lncRNA ANCR调节骨质疏松大鼠脂肪源性干细胞分化成骨细胞及对Wnt信号通路的作用机制

目的探讨lncRNA ANCR调节骨质疏松(osteoporosis,OP)大鼠脂肪源性干细胞分化成骨细胞及对Wnt信号通路的作用机制。方法将lncRNA ANCR siRNA慢病毒载体及慢病毒空载体分别转染至脂肪源性干细胞,分为siRNA组、空载体组、干细胞组。分别通过碱性磷酸酶染色观察ALP染色效果、Western blot法检测Wnt/β-catenin蛋白水平、茜素红染色实验检测成骨染色效果、免疫组化法检测Wnt/β-catenin信号阳性表达的差异性。结果与空载体组、干细胞组相比较,siRNA组细胞中ALP染色显著加深(P均<0.05),成骨染色更为显著(P均<0.05);与空载体组,干细胞组相比较,siRNA组细胞Wnt/β-catenin蛋白表达显著上升(P均<0.05),Wnt/β-catenin阳性数显著升高(P均<0.05);空载体组与干细胞组比较,细胞中Wnt/β-catenin蛋白、ALP表达水平、Wnt/β-catenin阳性数相近,无显著差异(P>0.05)。结论lncRNA ANCR的表达水平与骨质疏松大鼠体内脂肪源性干细胞的分化存在显著相关性,下调lncRNA ANCR能够促进脂肪源性干细胞向成骨细胞分化,其作用机制可能与调控Wnt/β-catenin的表达有关。

急性髓系白血病患者血清lncRNA DANCR、lncRNA SNHG7表达及与病理特征、预后的关系

目的探究急性髓系白血病(AML)患者血清长链非编码RNA抗分化非编码RNA(lncRNA DANCR)、长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因7(lncRNA SNHG7)表达及与病理特征、预后的关系。方法选取2017年10月至2018年10月期间在本院就诊后出院的120例AML患者记为AML组,另选取120例在本院体检的志愿者记为对照组。观察并记录所有参与者年龄、性别、AML形态学分型等临床指标。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测lncRNA DANCR、lncRNA SNHG7表达量;t检验方法分析lncRNA DANCR、lncRNA SNHG7表达差异及其与病理特征的关系;Pearson相关性分析二者表达水平的相关性;根据二者表达水平均值将AML患者分为lncRNA DANCR高表达组(n=65)和lncRNA DANCR低表达组(n=55)及lncRNA SNHG7高表达组(n=74)和lncRNA SNHG7低表达组(n=46);Kaplan-Meier法进行生存分析。结果AML患者lncRNA DANCR、lncRNA SNHG7水平显著高于对照组(P<0.05),且二者具有正相关性(r=0.414,P<0.001);LncRNA DANCR、lncRNA SNHG7表达水平与危险度分层、白细胞(WBC)、血红蛋白(Hb)及血小板计数(PLT)相关(P<0.05);高表达lncRNA DANCR、lncRNA SNHG7的AML患者5年生存率分别为30.77%、31.08%,低表达lncRNA DANCR、lncRNA SNHG7的AML患者5年生存率分别为50.91%、54.35%(P<0.05),低表达lncRNA DANCR、lncRNA SNHG7的AML患者生存率显著更高(P<0.05)。结论LncRNA DANCR、lncRNA SNHG7在AML患者血清中表达水平较高,两者具有的正相关性,可作为AML患者预后不良的重要指标。

LncRNA-ANCR介导的组蛋白甲基化酶EZH2对结直肠癌侵袭与转移的调控

目的探讨lnc RNA-ANCR与组蛋白甲基转移酶EZH2的表达及其与结直肠癌细胞侵袭与转移的关系。方法培养结肠癌SW620细胞系,转染ANCR-siRNA至细胞,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测ANCR和EZH2表达,Western blot检测EZH2蛋白表达水平,采用RNA pull-down和免疫共沉淀的方法检测ANCR与EZH2的相互作用关系,Transwell实验和划痕实验检测细胞侵袭和转移能力。结果结肠癌SW620细胞中ANCR和EZH2的表达均显著高于正常结肠上皮细胞(P<0.05)。转染ANCR-siRNA的SW620细胞中ANCR的表达较转染阴性对照质粒的SW620细胞显著降低,且EZH2的mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。RNA pull-down与免疫共沉淀的结果显示ANCR可与EZH2特异性结合。而Transwell实验和划痕实验显示转染ANCR-siRNA的SW620细胞的侵袭和迁移能力均显著低于转染阴性对照质粒的SW620细胞(P<0.05)。结论结直肠癌细胞中ANCR与EZH2的表达均上调,ANCR可能通过特异性结合EZH2调节结直肠癌细胞的侵袭和转移。

