Sr^(2+)诱导尖吻蝮蛇毒中抗凝血因子I的结构稳定性及重新折叠(英文)

尖吻蝮蛇毒抗凝血因子I(ACFI)是活化凝血因子X(FXa)结合蛋白,具有显著的抗凝血活性.用荧光光谱研究了Sr2+诱导ACFI的结构稳定性及重新折叠.结果表明,脱钙ACFI(apo-ACFI)可结合两个Sr2+.ACFI与FXa的结合反应不是绝对依赖于Ca2+,Sr2+也可以诱导ACFI与FXa的结合反应.盐酸胍诱导的Sr2+重组ACFI(Sr2+-ACFI)去折叠过程是一个三态过程,有一个稳定的中间态.像Ca2+一样,Sr2+不仅能显著增加ACFI的结构稳定性,而且在不改变变性剂浓度条件下,能诱导去折叠的脱钙ACFI重新折叠成Sr2+-ACFI的中间态.Sr2+诱导apo-ACFI重新折叠过程包含快慢两步反应,Sr2+取代Ca2+只降低快折叠反应速度,而不影响慢折叠反应速度.这说明,金属离子影响快折叠过程,而慢折叠过程只决定于蛋白质本身性质.

乙型肝炎病毒感染相关性肝病患者血清凝血因子Ⅷ及抗凝血因子水平变化及临床意义

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)感染相关性肝病患者血清凝血因子Ⅷ、抗凝血因子活性变化及其临床意义。方法:选取2020年9月至2022年10月郑州市第三人民医院收治的113例HBV感染相关性肝病患者作为研究对象,其中慢性乙型肝炎组42例、肝硬化代偿组26例、肝硬化失代偿组27例、肝衰竭组18例。对4组凝血因子Ⅷ、血小板计数(PLT)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、血管性假血友病因子抗原(vWF:Ag)和抗凝血因子[抗凝血酶(AT)、游离蛋白S(FPS)、蛋白C(PC)]活性进行检测并比较,分析HBV感染相关性肝病患者抗凝血因子与凝血因子Ⅷ和PLT、PT、APTT水平的相关性,并用Logistic回归模型分析影响HBV感染相关性肝病患者发生肝衰竭的独立危险因素,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析诊断效能。结果:4组凝血因子Ⅷ、PLT、PT、APTT、vWF:Ag、AT、FPS、PC水平比较差异有统计学意义(P<0.01)。与慢性乙型肝炎组相比较,肝硬化代偿组、肝硬化失代偿组、肝衰竭组PT、APTT、vWF:Ag、凝血因子Ⅷ水平较高,PLT、AT、FPS、PC水平较低(P<0.05);进入肝硬化代偿期后,随看病情的加重,凝血因子Ⅷ水平、PT、APTT、vWF:Ag逐渐升高,抗凝血因子活性继续下降(P<0.05)。Pearson相关分析显示,AT、FPS、PC与凝血因子Ⅷ、PLT均呈正相关(P<0.05),与PT、APTT、vWF:Ag均呈负相关(P<0.05);Logistic回归模型多因素分析显示,凝血因子Ⅷ(P=0.029,OR=1.061)水平、AT(P=0.001,OR=1.059)、FPS(P=0.014,OR=1.066)、PC(P=0.001,OR=1.077)活性是HBV感染相关性肝病患者发生肝衰竭的独立影响因素;ROC曲线分析显示,凝血因子Ⅷ、AT、FPS、PC联合检测诊断肝衰竭的曲线下面积(AUC)值最高,为0.966,且灵敏度、特异度分别为94.44%、88.88%。结论:HBV感染相关性肝病不同病变阶段患者凝血因子Ⅷ水平和AT、FPS、PC等抗凝血因子活性均有所变化。随着病情的加重,凝血因子Ⅷ水平越高,AT、FPS、PC活性越低。同时采用凝血因子Ⅷ、AT、FPS、PC联合检测的方式在评估HBV感染相关性肝病患者发生肝衰竭方面具有较高的诊断效能。

