抗凋亡基因bag-1的表达及其与肝内胆管细胞癌分化的关系

目的 探讨抗凋亡基因bag 1在原发性肝内胆管细胞癌 (ICC )中的表达及其与肿瘤分化的关系。方法 采用免疫组织化学的方法 ,检测bag 1基因在ICC组织 (n =48)及肝细胞肝癌癌旁胆管上皮 (对照组 ,n =2 5 )中的表达情况。结果 ICC组的bag 1基因表达强于对照组 (P <0 .0 1)。在ICC组内 ,2 7例中低分化胆管细胞癌中bag 1基因的表达强于 2 1例高分化胆管细胞癌 (P <0 .0 1)。结论 bag 1的表达在分化越低的胆管细胞癌中越强 ,提示bag 1基因可能与其肿瘤的分化相关。

抗凋亡基因bag-1在乳腺癌组织中的表达及意义

目的 讨论抗凋亡基因 bag- 1在乳腺癌组织中的表达及意义 ,了解肿瘤细胞凋亡的特点 .方法 采用免疫组化SABC法观察了 10 0例乳腺癌与 10例乳腺良性肿瘤及 10例正常乳腺组织的石蜡标本切片中 bag- 1的表达 .结果 Bag- 1在乳腺癌组织中 ,乳腺良性肿瘤中 ,正常乳腺组织中阳性表达率分别为 85 .0 % ,10 .0 %和 10 .0 % ,差异明显 (P<0 .0 5 ) .在 I期 ,II期和 III期的乳腺癌组织中 Bag- 1阳性表达率分别为87.5 % ,82 .4%和 88.2 % .三者无明显差异 (P>0 .0 5 ) .在导管癌、小叶癌及特殊型癌中 Bag- 1阳性表达率分别为 85 .5 % ,84.8%和 80 .0 % .无明显差异 (P>0 .0 5 ) .结论 bag- 1在乳腺癌组织中高表达 ,bag- 1在乳腺癌组织中的表达与肿瘤的临床分期 ,病理分型等无关 .Bag-

抗凋亡基因Bag-1在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的:探讨抗凋亡基因Bag-1在不同分化程度非小细胞肺癌与正常组织中的表达。方法:采用免疫组织化学法检测60例非小细胞肺癌与9例正常组织中抗凋亡蛋白Bag-1的表达水平。结果:Bag-1在非小细胞肺癌组织中的阳性表达率为46.67%,正常组织中的表达率为11.11%,两者相比有显著性差异(P<0.01);而且Bag-1在低分化肺癌较高分化肺癌组织的表达增强(P<0.05)。结论:抗凋亡基因Bag-1在非小细胞肺癌组织表达增强,且与其病理分化程度有一定相关性,抑制其有效表达也许会成为肺癌分子靶向治疗的方向。

scAAV9-IGF-1对SOD1-G93A小鼠抗凋亡通路的作用

目的 探索以自我互补双链腺相关病毒9为载体介导的人胰岛素样生长因子-1 (scAAV9-IGF-1)对SOD1-G93A转基因小鼠抗凋亡通路的作用。方法 采用肌萎缩侧索硬化(ALS)的动物模型即转基因SOD1-G93A突变型及野生型(wild type-SOD1,WT-SOD1)小鼠,在其出生后60 d龄时,雌性同窝阳性SOD1-G93A转基因小鼠采用随机的方法分配到治疗组及溶剂对照组,治疗组全身多点肌肉注射scAAV9-IGF-1,溶剂对照组多点肌肉注射AAV9-GFP,同年龄WT-SOD1作为阴性对照组。在肌肉注射40~50 d后,利用PCR技术检测腰髓中IGF-1含量的变化,同时检测抗凋亡通路因子Bcl-xl、Bcl-2的mRNA含量变化,通过免疫组化染色观察抗凋亡通路因子Bcl-xl、Bcl-2在小鼠腰髓前角神经元中的表达。结果 PCR技术检测显示scAAV9-IGF-1处理后,腰髓中IGF-1的mRNA含量显著高于GFP对照组,抗凋亡通路因子Bclxl、Bcl-2的mRNA含量均高于溶剂对照组(均P<0.05),而与WT组差异无统计学意义。免疫组化染色结果显示,治疗组中抗凋亡通路蛋白Bcl-xl,Bcl-2在小鼠腰髓前角神经元中的表达多于溶剂对照组,并且与WT阴性对照组相当。结论 scAAV9-IGF-1可以激活SOD1-G93A转基因小鼠模型中的抗凋亡通路,其通过上调Bcl-xl,Bcl-2的mRNA水平,进而增加Bcl-xl、Bcl-2的蛋白表达,从而产生抗凋亡的作用。

