抗原修复时间对不同克隆号P40免疫组化染色结果的影响

目的:探讨抗原修复时间对不同克隆号的P40免疫组化染色结果的影响。方法:选择本科室P40免疫组化染色异常的胸水细胞沉渣包埋蜡块,3μm连续切片4张,按抗原修复时间不同分为两组(A组抗原修复40 min,B组抗原修复80 min),每组两张切片分别滴加C3B4和MXR010两种不同克隆号的P40抗体,进行免疫组化染色对比实验。结果:A组的C3B4出现胞浆胞膜中度非特异染色,而MXR010没有出现非特异染色。B组的C3B4出现胞浆胞膜高度非特异染色,而MXR010出现胞浆胞膜轻度非特异染色。同一克隆号,A组和B组相比,随着抗原修复时间的延长,MXR010从无非特异染色变为轻度非特异染色,而C3B4从中度非特异染色加重为高度非特异染色。结论:抗原修复时间对不同克隆号的P40免疫组化染色结果会产生影响,随着抗原修复时间的延长,越容易出现非特异染色。选择适当的抗原修复时间和特异性好的抗体,可以减少免疫组化的非特异染色。

皮肤石蜡组织Ⅳ型胶原免疫荧光抗原修复方法的评估

目的 寻找皮肤石蜡包埋组织Ⅳ型胶原免疫荧光(IF-PE)最佳抗原修复方法。方法以2021年1月至2022年12月在上海交通大学医学院附属儿童医院确诊的X-连锁Alport综合征患儿和父(母)亲共14例皮肤组织,冰冻组织免疫荧光(IF-FT)为自身对照,比较不同抗原修复法IF-PE染色部位和强度。结果 与Ⅳ型胶原IF-FT自身对照比较,采用蛋白酶K修复,仅部分患儿基膜正常分布(6/14),而角质层均异常表达;微波、高温水浴和高压蒸汽3种修复方法,基膜均无正常分布,角质层异常分布(分别为2/14,11/14,12/14);微波联合酶修复法仅2例基膜正常分布,未见角质层异常表达;高压蒸汽联合酶和高温水浴联合酶2种修复法基膜全部正常分布,角质层异常表达(分别为14/14和2/14),表达强度两者接近。结论高温水浴联合蛋白酶K可作为皮肤石蜡包埋组织Ⅳ型胶原免疫荧光理想的抗原修复法。

全自动免疫组化染色仪比较不同抗原修复液对p53的染色结果

p53是一种与人类肿瘤相关性极高的抑癌基因,其参与细胞周期的调控。准确检测p53的表达对肿瘤诊断、治疗及预后具有重要意义[1]。基因测序是检测其突变的金标准,但在实际工作中,免疫组化法检测p53表达最为简便实惠。抗原修复技术是影响免疫组化染色结果的重要因素,其中以抗原修复液的pH值和加热条件最为关键[2]。随着全自动免疫组化染色仪的广泛应用,免疫组化流程更加规范化,操作更加标准化,但抗原修复仍是一个亟待解决的问题。

抗原修复方法在免疫组织化学染色中的应用及研究进展

免疫组织化学染色作为目前应用最广泛,技术相对最成熟的病理辅助诊断手段,对疾病诊断、预后判断、用药指导具有非常重要的作用。随着精准医疗的推进,精准病理诊断对免疫组织化学染色提出了越来越高的要求,抗原修复作为免疫组织化学检测中关键的一步,近年来发展迅速,相关研究越来越成熟,应用也越来越广泛,在修复方式、修复试剂、修复应用上出现大量深入研究,使得抗原回收的稳定性和回收率得到大幅的提高,本文将对抗原修复进行系统性回顾并对新的应用进行综合论述。

提高免疫组化反应的抗原修复方法

目的 探讨免疫组织化学反应不同预处理方法对反应结果的影响。方法 对5 0例经10 %中性福尔马林液固定过的组织,经脱水、石蜡包埋,制成切片,分别采用3种不同方法作预处理后,进行免疫组织化学(S P法)染色。结果 石蜡组织切片免疫组化反应预处理,采用中温水浴抗原修复法,其阳性表达率为5 2 .6% ,脱片率为2 .0 % ;采用高压锅抗原修复法,其阳性表达率为47.4% ,脱片率为2 0 .0 % ;采用水沸抗原修复法,其阳性表达率为3 9.5 % ,脱片率为12 .0 %。结论 免疫组化反应采用中温水浴抗原修复法作预处理,石蜡组织切片阳性表达率较高压锅抗原修复法提高了5 .2 % ,P <0 .0 5 ,较水沸抗原修复法提高了13 .1% ,P <0 .0 5 ;采用中温水浴抗原修复法石蜡组织切片脱片率较高压锅抗原修复法降低了18.0 % ,P <0 .0 1,较水沸抗原修复法降低了10 .0 % ,P <0 .0 1。预处理采用中温水浴抗原修复法,即提高了免疫组织化学反应阳性表达率,又提高了制片质量,操作方法易于掌握,是1种理想的免疫组化反应预处理方法,值得推广。

