循环抗原法检测人弓形体感染的调查

弓形体病是一种流行很广的人畜共患病,可累及人体多数器官,最常见的器官为眼、脑和淋巴。其传播与生活中接触猪、牛、羊、猫、兔及家禽等有关。该病无特征性症状,可因侵入器官不同而表现为脑膜炎,内脏损害,或淋巴结炎等不同临床类型,但在成人多为无症状的隐性感染。我国近年来对人群弓形体感染作了一些调查,但未见河北省的报导。

蒸馏水修复抗原法

免疫组化染色已成为临床病理诊断的重要手段之一,由于在常规制片过程中,常因组织标本经甲醛固定后,抗原被封闭,使染色效果不理想.目前,报道多采用微波辐射、高压加热等方法来修复组织抗原,而应用蒸馏水修复抗原的方法则较少报道,我们应用蒸馏水来修复组织抗原,获得满意效果.

酶联免疫双抗原夹心法检测HCV抗体的应用与分析

目的通过对第四代双抗原夹心法HCV抗体检测试剂进行系列验证以及与第三代间接法HCV抗体检测试剂的平行比对,分析双抗原夹心试剂的检测性能。方法于2020年10月13日—2021年12月31日在淮安市中心血站用第四代试剂检测室内质控品、参考血清盘等样本,分析其重复性、批内和批间精密度以及敏感性和特异性等;运用第三代和第四代HCV抗体检测试剂平行检测同期无偿献血者标本等,比较其检测特异性和灵敏度。结果第四代试剂阴、阳性对照检测符合率100%;批内检测精密度4.36%,批间检测精密度6.88%;在确证试验结论为阳性的11例标本检测中,第四代试剂检测出9例,第三代试剂检测出3例,差异有统计学意义(χ^(2)=3.342,P<0.05);在确证试验结论为阴性的83237例标本中,第四代试剂检测假阳性12例,第三代试剂检测假阳性95例,差异有统计学意义(χ^(2)=32.238,P<0.05)。结论第四代双抗原夹心法HCV抗体检测试剂的重复性、灵敏度和特异性均明显高于第三代间接法HCV抗体检测试剂。

血清和支气管肺泡灌洗液隐球菌抗原-胶体金免疫层析法检测在肺隐球菌病中的诊断价值

目的探讨血清与支气管肺泡灌洗液隐球菌抗原-胶体金免疫层析法(CrAg-LFA)两种方法在肺隐球菌病患者诊断中的效能。方法选取抚州市第一人民医院2020年1月至2023年1月收治的60例疑似肺隐球菌病患者为研究对象,所有患者均经血清、支气管肺泡灌洗液CrAg-LFA及肺穿刺组织病理学检查,将肺穿刺组织病理结果作为金标准,比较血清、支气管肺泡灌洗液CrAg-LFA在肺隐球菌病患者中的诊断效能。结果60例疑似肺隐球菌病经肺穿刺组织确诊51例,阳性率为85.00%。血清CrAg-LFA的灵敏度、特异度、准确度分别为72.55%、66.67%、71.67%,与金标准的一致性较差(Kappa=0.261,P=0.021);肺泡灌洗液CrAg-LFA的灵敏度、特异度、准确度分别为94.12%、88.89%、93.33%,与金标准的一致性较好(Kappa=0.760,P<0.001)。肺泡灌洗液CrAg-LFA灵敏度、阴性预测值、准确度均高于血清CrAg-LFA检测,差异有统计学意义(P<0.05),两种方法的特异度、阳性预测值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论肺泡灌洗液CrAg-LFA诊断肺隐球菌病的效能较血清CrAg-LFA诊断理想,其与肺穿刺组织病理诊断结果一致性更高,临床针对高度疑似肺隐球菌病患者,首先考虑采取肺泡灌洗液CrAg-LFA检查,可减少临床漏诊与误诊的发生情况。