抑癌基因nm23-H_1诱导癌细胞凋亡及抗氧化作用的研究

目的 :初步探讨nm2 3 H1基因的抑癌机制。方法 :实验将nm2 3 H1基因转化进入人喉癌细胞Hep 2 ,使其在细胞中稳定表达。使用电镜观察细胞形态学变化 ,并测定抗氧化剂还原型谷胱苷肽 (GSH)浓度。结果 :nm2 3 H1转化的Hep 2细胞有核固缩、核分离等典型的细胞凋亡现象 ,其GSH浓度也有所升高 (16 9% )。结论 :表明nm2 3 H1具有诱导肿瘤细胞凋亡 ,提高肿瘤细胞抗氧化能力的作用。

鼻息肉组织嗜酸粒细胞中水通道蛋白-1和抗凋亡基因Bcl-2 mRNA的表达及意义

目的 明确水通道蛋白-1(aquaporin-1,AQP-1)mRNA、抗凋亡基因Bcl-2 mRNA在鼻息肉组织中的表达、分布及其相关性,探讨AQP-1 mRNA在鼻息肉组织嗜酸粒细胞中表达的意义。方法 16例鼻息肉组织标本来源于鼻息肉切除的患者(女11例,男5例,年龄20-65岁);10例下鼻甲黏膜组织来源于有变应性鼻炎病史的鼻整形患者(女7例,男3例,平均年龄16-58岁)。上述标本取组织相邻切片,应用原位杂交方法检测AQP-1 mRNA和Bcl-2 mRNA的表达;以麦格-姬姆萨(May-Griunwald-Giemsa,MGG)染色法鉴别嗜酸粒细胞。结果 16例鼻息肉组织嗜酸粒细胞中均有AQP-1 mRNA和Bcl-2 mRNA表达,其阳性细胞表达率分别为(93.16±13.25)％;(84.74±12.10)％;而10例下鼻甲组织嗜酸粒细胞中均有Bcl-2 mRNA表达,但仅有4例表达AQP-1 mRNA;AQP-1mRNA和Bcl-2 mRNA在下鼻甲组织嗜酸粒细胞中阳性细胞表达率分别为(19.54±4.98)％和(16.45±3.12)％。AQP-1 mRNA与Bcl-2 mRNA在鼻息肉组织嗜酸粒细胞的表达呈明显正相关(r=0.875,P<0.01)。结论 AQP-1能够平衡鼻息肉组织嗜酸粒细胞内外液体渗透压,维持其存活,在嗜酸粒细胞抗凋亡中具有重要的意义。

脊尾白虾抗细胞凋亡因子DAD1基因的克隆及其组织表达分析

取健康脊尾白虾（Exopalaemoncarinicauda）成体，体长（5．81±0．32）cm，体质量（1．18±0．35）g。根据本实验室已构建的脊尾白虾血细胞全长CDNA文库进行EST测序分析，获得脊尾白虾抗细胞凋亡因子DADl基因的cDNA全长并命名为EcDADl基因。该序列全长645bp，包括5非编码区184bp，开放阅读框345bp和3非编码区116bp，共编码114个氨基酸，预测分子量为12．85kD，理论等电点为8．75。同源性分析表明，脊尾白虾抗细胞凋亡因子EcDAD1氨基酸序列与其他物种DAD1有高度同源性，与斑节对虾（Penaeusmonodon）的相似性最高，为92％；与其他无脊椎动物的相似性为73％～80％。系统进化分析表明，脊尾白虾EcDAD1与斑节对虾的DAD1紧密聚为一支。荧光定量PCR分析结果表明，EcDAD1基因在脊尾白虾血细胞、鳃、肝胰腺、肌肉、卵巢、肠、胃和眼柄中均有表达，其中卵巢中的相对表达量最高。感染鳗弧菌（Vibrioanguillarum）和WSSV后6h和12h，脊尾白虾血细胞和肝胰腺中EcDAD1的表达量较对照组均显著增加（P〈0．01），且不同时间点间差异显著，表明EcDAD1基因可能在脊尾白虾抵抗病原体入侵机体的过程中具有重要作用。

