建

植物表达载体 PBin4 3 8经 Hind 和 Eco P 双酶切 ,回收其 Hind — Bma H -Sal — Eco R 片段 ,和PUC19Hind —ECORI片段连接 ,构建成载体记为 PUC3 8。将含 AFP基因的克隆经 Bam HI、Xho I双酶切 ,得到的Bam HI— AFP— Xho I片段装入 PUC3 8Bam HI— Sal I位点 ,克隆 AFP基因。然后再用 Hind 、EORI双酶切 AFP基因 ,插入 PBin4 3 8的 Hind — Eco R 位点 ,进而构建成带有 AFP基因的植物表达载体 ,为进一步研究