用 H-抗原方法鉴定小鼠胚胎性别的研究

本试验选用纯系 C_(57)BL/6小鼠,将雄鼠脾细胞悬液经腹腔注射免疫同基因型雌鼠。加强免疫后,常规尾静脉采血制备抗 H-Y 抗血清。采用精子微量细胞毒试验和酶联免疫法(ELISA)2种方法进行抗血清检测。将特异性和效价均较好的抗H-Y 抗血清用于间接免疫荧光法鉴定小鼠胚胎性别。共鉴定桑椹胚和早期囊胚462枚,呈荧光阳性(雄性)的占47%(219/462);呈荧光阴性(雌性)的占53%(243/462),经 X^2检验,符合正常性比例(1:1,P>0.05)。将这2类胚胎分别移植给假孕受体进行验证,并对验证结果进行分析。

戊型肝炎病毒抗体双抗原夹心法ELISA的建立与初步应用

目的 建立抗戊型肝炎病毒 (HEV)抗体检测的双抗原夹心ELISA(DS -ELISA) ,并应用于多种动物血清的检测。方法 将大肠杆菌表达的一段HEVORF2区重组抗原分别包被微孔板和进行辣根过氧化物酶 (HRP)标记 ,利用 5份阳性血清和 4 0份阴性血清建立双抗原夹心ELISA ;用 4 0 0份义务献血员血清比较双抗原夹心ELISA与间接法IgG抗体ELISA的符合情况 ;用 3只HEV感染猴系列血清比较双抗原夹心ELISA试剂和Genelabs公司HEVIgG试剂 ;用双抗原夹心ELISA试剂检测新疆地区的部分牛、绵羊、山羊、猪血清和上海地区的部分鸡血清中的HEV抗体。结果 建立了检测HEV抗体的双抗原夹心ELISA方法 ,对 4 0 0份义务献血员血清的检测表明其与间接法IgG抗体ELISA试剂的符合情况良好 ,并且有更高的s/co比值 ;与Genelabs公司HEVIgG试剂的比较表明双抗原夹心ELISA试剂的检出更早 ,尤其是持续时间及强度明显优于Genelabs试剂 ;在所检测的各种动物中均发现了HEV抗体 ,其中猪抗体的阳性率最高 ,表明双抗原夹心ELISA试剂可同时用于不同动物的抗HEV抗体检测。结论 利用大肠杆菌表达的HEV重组抗原建立了双抗原夹心法ELISA ,并可同时用于不同动物的抗HEV抗体检测。

双抗原夹心ELISA法检测HCV抗体在无偿献血中的应用探讨

目的探讨双抗原夹心ELISA法(简称夹心法)检测丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)在无偿献血中的应用。方法对42份以往一种或两种间接法抗-HCV反应性的献血者标本及2 831份无偿献血者标本同时采用一种夹心法和两种间接法试剂进行抗-HCV检测,对任一试剂检测为反应性的标本通过重组免疫印迹法(RIBA)作进一步确证。3种试剂检测均为阴性或RIBA结果为阴性判为真阴性,计算并对比各方法的特异性。结果 3种试剂检测均为阴性的标本2 816份,均为反应性的标本32份,双试剂反应性标本7份,单试剂反应性标本18份。采用RIBA试剂对57份反应性标本进行检测,确认结果阳性26份、不确定12份、阴性19份。19份RIBA确认阴性的标本中,双抗原夹心法、某国产间接法、某进口间接法分别有1例、8例、15例假阳性结果,特异性分别为99.96%(2 834/2 835)、99.72%(2 827/2 835)和99.47%(2 820/2 835)。结论夹心法诊断试剂的特异性高于间接法诊断试剂,为降低生物学假阳性,建议采用夹心法试剂检测抗-HCV。

