乙型脑炎病毒E蛋白抗原优势区域的鉴定

流行性乙型脑炎（Japanese Encephalitis，JE）是一种人与动物共患的虫媒病毒性疾病，严重危害着人畜的健康。E蛋白是乙型脑炎病毒（Japanese Encephalitis Virus，JEV）的主要结构蛋白，在病毒的吸附、融合、血凝、细胞趋向性、病毒毒力和诱导保护性免疫反应中起重要作用。为了确定该蛋白的抗原优势区域，本研究设计了3对引物，将E蛋白分成3个大段，分别是EF1（1～291aa）、EF2（292～402aa）和EF3（403-500aa），又将EF1分成4个相互重叠的小片段，分别是EF1-1（1～88aa）、EF1—2（68～155aa）、EF1—3（129～222aa）和EF1—4（202～291aa），将以上基因片段分别克隆到原核表达载体进行GST融合表达。SDS-PAGE电泳鉴定各融合蛋白均获得表达，各表达产物以包涵体的形式存在。通过Western blot分析表明融合蛋白GST-EF1、GST—EF2、GST—EF1—1、GST-EF1-2、GST—EF1—3和GST—EF1～4均能被阳性血清识别。通过ELISA鉴定，GST-EF2反应性最强，GST-EF1反应性比GST-EF2稍弱，而GST-EF3反应性最弱，GST-EF1-1、GST-EF1—2、GST-EF1—3和GST—EF1—4片段融合蛋白反应性与GST—EF1相似。由此本研究鉴定出1-402aa是E蛋白的抗原优势区域，在此区域内包括了12个Cys的保守区及域Ⅰ、域Ⅱ和域Ⅲ3个主要抗原域。E蛋白抗原优势区域的鉴定，为E蛋白抗原表位的鉴定以及针对于E蛋白诊断试剂的开发奠定了基础。