不同离心参数对口蹄疫病毒有效抗原成分回收率的影响

为了减少在疫苗生产中口蹄疫病毒液及有效成分的损失,试验通过加装在线浊度仪,测试不同离心参数对病毒离心的效果。结果:排渣时间设定为20 min,排渣浊度在50 NTU时病毒颗粒(146S)的回收率最高,可降低生产成本,提高原辅材料的利用率。

利用MODDE软件全因子分析优化乙脑灭活疫苗的纯化工艺

目的:通过MODDE软件全因子分析实验方法建立一种乙脑灭活疫苗纯化新工艺,进一步去除乙脑灭活疫苗中细胞残留DNA。方法:将传统的Sepharose 6 Fast Flow层析所获得的初步纯化液作为样品,进行Sartobind Q膜层析,选取上样量、盐浓度、pH、流速4个因子为输入变量,以乙脑疫苗抗原回收率、细胞残留DNA去除率为输出响应值,使用全因子DOE模型进行实验。结果:在实验参数范围内[上样量(40~100 mL)、盐浓度(0.3~0.7 mol/L)、pH(6.0~8.0)、流速(1~20 mL/min)],增加Sartobind Q膜层析的样品细胞残留DNA低于每剂50 pg,去除率在90%以上。结论:通过应用DOE实验设计,找到Sartobind Q膜合适的工艺设计空间,有效去除乙脑灭活疫苗中的细胞残留DNA,提高疫苗临床应用的安全性。

柯萨奇病毒A组16型纯化液超滤浓缩工艺的探索

目的探索柯萨奇病毒A组16型(coxackievirus A16,CA16)纯化液在小试条件下的最适超滤浓缩参数,并验证其在放大规模工艺中的适用性。方法制备CA16灭活纯化液,在小试条件下,对CA16纯化液进行超滤浓缩,比较采用不同截留分子量(10、30及100 KD)的超滤膜,以不同加液方法(恒体积及补液法)、浓缩倍数(10、20、30及50倍)、上样浓度(原倍、2及4倍稀释)及洗膜次数(1~5次)条件下浓缩样品的抗原回收率、蛋白含量和膜通量,筛选最适参数;应用此参数进行放大规模的3批CA16纯化样品超滤浓缩,验证其适用性。结果在小试条件下,截留分子量100 KD的超滤膜较30、10 KD的抗原回收率及蛋白含量均相近,但膜通量提升16%和100%;恒体积法较补液法浓缩样品的杂蛋白去除率提升约2倍,膜通量提高58%;10倍浓缩的样品回收率较30及50倍浓缩样品高10%~15%,蛋白含量较其他浓缩倍数低2~4倍;稀释上样与原倍上样的浓缩样品相比,抗原回收率和膜通量均无明显变化;膜表面多次洗涤可显著提高抗原回收率,但洗涤3次后即达峰值。在放大规模条件下,3批CA16纯化液抗原回收率均值为92.3%,蛋白含量均值为86.54μg/mL,膜通量均值为141.5 L/(m^2·h)。结论在小试条件下,采用截留分子量为100 KD的超滤膜,以恒体积法对原倍CA16病毒纯化液进行10倍浓缩,同时洗膜表面3次,可获得更高通量及抗原回收率且较低蛋白含量的浓缩样品;此条件在放大规模条件下亦适用。