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Western blot免疫印迹法检测磷酸化蛋白表达条件优化研究
被引量:
7
1
作者
韩晓杰
段婷婷
+4 位作者
庞雨
徐玉东
王宇
杨永清
尹磊淼
《现代生物医学进展》
CAS
2017年第21期4047-4050,4037,共5页
目的:探讨Western blot免疫印迹法不同转膜方法和不同抗原抗体比例对磷酸化蛋白表达的检测效果。方法:选择肌球蛋白轻链(myosin light chain,MLC)及其磷酸化蛋白作为研究对象,比较半干转印法、湿转法和1:3000、1:5000、1:10000等抗体稀...
目的:探讨Western blot免疫印迹法不同转膜方法和不同抗原抗体比例对磷酸化蛋白表达的检测效果。方法:选择肌球蛋白轻链(myosin light chain,MLC)及其磷酸化蛋白作为研究对象,比较半干转印法、湿转法和1:3000、1:5000、1:10000等抗体稀释比例对磷酸化蛋白检测效果的影响。结果:半干转印法(恒压16V,30 min)观察到蛋白信号断续;而同样样品利用湿转法(恒压130 V,1h)检测发现信号连续且强度明显增高;对于磷酸化蛋白,半干转印法无法观察到磷酸化蛋白信号;而同样样品湿转法检测出现连续信号。统一利用湿转方法进行后续蛋白磷酸化检测,当抗体稀释比为1:3000时,结果出现非特异性条带;降低抗体稀释比为1:5000时无非特异性条带,且蛋白信号效果较好;抗体稀释比为1:10000时条带图像出现弥散且背景较高。结论:选择合适的转膜方式和抗原抗体比例有助于磷酸化蛋白表达检测。
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关键词
蛋白质免疫印迹法
半干转印
湿转
抗原
抗体
比例
原文传递
题名
Western blot免疫印迹法检测磷酸化蛋白表达条件优化研究
被引量:
7
1
作者
韩晓杰
段婷婷
庞雨
徐玉东
王宇
杨永清
尹磊淼
机构
上海中医药大学
出处
《现代生物医学进展》
CAS
2017年第21期4047-4050,4037,共5页
基金
国家自然科学基金项目(81473760
81574058)
+2 种基金
上海市卫生系统优秀青年人才培养计划(XYQ2013081)
上海市中医药事业发展三年行动计划重大研究项目(ZY3-CCCX-3-3005)
上海市人才发展资金(201610)
文摘
目的:探讨Western blot免疫印迹法不同转膜方法和不同抗原抗体比例对磷酸化蛋白表达的检测效果。方法:选择肌球蛋白轻链(myosin light chain,MLC)及其磷酸化蛋白作为研究对象,比较半干转印法、湿转法和1:3000、1:5000、1:10000等抗体稀释比例对磷酸化蛋白检测效果的影响。结果:半干转印法(恒压16V,30 min)观察到蛋白信号断续;而同样样品利用湿转法(恒压130 V,1h)检测发现信号连续且强度明显增高;对于磷酸化蛋白,半干转印法无法观察到磷酸化蛋白信号;而同样样品湿转法检测出现连续信号。统一利用湿转方法进行后续蛋白磷酸化检测,当抗体稀释比为1:3000时,结果出现非特异性条带;降低抗体稀释比为1:5000时无非特异性条带,且蛋白信号效果较好;抗体稀释比为1:10000时条带图像出现弥散且背景较高。结论:选择合适的转膜方式和抗原抗体比例有助于磷酸化蛋白表达检测。
关键词
蛋白质免疫印迹法
半干转印
湿转
抗原
抗体
比例
Keywords
Westem blot
Semi-dry transfer method
Wet transfer method
Antigen-antibody dilution proportion
分类号
R446.6 [医药卫生—诊断学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Western blot免疫印迹法检测磷酸化蛋白表达条件优化研究
韩晓杰
段婷婷
庞雨
徐玉东
王宇
杨永清
尹磊淼
《现代生物医学进展》
CAS
2017
7
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参考文献
引证文献
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