E1A激活基因阻遏子(CREG)过表达通过抑制p38/JNK信号分子活化对抗人血管平滑肌细胞凋亡

血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡参与了动脉粥样硬化(AS)及冠状动脉介入治疗(PCI)术后再狭窄(RS)等心血管疾病的发生发展过程.E1A激活基因阻遏子(CREG)是新近发现的一种分泌型糖蛋白,在维持细胞和组织稳态方面发挥重要作用.前期研究发现CREG蛋白过表达能够对抗血清饥饿诱导的人血管平滑肌细胞(hVSMCs)凋亡,进一步探讨CREG对hVSMCs凋亡的调控作用及相关的分子机制.以逆转录病毒稳定转染的CREG过表达及表达抑制的hVSMCs为模型,应用两种药物Staurosporine(STS)和Etoposide(VP-16)诱导细胞发生凋亡,检测细胞凋亡和相关信号通路变化.结果显示,在药物干预后,CREG表达抑制时细胞凋亡明显增多,而CREG过表达明显抑制hVSMCs凋亡.同时也发现,CREG表达抑制时p38及JNK活性明显增强,而CREG过表达时p38和JNK活性被抑制.经腺病毒转染和药物干预抑制p38表达后,细胞凋亡均受到抑制,而且在p38活性被抑制的同时,JNK活化也受到抑制.说明p38和JNK表现为协同作用.结果也显示,VSMCs分化指标SMα-actin和SM MHC与CREG表达呈一致趋势,而细胞外基质蛋白Fibronection与CREG表达呈负相关.以上结果提示,CREG在维持VSMCs表型转换方面发挥重要作用,并且通过p38和JNK信号转导通路对hVSMCs凋亡进行调控.CREG可能对于AS和PCI术后RS的防治具有重要价值.

Wee1基因修饰细胞抗CTL诱导的凋亡效应

目的 研究Wee1转基因细胞抗CTL介导的凋亡效应及抗穿孔素抗体的对此抗凋亡效应的影响。方法 采用DNA转染技术将重组体Wee1Hu GFP导入哺乳动物细胞NIT(鼠胰岛细胞瘤细胞 ) ;以转染重组体前、后的NIT为靶细胞 ,采用ELISA凋亡试剂盒检测CTL介导的凋亡效应。结果 转染Wee1及加入抗穿孔素抗体的NIT组发生凋亡的细胞数最少。结论 Wee1基因转染靶细胞在一定程度上可抵抗CTL介导的细胞凋亡 ,而穿孔素抗体可协同增强此抗凋亡效应。

EBV-BHRF1基因阳性与阴性细胞株对3种诱导凋亡因素抵抗性差异的研究

目的观察ＥＢＶ┐ＢＨＲＦ１基因阳性（ＳＵＮＥ┐１、Ｒａｊｉ和Ｂ９５┐８）与阴性（Ｋ５６２、ＹＡＣ）细胞株对３种诱导细胞凋亡（ａｐｏｐ┐ｔｏｓｉｓ）因素（无血清培养４８小时，４３℃作用１０分钟或２×１０－６ｍｏｌ／Ｌ地塞米松作用２４小时）的抵抗力差异。方法ＰＣＲ扩增ＥＢＶ┐ＢＨＲＦ１基因片段诱导后经电镜及电泳ＤＮＡ检测细胞凋亡。结果分别从Ｂ９５┐８、Ｒａｊｉ及人低分化鼻咽癌细胞株（ＳＵＮＥ┐１）ＤＮＡ中扩增出ＥＢ病毒的ＢＨＲＦ１全基因片段，而Ｋ５６２、ＹＡＣ细胞株则不含该基因片段。分别经上述３种方法处理后，前３种细胞株的形态及ＤＮＡ电泳行为未发生明显改变，而后２种细胞株则出现典型的细胞凋亡特征，即细胞核凝缩，细胞膜及细胞器基本保持完整；ＤＮＡ电泳出现梯形（Ｌａｄｄｅｒ）条带。