尖吻蝮蛇毒抗凝血因子Ⅰ的稀土离子荧光探针研究

稀土离子 (Nd3+ ,Sm3+ ,Eu3+ ,Gd3+ ,Tb3+ )对抗凝血因子 (ACFⅠ )的内源荧光有不同程度的淬灭作用。稀土离子与ACFⅠ荧光滴定的结果表明 ,ACFⅠ分子中有两个稀土离子结合位点 ,稀土离子和钙离子在ACFⅠ分子中两个结合位点是共同的竞争结合位点。每个稀土离子与ACFⅠ的结合常数K1 和K2 相接近 ,说明两个结合位点的结构可能基本一致。不同的稀土离子与ACFⅠ之间有相近的结合常数K1或K2 ,表明ACFⅠ分子中的两个结合位点在结构上都有较大的柔性 。

稀土及过渡金属离子对蛇毒内抗凝血因子荧光光谱的影响

研究了稀土及过渡金属离子对蛇毒内抗凝血因子(ACF,anticoagulation factor) 内源荧光光谱的影响,并根据荧光光谱的变化推测ACF与稀土及过渡金属高子作用后发生的构型变化。

皖南尖吻蝮蛇蛇毒内抗凝血因子（ACF）的二级结构和金属离子对其影响的CD谱研究

利用ＣＤ谱对皖南尖吻蝮蛇蛇毒内抗凝血因子（ＡＣＦ）的二级结构，即α－螺旋、β－折叠和无规则卷曲进行了测定，利用ＣｈｅｎａｎｄＹａｎｇ的方法计算出了它们在ＡＣＦ分子内的百分比．溶液的ｐＨ值对ＡＣＦ的二级结构影响不大，但当ｐＨ位于５和６时，二级结构稍稍出现了异常．这可能是由于氢离子电离引起的电荷变化带来的效应．ＡＣＦ的脱钙破坏了分子内的配位结构，而使α－螺旋的百分比大大降低．尽管三价镧系离子能取代ＡＣＦ中的钙离子，但是没有给ＡＣＦ的二级结构带来较大的影响．

尖吻蝮蛇毒抗凝血因子(ACF)含量和钙离子含量的定量测定及钙离子结合位点的初步研究

由紫外光谱法测定蛋白质浓度,用ICP测定Ca含量,从而确定一个ACF分子中含一个钙离子.ACF中分子中除一个高亲和性钙结合位点外,至少还有一个低亲和性钙结合位点,只有当过量钙离子存在时,才可能在低亲和性钙结合位点上进一步结合钙离子.Tb^(3+)具有比Ca^(2+)离子更强的键合ACF能力,能定量结合在ACF中的两个位点上,且能全部取代ACF中Ca^(2+).文中提及的金属离子对ACF的抗凝血活性没有显著的影响.

与平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的抗凝血因子、粘附分子

目的 探讨平滑肌细胞对内皮细胞功能的影响 ,为内皮细胞种植的组织工程学提供理论基础。 方法 模拟血管壁的内层结构及内皮细胞与平滑肌细胞间的相互影响途径 ,建立内皮细胞与平滑肌细胞接触生长的联合培养模型 ,用免疫细胞化学、放射免疫学技术和图像分析等方法研究内皮细胞 v WF、PGI2 、CD2 9的合成、分泌及表达。 结果 联合培养的内皮细胞的 因子相关抗原 (v WF)的合成减弱 ,前列腺环素的分泌增加 ,整合素 β1 亚族的表达增强。 结论 联合培养内皮细胞的细胞因子的合成。

埃及伊蚊抗凝血因子Xa基因片段的克隆测序

目的 :探讨我国登革热的重要媒介蚊种埃及伊蚊唾液中的抗凝血因子Xa基因。方法 :用兼并引物PCR方法从我国的埃及伊蚊基因组DNA扩增抗凝血因子Xa基因片段 ,克隆入测序T载体进行测序。结果 :扩增出抗凝血因子Xa基因片段长度约 30 0bp ,测序后发现与报道的埃及伊蚊的cDNA基因相应序列多了一段 6 3bp内含子 ,并有几个碱基和氨基酸序列变化。结论 :我国海南岛的埃及伊蚊抗凝血因子Xa基因有一定差异 ,可能对应的是一个新的基因型。