高压抗原修复方法在免疫组化染色的应用比较

目的:优化免疫组化高压抗原修复法染色效果。方法:同一组织分别采用高压抗原修复直接法或间接法,用柠檬酸缓冲液或EDTA抗原修复液进行抗原修复,检测10种常用抗体的免疫组化染色效果。结果:抗原修复间接法与直接法染色强度有明显差异,直接法优于间接法;两种抗原修复液间也存在差异,EDTA抗原修复液效果优于柠檬酸缓冲液。结论:高压抗原修复直接法并用EDTA抗原修复液对组织切片进行抗原修复效果更好。

不同的抗原修复方法在Ⅳ型胶原免疫组化染色中的应用

Ⅳ型胶原（collagenIV）是构成基膜致密层的主要成分，亦属于纤维型胶原。在基膜中呈三维的网状结构，与其他成分如层黏连蛋白、纤维连接蛋白等共同组成细胞外基质。

固定液及抗原修复液pH值对免疫组化染色的影响

目的 :研究固定液pH值和抗原修复液pH值对免疫组化染色结果的影响。方法 :取正常皮肤、胃粘膜、子宫肌瘤、乳腺癌组织 ,分别用 pH值 3.0 ,5 .0 ,7.0 ,8.0 ,10 .0的缓冲福尔马林固定液固定。选用EMA、SMA、ER、CK(AE1/AE3 )为一抗 ,Evinsion二步法免疫组化染色。染色时分别用 pH值 6 .0 ,7.0 ,8.0的抗原修复液或用市售pH值 8.0的EDTA作微波抗原修复。结果 :不同条件可造成阳性细胞数量及染色强度变化 ,本实验得知CK (AE1/AE3 )、ER是以阳性细胞数目改变为主 ,SMA、EMA是以染色强度改变为主。结论 :(1)使用 10 %中性或微碱性缓冲福尔马林固定液 ,固定效果最佳。 (2 )本实验所用的 4种组织 ,抗原修复液选择pH值 7.0、8.0均优于 pH值6 .0 ,皮肤组织选择EDTA(pH值 8.0 ) ,雌激素受体选择 pH值 8.0时染色效果最佳。 (3)固定液pH值 >8.0容易造成背景染色 ,修复液 >8.0影响切片附着 。

柠檬酸盐和EDTA缓冲液对弥漫性大B细胞淋巴瘤Ki-67和bcl-2抗原修复的比较

目的探讨柠檬酸盐和EDTA缓冲液对弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphomas,DLBCL)中Ki-67和bcl-2抗原修复的比较。方法运用高压锅热抗原修复法,选择柠檬酸盐和EDTA两种缓冲液同时进行抗原修复,比较了78例弥漫性大B细胞淋巴瘤Ki-67和43例DLBCL bcl-2的免疫组化染色应用效果。结果免疫组化染色采用EDTA与柠檬酸盐缓冲液相比,Ki-67指数78例中有76例明显提高,两者差异有统计学意义(P<0·01);bcl-2染色43例中有13例表达明显提高,两者差异有统计学意义(P<0·01)。结论在实际免疫组化染色中,EDTA缓冲液较柠檬酸盐缓冲液能极大地提高弥漫性大B细胞淋巴瘤的Ki-67和bcl-2抗原的表达。

应用高温高压抗原修复提高第一抗体稀释度

合适的一抗稀释度是获得免疫组织化学染色满意结果的保证。影响一抗稀释度的因素很多，我们在工作中发现，是否进行高温高压抗原修复，也会对抗体稀释度产生一定的影响。

核受体免疫组织化学染色时抗原修复方法的选择

目的探讨不同抗原修复法对DA.1U大鼠肝组织内核受体检测结果的影响。方法应用微波修复法、高压修复法、酶修复法和高压加酶修复法对DA.1U大鼠肝组织切片进行修复,然后进行免疫组化染色。结果DA.1U大鼠肝组织内核受体LXR-α、LXR-β、PPAR-γ和FXR经高压抗原修复后,染色阳性强度较其他修复方法明显增强,而且定位较佳。结论在核受体免疫组化染色中高压抗原修复法染色效果优于其他抗原修复法。

几种抗原修复方法研究

由于常规福尔马林固定和石蜡包理过程造成的抗原封闭与结构改变，限制了一些抗体在免疫组织化学中的应用。为了恢复组织的抗原性，提高免疫组织化学的检测阳性率，我们应用高压锅，微波炉和胰蛋白酶分别对石蜡切片进行处理。结果显示，一些抗体过去只能用于冰冻切片，经前处理后可用于石蜡切片，一些抗体的敏感性增强，经高压锅处理的免疫染色重复性较微波炉处理得好，个别抗体适用于酶消化。总之，在免疫组织化学染色过程中应根据抗原抗体的特性选用适当的前处理方法。