双抗原夹心ELISA法检测马尔尼菲青霉Mp1p抗体

目的建立一种检测马尔尼菲青霉特异性抗体的双抗原夹心ELISA方法。方法利用毕赤酵母系统表达重组马尔尼菲青霉特异性甘露糖蛋白Mp1p,并利用改良过碘酸钠法标记Mp1p,经棋盘滴定法建立一种可检测马尔尼菲青霉Mp1p特异性抗体的双抗原夹心ELISA法,并检测100例健康人群对照血清、21例血培养确诊其他真菌感染病人血清和15例血培养确诊马尔尼菲青霉病人血清,联合本实验室前期建立的马尔尼菲青霉抗原检测方法评价其临床应用价值。结果成功建立一种检测马尔尼菲青霉Mp1p特异性抗体的双抗原夹心ELISA法,经健康人群对照及其他真菌感染病人血清评价特异度为100%(121/121),检测15例马尔尼菲青霉病人血清,Mp1p特异性抗体2例阳性,Mp1p特异性抗原12例阳性,Mp1p抗体与抗原联合检测可明显提高灵敏度,达到93.3%(14/15)。结论双抗原夹心ELISA法检测马尔尼菲青霉Mp1p特异性抗体具有高度的特异性,联合抗原检测可提高马尔尼菲青霉感染诊断率。

重组人类T淋巴细胞白血病病毒抗原及双抗原夹心法ELISA抗体诊断试剂盒的研制

为研制灵敏、特异的抗人类T淋巴细胞白血病病毒(HTLV)抗体诊断试剂,将一段HTLV Ⅰ和HTLV Ⅱenv区嵌合基因在大肠杆菌中表达,获得的重组抗原具有良好活性。将该抗原作为酶标记抗原建立双抗原夹心法ELISA(dsELISA),对31份HTLV Ⅰ型血清和19份HTLV Ⅱ型血清均能100%检出,而在5065份各种阴性血清中特异度为99 94%。用dsELISA试剂与进口间接法试剂(GeneLabs试剂)平行检测18份HTLV Ⅰ参比血清、17份HTLV Ⅱ参比血清和1024份献血员血清,结果dsELISA试剂正确率为100%,对HTLV Ⅰ型血清和HTLV Ⅱ型血清的反应性基本相同,平均s/co值显著高于GeneLabs试剂。而GeneLabs试剂对HTLV Ⅱ型血清的反应性显著弱于Ⅰ型,并有2份BBI参比血清中的Ⅱ型血清漏检。另外,GeneLabs试剂在献血员血清中出现9例假阳性,特异性显著低于dsELISA试剂。这些结果表明:所研制的dsELISA试剂可用于HTLV Ⅰ型和Ⅱ型血清的检测,其灵敏度和特异度均优于进口间接法诊断试剂。

双抗原夹心法ELISA在肾综合征出血热诊断中的应用

目的建立一种敏感、特异的检测肾综合征出血热(HFRS)血清总抗体的双抗原夹心法ELISA。方法应用重组汉坦病毒(HV)NP抗原e1.3S作为包被抗原和e6-119-HRP作为酶标抗原建立双抗原夹心法ELISA,检测血清总抗体,并与间接免疫荧光法(IFA)相比较。结果共检测188份人血清和378份鼠血清标本,2种方法的总符合率为97.70%。以IFA为参照标准,双抗原夹心法ELISA的敏感性为97.54%,特异性为97.87%。结论双抗原夹心法ELISA检测HFRS血清总抗体具有很高的敏感性和特异性,适用于大规模的流行病学调查。

双抗原夹心法检测抗丙型肝炎病毒抗体的应用研究

丙型肝炎病毒（HCV）是血液筛查的重要项目之一。目前主要检测方法为酶联免疫吸附试验（ELISA）,以间接法为主。双抗原夹心法试剂的应用可以减少非特异性的IgG的干扰,具有更好的特异性和灵敏度。本研究采用双抗原夹心法对间接法阳性样本进行检测,并结合核酸检测（NAT）进行确证,对2种方法进行比较分析,现报告如下。