尖吻蝮蛇毒抗凝血因子Ⅱ与活化凝血因子Ⅹ的结合性质

皖南尖吻蝮蛇毒抗凝血因子Ⅱ (ACFⅡ )与活化凝血因子Ⅹ (FⅩa)在钙离子作用下形成了 1∶1的复合物 ,从而延长凝血时间 .这个复合反应是依赖于钙离子的 ,ACFⅡ在没有钙离子存在条件下不能与FⅩa形成复合物 .ACFⅡ是凝血因子Ⅸ或凝血因子Ⅹ结合蛋白家族中一个新发现的成员 ,其相对分子质量为 2 946 8 1.ACFⅡ分子中含有 2 5 1个氨基酸残基 ,其氨基酸组成与这一家族中其他成员十分相似 .ACFⅡ在抗凝血反应中存在一临界浓度 (12nmol/L) ,只有在高于其临界浓度时 。

体积排阻色谱法测定低分子量肝素抗凝血因子Xa的活性

发展了一种基于体积排阻色谱测定低分子量肝素(LMWH)抗凝血活性的方法。利用肝素与抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)结合后可增强ATⅢ对凝血因子Xa(FXa)抑制作用的原理,通过测定加入LMWH后FXa水解其生色底物产生对硝基苯胺(pNA)这一反应的抑制程度确定LMWH的活性。首先将含有一定浓度LMWH的缓冲溶液与ATⅢ溶液混合,然后依次加入FXa和生色底物,分别孵育一段时间。底物被FXa水解,产生游离的pNA。体积排阻色谱可将小分子产物pNA与其他大分子分离开,因而可以在pNA的最大吸收波长下得到高灵敏度的测定,并且不再受其他成分的干扰。该方法重复性好,灵敏度高,极大地减少了样品的消耗量,降低了成本,并且还可进行各种复杂样品(如血浆)中LMWH抗FXa活性的监测。

尖吻蝮蛇毒中一种新抗凝血因子的纯化及特性研究

应用阴离子交换色谱和凝胶过滤色谱,从尖吻蝮蛇毒中分离出一个新的抗凝血因子。经Superdex75HR10/30预装柱检测,纯度达99.9%。SDS-PAGE检测为单一条带,相对分子量52.2k。该因子有显著的抗凝血活性,延长白陶土部分激血活酶时间的临界浓度为0.2mg/ml,无纤溶活性、磷脂酶A2活性和出血活性。

尖吻蝮蛇毒抗凝血因子I与活化凝血因子X的结合特征

皖南尖吻蝮蛇毒抗凝血因子Ｉ在抗凝血反应中存在一临界浓度（１２ ｎｍｏｌ／Ｌ），只有在高于其临界浓度时，才表现出显著的抗凝血活性．用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法，发现抗凝血因子Ｉ与活化凝血因子Ｘ在钙离子作用下形成１：１的复合物，从而延长凝血时间．天然抗凝血因子Ｉ和脱钙抗凝血因子Ｉ没有钙离子存在条件下均不能与活化凝血因子Ｘ形成复合物．锶离子也可以使二者结合，而钡离子和铽离子均不能使两者结合．抗凝血因子Ｉ是凝血因子ＩＸ或凝血因子Ｘ结合蛋白家族中一个新发现的成员，其分子量为 ２９６０３．６ _ｕ，分子中两条肽链分子量十分接近，约为 １４．７ｋｕ．抗凝血因子Ｉ是由２ ５１个氨基酸残基组成的，其氨基酸组成与这一家族中其他成员十分相似．

钙离子及酸度对蛇毒抗凝血因子溶液构象的影响

用荧光光谱方法研究了Ｃａ２＋离子对抗凝血因子（ＡＣＦ）溶液构象的影响，证实了Ｃａ２＋离子不仅能与ＡＣＦ可逆结合，还能维持ＡＣＦ的结构．脱去Ｃａ２＋离子后的ＡＣＦ中约有４６％的Ｔｒｐ残基相对暴露在外．在一定的酸度范围内，酸度对ＡＣＦ的结构影响不大．

