交叉反应性糖类抗原决定簇抗体吸附剂在过敏原特异性IgE抗体检测中的应用分析

本研究旨在探讨抗交叉反应性糖类抗原决定簇IgE抗体(anti-CCD IgE)对过敏原特异性IgE(sIgE)抗体检测的干扰,以及anti-CCD IgE吸附剂在过敏原sIgE检测中的应用价值。采用横断面研究,回顾性分析2020年10月至2021年5月就诊于四川大学华西医院并以免疫印迹法行过敏原sIgE检测样本2636例,其中过敏原sIgE阳性样本共计709例。随机收集过敏原sIgE阳性且交叉反应性糖类抗原决定簇(cross-reactive carbohydrate determinants,CCD)指示带为阳性的患者血清样本共46例,sIgE阳性但CCD指示带阴性血清样本1例,使用anti-CCD IgE吸附剂处理这些样本,再次进行过敏原sIgE检测,分析吸附前、后两次检测结果的差异。结果显示,本研究收集样本期间过敏原检测样本的CCD指示带阳性率为2.6%(69/2636)。47例样本经anti-CCD IgE吸附剂处理后,阳性率排名前三的过敏原sIgE从树组合2(柳树/杨树/榆树)、普通豚草、花生变更为尘螨组合、蟑螂和蟹。46例样本的anti-CCD IgE阳性结果全部转阴,sIgE抗体阳性总量下降了62.8%;阳性强度等级≥2的sIgE抗体经anti-CCD IgE吸附剂处理后阳性率显著降低,其中普通豚草阳性率降低达96.2%。阳性样本结果呈多sIgE抗体不同幅度下降,最多涉及11种抗体,最大降幅4级,强阳性(阳性强度等级≥4)sIgE抗体也有较高的转阴比例(25.0%~100%)。约60%样本的阳性sIgE抗体减少2种以上,17.4%样本的sIgE抗体转为全阴。1例anti-CCD IgE阴性样本处理后过敏原sIgE检测结果无变化。综上,普通豚草、葎草、树木组合2(柳树/杨树/榆树)等sIgE易受anti-CCD IgE影响,导致假阳性,经anti-CCD IgE吸附剂处理样本后可明显减少因anti-CCD IgE干扰引起的假阳性;anti-CCD IgE阳性样本使用anti-CCD IgE吸附剂进行预处理很有必要,可使实验室结果更准确,为过敏性疾病的诊断和预防提供参考依据。

土拨鼠肝炎病毒核心蛋白质粒的构建、原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定

目的构建土拨鼠肝炎病毒核心蛋白质粒并进行原核表达、抗体制备。方法应用基因工程技术将编码截短型土拨鼠肝炎病毒核心蛋白(WHcAg1～149aa)的基因片段装入原核表达载体pQE60上,在JM109菌内进行诱导表达,使用切胶回收及Ni-NTA柱两种方法纯化目的蛋白。将纯化蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,并采用酶联免疫吸附实验、免疫组织化学及Western blot检测抗体的灵敏度和特异性。结果成功地构建了含截短型土拨鼠肝炎病毒核心区基因的质粒并获得表达,经纯化得到了分子量约为16.5kD的重组核心蛋白,免疫家兔获得了高效价的特异性多克隆抗体,而且与HBcAg有交叉反应。结论获得的重组截短型土拨鼠肝炎病毒核心抗原(1～149aa)纯度高,免疫原性强。获得的兔抗-WHc效价高,特异性好,与HBcAg有交叉反应。