LncRNA ANCR调控miR-331表达影响胃癌细胞的生物学行为

背景与目的:胃癌是导致癌症死亡的第二大原因,是东亚、东欧及中南美洲部分地区最常见的胃肠道恶性肿瘤。该研究旨在探讨长链非编码RNA(long-chain noncoding RNA,lncRNA)抗分化非编码RNA(antidifferentiation noncodingRNA,ANCR)靶向miR-331调节胃癌细胞的增殖、侵袭行为及其机制。方法:河南省肿瘤医院2016年1月1日—2016年12月1日获得60例临床胃癌样本和20例对应的癌旁组织标本(距癌组织2 cm)。实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测ANCR在胃癌组织和不同胃癌细胞株中的表达情况;分析ANCR的表达和胃癌患者临床病理学特征之间的关系;平板克隆实验检测ANCR对胃癌细胞增殖能力的影响;Transwell侵袭实验检测ANCR对胃癌细胞侵袭能力的影响;裸鼠成瘤实验检测ANCR对胃癌细胞肿瘤异种移植的影响;双荧光素酶报告基因检测ANCR与miR-331之间的相互作用。结果:胃癌组织中ANCR的表达(4.18±0.28)高于正常组织(1.45±0.15),差异有统计学意义(t=12.36,P=0.045);与其他胃癌细胞株相比,BGC-823和MGC-803细胞中ANCR的表达水平较高(9.12±0.52),差异有统计学意义(P=0.019);抑制ANCR的表达可以减弱胃癌细胞的增殖能力(98.8±10.4)和侵袭能力(175.9±5.7);抑制ANCR的表达后胃癌细胞在裸鼠体内异种移植能力(223.4±13.4)弱于NC组(115.6±10.7),差异有统计学意义(t=13.28,P=0.014);双荧光素酶实验证实ANCR可以直接调控miR-331的表达及荧光活性。结论:ANCR可以靶向调节miR-331的表达影响胃癌细胞的增殖、侵袭行为,影响胃癌细胞在裸鼠体内的生长情况。

胃癌患者血清外泌体中DANCR表达及其临床意义

目的检测胃癌患者血清外泌体(exosome)中抗分化非编码RNA(DANCR)的表达水平并分析其临床应用价值。方法采用实时荧光定量RT-PCR检测胃癌细胞培养上清和胃癌患者血清exosome中DANCR表达水平,分析其与临床病理资料的相关性,绘制ROC曲线评价其诊断效能。结果 DANCR在人胃癌细胞系HGC-27中表达水平(4.43±0.37)明显高于胃黏膜上皮细胞(1.01±0.01),差异有统计学意义(P<0.05)。HGC-27细胞培养上清exosome中DANCR表达水平(3.06±0.14)明显高于GES-1细胞(1.01±0.20),差异有统计学意义(P<0.05)。DANCR在胃癌患者血清exosome中的平均含量[5.060(1.380,22.785)]较胃良性疾病患者[0.535(0.340,1.380)]和体检健康者[1.200(0.605,1.655)]明显升高(Z分别为-3.409,-4.229,P均<0.01),且与肿瘤大小、TNM分期以及淋巴结转移相关。胃良性疾病患者与体检健康者相比,血清exosome中DANCR含量差异无统计学意义(Z=-1.308,P>0.05)。胃癌患者血清exosome中DANCR的ROC曲线下面积(AUCROC)为0.777,95%可信区间(CI)为0.678~0.876,cut-off值2.50,敏感性为68.6%,特异性为84.4%。结论胃癌患者血清exosome中DANCR表达水平升高,有望成为胃癌诊断的新指标。

lncRNA-DANCR对人脂肪间充质干细胞成脂和成骨分化能力的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)-抗分化非编码RNA(DANCR)对人脂肪来源间充质干细胞(hASCs)成脂、成骨分化能力的影响。方法:收集中国医学科学院整形外科医院的3例女性患者腹部脂肪抽吸术后废弃的脂肪组织(年龄25~35岁),分离培养hASCs。构建DANCR敲减与过表达质粒,利用慢病毒感染的方式在hASCs中敲减或过表达DANCR,将实验分为5组:敲减DANCR的实验组(shDANCR1、shDANCR2)、敲减对照组(shScrmble)、过表达DANCR的实验组(pCDH-DANCR)、过表达对照组(pCDH-GFP),每组样本量为3例。RT-PCR检测上述5组细胞中DANCR的表达量。将上述5组慢病毒感染成功后的hASCs进行成脂或成骨诱导,成脂诱导7 d进行油红O染色鉴定成脂效果,成骨诱导14 d进行茜素红染色鉴定成骨效果,并应用RT-PCR检测成脂分化关键转录因子PPAR-γ、C/EBPα、FABP4、Adiponectin和脂类合成酶基因LPL、GPDH、FASN、ACC1和HSL,以及成骨分化关键转录因子RUNX2、OCN、OPN、BMP2及ALP的表达。实验数据均采用均值±标准差表示,2组间数据采用t检验(Student’s t-test)进行比较,P<0.05为差异具有统计学意义。结果:设计的2条shRNA敲减序列均可使hASCs中DANCR的表达显著减少,与对照组比较,DANCR表达量分别下降了86%和74%,差异具有统计学意义(t=84.07、P<0.001,t=75.52、P<0.001)。构建的DANCR过表达质粒可以有效增加hASCs中DANCR表达量,与对照组相比,增加了(15.067±1.986)倍,差异具有统计学意义(t=12.24,P<0.001)。成脂、成骨诱导实验显示,敲减DANCR会引起hASCs成脂诱导后脂滴数量显著多于对照组,2组敲减组与对照组相比,差异均具有统计学意义(t=17.24、P<0.001,t=30.68、P<0.001),成脂分化关键转录因子PPAR-γ、C/EBPα、FABP4、Adiponectin以及脂类合成酶的关键基因LPL、GPDH、FASN、ACC1、HSL的表达都显著高于对照组;而过表达DANCR后会抑制脂滴的形成及上述基因的表达。同样在成骨诱导中,敲减DANCR后hASCs成骨诱导14 d钙结节形成量显著多于对照组,差异具有统计学意义(t=15.25、P<0.001,t=24.61,P<0.001),成骨分化关键基因RUNX2、OCN、OPN、BMP2及ALP的表达也显著高于对照组,而过表达DANCR后成骨诱导14 d钙结节形成量较对照组显著减少(t=40.81、P<0.001),成骨分化关键转录因子表达水平也会降低。结论:lncRNA-DANCR能够抑制hASCs的成脂、成骨分化,DANCR表达量的变化影响hASCs的成脂、成骨分化效果,可以作为调控hASCs成脂、成骨定向分化的潜在靶点。