乳腺癌组织芯片中凋亡相关基因BAG-1的表达及其意义

为检测凋亡相关基因BAG 1在乳腺癌、癌旁组织、正常组织中的表达 ,并讨论其意义 ,笔者利用组织芯片采用免疫组化DAKOEnvision法检测乳腺癌、癌旁组织、正常组织中BAG 1的表达。结果示组织芯片中BAG 1在乳腺癌组织中的表达明显高于乳腺癌癌旁组织、正常乳腺组织 (阳性表达率分别为 65 .0 %,7.1%,11.1%) (P =0 .0 0 1)。提示BAG 1在乳腺癌组织中表达较乳腺癌癌旁组织及正常乳腺组织高 ,乳腺癌的发生可能与凋亡相关基因BAG 1有关。

虹鳟抗细胞凋亡因子(DAD1)基因全长cDNA克隆与进化分析

抗细胞凋亡因子1(Defender against cell death 1,DAD1)是内质网内膜上糖基转移酶复合体亚基之一。本文通过RT-PCR及RACE技术从虹鳟脑组织中克隆到DAD1基因cDNA全长序列(GenBank登录号:FJ849061)。该基因包括88 bp 5'-UTR、292 bp 3'-UTR以及342 bp开放阅读框(ORF)。该基因编码113个氨基酸,存在三个明显跨膜区,无信号肽序列。通过蛋白序列比对显示虹鳟DAD1蛋白序列与大西洋鲑、白斑狗鱼、斑马鱼以及裸盖鱼同源性均在90%以上。系统发育分析显示DAD1蛋白主要聚成两个群:脊椎动物DAD1群与无脊椎动物DAD1群。虹鳟DAD1与大西洋鲑DAD1蛋白亲源关系最近。

凋亡相关基因Bcl-2、Bag-1在宫颈上皮病变中的表达及意义

目的:探讨Bcl-2蛋白和Bag-1蛋白在宫颈癌发生、发展中的表达变化以及两者的关系。方法:采用免疫组织化学SP法,分别对39例宫颈上皮内瘤变CINⅠ/Ⅱ、25例CINⅢ(原位癌4例)及36例浸润性宫颈鳞癌(ISCC)组织中的Bcl-2和Bag-1蛋白进行检测,并以20例子宫肌瘤经手术切除的正常宫颈鳞状上皮作对照进行分析。结果:Bcl-2蛋白在正常宫颈组织、CINⅠ/Ⅱ、CINⅢ和宫颈癌组织中表达率分别为10.00%、43.57%、76.00%、66.67%,其表达在CIN和宫颈癌组织间差异无统计学意义(P>0.05),在其余各组之间差异有统计学意义(P<0.05)。Bag-1在正常宫颈组织、CINⅠ/Ⅱ、CINⅢ和宫颈癌组织中的表达率分15.00%、48.72%、72.00%、83.33%,其表达在正常组织与CIN和宫颈癌之间差异有统计学意义(P<0.01),在上皮内瘤变与宫颈癌中差异也具有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌中Bcl-2与Bag-1蛋白表达同时增加。结论:宫颈鳞状上皮不典型增生和鳞状上皮癌中均有Bcl-2、Bag-1过表达,表明它们在宫颈癌的发生、发展中均起重要作用。Bcl-2与Bag-1在肿瘤早期抗凋亡作用相互增强,呈正相关关系。

