黄鱼鱼鳔肽分离及其诱导前列腺癌DU-145细胞凋亡的机制

为探讨黄鱼鱼鳔肽诱导前列腺癌DU-145细胞凋亡的作用机制,从黄鱼鱼鳔酶解产物中分离纯化得到鱼鳔肽,鉴定其氨基酸序列。采用CCK-8法检测鱼鳔肽作用后DU-145细胞抑制率的变化;AO/EB法检测DU-145细胞凋亡情况;流式细胞术检测DU-145细胞凋亡率和周期;免疫印记法检测DU-145细胞凋亡蛋白表达。结果表明,分离得到的鱼鳔肽YCSB-1c中包含Ser-Pro-Ser-Pro和Gly-Pro-Ala-Arg两条寡肽。与空白组相比,YCSB-1c组中凋亡细胞明显增多,且呈质量浓度依赖性;流式细胞仪检测得出YCSB-1c组中存活细胞明显减少,晚期凋亡细胞明显增多。YCSB-1c将DU-145细胞的细胞周期阻滞在G0/G1期,上调Bax、Caspase-3及Caspase-9蛋白表达,诱导DU-145细胞凋亡。YCSB-1c能有效诱导DU-145细胞凋亡,其作用机制与细胞周期停滞和线粒体介导的凋亡途径有关。

抗前列腺癌多肽的可溶性表达及纯化

目的:探讨抗前列腺癌多肽的可溶性融合蛋白的表达条件,并获得其纯化蛋白,为后续的体内、外活性实验奠定基础。方法:采用Phamacia公司商品化的GST融合表达载体pGEX-4T-2,向细菌培养基中加入IPTG后,诱导Ptac启动子下游的外源目的基因表达。通过对不同培养基、不同温度、不同诱导时间及不同诱导剂浓度下可溶性目的蛋白的表达量进行探索,筛选出表达量最高的组合方式,并通过GST亲合层析柱GSTrap FF对获得的可溶性蛋白进行纯化。结果:成功进行了GST-APP216融合蛋白的可溶性表达,在IPTG浓度为0.2 mmol/L,27℃条件下,诱导表达4.5h时表达量最高。经凝胶成像系统进行密度扫描显示,该可溶性蛋白的表达量约占上清总蛋白量的36.2%。并获得了纯化的APP216蛋白,经紫外分光光度计测定标准品,绘制标准曲线。测定260/280nm处吸光度的比值,得到纯化蛋白的浓度为323.1μg/ml。结论:APP216纯化蛋白的获得,为进一步检测抗前列腺癌多肽体外、体内的肿瘤杀伤作用奠定了坚实的实验基础。