静脉血栓栓塞患者凝血与抗凝血因子活性或含量的测定

目的观察静脉血栓栓塞患者血浆凝血因子和抗凝血因子活性或含量变化。方法95例静脉血栓栓塞患者和95名正常对照,用定量乳胶凝集试验行D-二聚体含量检测;一期法检测血浆凝血因子Ⅱ活性(FⅡ∶C)、凝血因子Ⅴ活性(FⅤ∶C)、凝血因子Ⅷ活性(FⅧ∶C)和凝血因子Ⅸ活性(FⅨ∶C);发色法底物检测蛋白C活性(PC∶A)和抗凝血酶活性(AT∶A)。结果与对照组相比,静脉血栓栓塞组血浆纤维蛋白原(Fg)含量、D-二聚体含量、FⅡ∶C、FⅤ∶C和FⅧ∶C水平均明显增高,FⅨ∶C与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);而PC∶A和AT∶A水平在静脉血栓栓塞组虽有降低,但与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论凝血因子联合作用在静脉血栓栓塞发病中起主要作用。

置MA-IUD妇女经血纤溶抗凝血及凝血因子的变化

本文以Tcu220c-IUD为对照,测定置MA-IUD妇女月经总量;经血纤溶系统包括组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)活性、纤溶酶原(PLG)含量和纤溶活性(Fa);经血抗凝血物质包括抗凝血酶-Ⅲ(AT-Ⅲ)活性、蛋白 C(PC)抗原含量和 PC 活性以及经血凝血因子包括因子Ⅶ相关抗原(ⅧR:Ag)和纤维蛋白原(Fg)含量。实验表明 MA-IUD 能使妇女月经量明显减少,其与宫腔局部纤溶活性和抗凝血系统活性下降有关。宫腔局部凝血因子无明显改变,IUD 之孕激素的局部释放对肝脏无影响。

尖吻蝮蛇毒抗凝血因子Ⅱ的稀土离子荧光探针研究

尖吻蝮蛇毒抗凝血因子 ( ACF )分子中有两个钙离子结合位点 ,钙离子对 ACF 的内源荧光有增强作用 ,稀土离子 ( Nd3 +,Sm3 +,Eu3 +,Gd3 +和 Tb3 +)能取代 ACF 分子中的钙离子 ,并对 ACF 的内源荧光有不同程度的猝灭作用 ,其中 Tb3 +接受 ACF 分子中 Trp残基传递的能量后 ,特征荧光增强 .稀土离子与 ACF 荧光滴定表明 ,ACF 分子中有两个稀土离子结合位点 ,稀土离子和钙离子在 ACF 分子中两个结合部位是共同的竞争结合部位 .ACF 与不同稀土离子之间有相近的表观结合常数 K1 或 K2 .Tb3 +与 RE3 +( RE=Nd,Sm,Eu或 Gd)间线性自由能关系表明 ,稀土离子与 ACF 结合时 ,没有明显的空间效应 .ACF 分子中的两个结合位点在结构上都有较大的柔性 ,这种结构柔性为钙离子在 ACF 与活化凝血因子

新生儿抗凝血因子的测定及其临床意义

目的了解正常新生儿生理性抗凝血因子的水平,为临床和研究工作提供参考数据。方法抽取正常足月顺产新生儿脐血及健康成人外周静脉血,分别测定抗凝血酶(antithrombin,AT)、蛋白C(protein C,PC)、组织因子途径抑制物(tissue factor pathway inhibitor,TFPI)的活性和含量,α_2巨球蛋白(α_2-Macroglobulin,α_2-MG)的含量,并与成人进行比较。结果新生儿脐血中AT、PC、TFPI的含量和活性均显著低于正常成人水平(P＜0．05)。α_2-MG的水平与正常成人相比差异无显著性(P＞0．05)。结论新生儿生理性抗凝血因子处于一个较低的水平,α_2-MG正常可能是一种代偿机制。在新生儿出血性疾病的诊断及抗凝剂的应用中应引起注意。

成都地区汉族群体抗凝血因子Ⅲ的遗传多态性

用等电聚焦免疫固定技术，调查成都地区225名无血缘关系汉族男女青年血浆抗凝血因子Ⅲ（ATⅢ）表现型的分布，发现B、AB两种普遍型和一种BV变异型；推算出ATⅢ的基因频率，即ATⅢ*A=0．1022，ATⅢ*B=0．8956，ATⅢ*V=0．0022。该遗传标记在中国人群中的频率分布系国内首次报道。