B淋巴细胞瘤-2结合抗凋亡基因1在人脑胶质瘤中的表达及临床意义

目的探讨B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)结合抗凋亡基因1(Bcl-2-associated athanogene 1,BAG-1)在人脑胶质瘤中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化SP二步法,检测2009年9月至2021年9月年安徽医科大学第二附属医院的212例人脑胶质瘤标本以及10例正常脑组织标本中的BAG-1的表达,分析其与临床病理及预后的关系。结果检测到BAG-1总体的阳性表达率为61.3%,BAG-1在低级别胶质瘤(Ⅰ~Ⅱ级)和高级别胶质瘤(Ⅲ~Ⅳ级)阳性表达率分别为48.4%和71.1%(P=0.001)。BAG-1表达阴性和阳性的病人的中位生存时间分别为60个月和17个月(P<0.001)。BAG-1表达阴性和阳性的高级别胶质瘤病人中位生存时间分别为31个月和11个月(P<0.001)。BAG-1阴性和阳性表达的病人无进展中位生存时间分别为26个月和8个月(P=0.001)。结论BAG-1在人脑胶质瘤中高表达,与肿瘤的病理分级呈正相关,与病人生存时间呈负相关,BAG-1可能成为预测胶质瘤预后及化疗疗效的重要分子标志物。

SOCS1基因过表达对猪乳腺上皮细胞增殖和凋亡的影响

【目的】明确细胞因子信号转导抑制因子1基因(SOCS1)过表达对乳腺发育关键信号通路(JAK/STAT)相关基因表达的影响,为揭示SOCS1基因调节猪乳腺上皮细胞增殖和凋亡的作用机制提供参考依据。【方法】构建SOCS1基因过表达载体pcDNA3.1-SOCS1和阴性对照载体pcDNA3.1-NC,分别转染猪乳腺上皮细胞,然后通过CCK-8检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR检测转染后JAK/STAT信号通路相关基因的表达变化。【结果】以过表达载体pcDNA3.1-SOCS1和阴性对照载体pcDNA3.1-NC分别转染猪乳腺上皮细胞,过表达载体pcDNA3.1-SOCS1转染组的SOCS1基因相对表达量极显著高于阴性对照载体pcDNA3.1-NC转染组(P<0.01,下同);转染48和72 h后,过表达载体pcDNA3.1-SOCS1转染组猪乳腺上皮细胞的OD值极显著低于阴性对照载体pcDNA3.1-NC转染组,说明过表达载体pcDNA3.1-SOCS1能有效抑制猪乳腺上皮细胞的增殖能力;过表达载体pcDNA3.1-SOCS1转染组的细胞凋亡率[(36.15±0.92)%]显著高于阴性对照载体pcDNA3.1-NC转染组[(30.55±0.35)%](P<0.05,下同),且过表达载体pcDNA3.1-SOCS1转染组中的G1期细胞比例极显著降低,而S期和G2期细胞比例显著升高。与阴性对照载体pcDNA3.1-NC转染组相比,除JAK2、STAT3和TYK2基因外,过表达载体pcDNA3.1-SOCS1转染组中的SOCS2、SOCS3、JAK1、STAT2、STAT5A、IL-6、PRLR、MCL1和PIAS3等9个JAK/STAT信号通路相关基因的相对表达量均极显著升高。【结论】SOCS1基因过表达可抑制猪乳腺上皮细胞增殖及促进细胞凋亡,并影响JAK/STAT信号通路相关基因的表达变化,从而在猪的乳腺发生发育调控机制中发挥重要作用。

EB病毒感染及抗凋亡基因Bc1-2与鼻咽癌关系的研究

作者应用免疫组化ＳＰ法观察了４６例鼻咽癌组织中抗凋亡基因Ｂｃ１－２和ＥＢ病毒潜在膜蛋白（ＬＭＰ－１）的表达。结果显示ＬＭＰ－１的表达率为５２．２％，其中以低分化癌的阳性率较高（８２．６％）；Ｂｃ１－２蛋白在鼻咽癌中出现异常高表达（阳性率为８２．６％），Ｂｃ１－２的表达率与鼻咽癌组织学分级无显著性差异（Ｐ＞０．０５）；Ｂｃ１－２表达与ＬＭＰ－１的阳性率无明显相关（Ｐ＞０．０５）。表明Ｂｃ１－２异常表达和ＥＢ病毒感染均可能与鼻咽癌发生有关。

E1A激活基因阻遏子蛋白对抗人脐静脉血管内皮细胞的凋亡

背景:前期研究显示,E1A激活基因阻遏子能够通过抑制动脉平滑肌细胞的凋亡对抗动脉粥样硬化。目的:进一步阐明E1A激活基因阻遏子在内皮细胞凋亡中的作用。方法:通过去血清方法诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞凋亡,然后进行TUNEL和caspase-3的活性检测。结果与结论:伴随着E1A激活基因阻遏子的表达下降,内皮细胞的凋亡增多。功能获得和功能缺失分析显示:E1A激活基因阻遏子过表达后能够明显抑制内皮细胞的凋亡,而E1A激活基因阻遏子表达减少可以明显增加诱导内皮细胞的凋亡。进一步应用Western blot分析显示:E1A激活基因阻遏子对于内皮细胞凋亡的保护作用主要通过激活PI3K/AKT信号通路介导。提示E1A激活基因阻遏子对抗去血清诱导的内皮细胞凋亡中具有重要的作用。并且,E1A激活基因阻遏子抑制的内皮细胞凋亡可能通过PI3K/AKT信号转导通路。

转染血红素氧化酶-1基因大鼠肝细胞系BRL体外抗凋亡作用

目的:探讨血红素氧化酶1(hemeoxygenase,HO1)基因转染对大鼠肝细胞系BRL的抗凋亡作用。方法:体外培养的BRL细胞转染HO1基因后(对照组采用转染空载体pcDNA3的BRL细胞),应用RTPCR检测肝细胞系BRL中HO1基因的表达。用肿瘤坏死因子α(TNFα)刺激细胞,采用流式细胞仪(FACS)进行细胞计数,TUNEL染色等方法检测细胞的凋亡情况。结果:转染的肝细胞系BRL中均有HO1mRNA表达。转染HO1的BRL细胞经TNFα诱导凋亡后,细胞凋亡率(55.42%±3.12%)明显低于同等刺激下转染pcDNA3的BRL细胞(81.29%±3.08%)(P<0.05)。结论:BRL肝细胞系中HO1表现出较强的抗凋亡能力,为以细胞凋亡为主要病理表现的肝脏缺血再灌注损伤的临床治疗提供了新思路。

重组GSTA3蛋白对福美双诱导的肉鸡TD中抗凋亡基因BAG-3表达的影响

【目的】肉鸡胫骨软骨发育不良(TD)是肉鸡常见的一种骨骼性疾病,研究重组GSTA3蛋白对福美双诱导的TD肉鸡软骨细胞中抗凋亡基因BAG-3表达的影响,为治疗TD提供新的思路和方法。【方法】将120羽1周龄肉雏鸡随机分为6组(编号为A、B、C、D、E、F组)。A、B、C组为基础日粮对照组,D、E、F组为添加福美双日粮诱导TD组。试验饲喂福美双2 d诱发TD,在添加福美双第1、3、5、7天,腿部肌肉注射重组鸡GSTA3蛋白和磷酸盐缓冲液,A组与D组注射(100μg·kg^-1)磷酸盐缓冲液;B组与E组注射低剂量(100μg·kg^-1)GSTA3;C组与F组注射高剂量(200μg·kg^-1)GSTA3。试验历时23 d。添加福美双后1、2、4、6、10和15 d采集胫骨生长板。通过Real-time qPCR检测BAG-3基因的mRNA水平,利用免疫组化来检测BAG-3蛋白表达水平。【结果】Real-time qPCR结果显示,TD损伤修复期内,相比较于基础日粮对照组,福美双对照组肉鸡胫骨生长板中BAG-3 mRNA的表达水平基本都显著上调(P<0.05);相比较于福美双对照组,E和F组在第2、4、10、15天都有显著差异,且在第10和15天显著低于福美双对照组(P<0.05),表明与D组相比恢复较快。免疫组化结果表明BAG-3蛋白在肉鸡胫骨软骨细胞的增殖区和前肥大区无表达,只在肥大区细胞质中表达;福美双组与空白对照组相比,BAG-3蛋白表达增加;福美双高低剂量组与未注射蛋白的福美双组相比,重组GSTA3增加了肥大区的蛋白表达水平(第10和15天)。【结论】在福美双诱导肉鸡发生TD的过程中,GSTA3重组蛋白能够通过调控BAG-3表达参与凋亡途径,抑制细胞凋亡。在TD损伤修复期,注射GSTA3后使抗凋亡基因BAG-3蛋白表达增强,从而可参与细胞凋亡来缓解TD损伤,使得肉鸡TD生长板功能较快地恢复正常。