双抗原夹心ELISA法检测抗念珠菌烯醇化酶抗体

目的建立检测抗念珠菌烯醇化酶(Eno)特异性抗体的双抗原夹心ELISA法,并进行临床应用评价。方法用基因工程制备的重组Eno作为包被抗原和酶标抗原,通过棋盘滴定法对双抗原夹心ELISA法的反应条件进行优化,对方法的敏感性、特异性和精密度进行考察。用双抗原夹心ELISA法测定291例住院患者(侵袭性念珠菌病114例,念珠菌定植82例,细菌感染患者95例)以及200名健康人血清,并与本实验室前期自建的间接ELISA法检测抗Eno抗体的结果进行比较。结果双抗原夹心ELISA法工作条件为:Eno抗原包被浓度为0.5μg/m L,酶标抗原1∶4 000稀释;封闭液为含50 g/L脱脂奶粉的PBS-T,待测血清稀释度为1∶100。患者血清检测结果显示,批内变异系数(CV)分别为6.8%、7.4%和5.9%;不同批次重复测定15次,其批间CV分别为10.1%、9.6%和12.4%。重组抗原对血清中相应抗体的阻断率为92.2%。通过ROC曲线确定cut off值吸光度(A)为0.209。检测侵袭性念珠菌病(invasive candidiasis,IC)的敏感性和特异性分别为81.6%(93/114)和94.4%(356/377),敏感性高于检测抗Eno抗体的间接ELISA法(81.6%vs 76.1%)。结论建立了双抗原夹心ELISA法检测抗念珠菌Eno特异性抗体,可提高IC的诊断率,具有临床应用价值。

不同的抗原修复方法对肺癌组织TTF-1、P53、SPB等6种抗体表达的影响

目的探讨不同的修复方法配搭不同修复液对肺癌组织TTF-1、P53、SPB等6种抗体表达的阳性数量及强度是否存在影响。方法10例肺癌患者标本,分别用微波、高压配搭柠檬酸缓冲液(pH6.0)、EDTA缓冲液(pH8.0、pH9.0)处理,分别滴加一抗,采用二步法,进行免疫组化标记,分别由两位病理医师进行独立看片,并进行结果比较。结果不同的修复方法配搭不同修复液对这些抗体表达的阳性数量及强度存在影响。结论微波配搭柠檬酸缓冲液对易表达抗体的染色效果佳;高压配搭EDTA缓冲液(pH8.0)对显示细胞核染色效果佳,高压配搭檬酸缓冲液(pH6.0)对显示难表达抗体的细胞浆、细胞膜染色效果佳。

双抗原夹心法和间接法检测丙型肝炎病毒抗体对比研究

目的:研究双抗原夹心法和间接法酶联免疫吸附试验(ELISA)检测丙型肝炎病毒(HCV)抗体的临床价值。方法:选取输血前、术前及孕前拟行HCV抗体检测的患者1674例,采用促凝管取患者空腹肘静脉血5ml,以3000r/min离心10min后取上清-20℃保存备用,分别采用间接ELISA法和双抗原夹心ELISA法检测抗-HCV抗体,所有操作均严格按照试剂盒内说明书要求完成,采用一致性Kappa检验分析间接法和双抗原夹心法诊断价值。结果:上海科华间接法、英科新创间接法和北京万泰双抗原夹心法对HCV检出率分别为4.30%、4.06%和3.52%(P>0.05),且三种检测试剂吸光度值/临界值(S/CO)差异均无统计学意义(P>0.05);以确证实验结果为“金标准”,间接ELISA法检测HCV灵敏度为94.00%,特异度为98.27%,阳性预测值为62.67%,阴性预测值为99.81%,准确率为98.15%,一致性Kappa为0.743;双抗原夹心法检测HCV灵敏度为97.91%,特异度为99.26%,阳性预测值为79.66%,阴性预测值为99.94%,准确率为99.22%,一致性Kappa为0.875;McNemar检验结果显示,间接法和双抗原夹心法检测HCV结果比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:双抗原夹心ELISA法用于HCV检测灵敏度和特异度均明显高于间接ELISA法,对控制HCV感染和传播具有较高临床价值和应用前景。

双抗原夹心法和间接法检测丙型肝炎病毒抗体的结果分析

目的比较双抗原夹心法和间接法检测丙型肝炎病毒抗体的结果。方法以血站进行无偿献血的人次作为研究对象,其中28982份标本使用双抗原夹心法检测作为实验组,27603份标本使用间接法检测作为对照组。比较两组的阳性检出率、复检率以及复检合格率,分析两种试剂的临床检测结果。结果实验组标本中检测出16份双试剂阳性标本,27份单试剂阳性可疑标本,对27份可疑标本进行复检后,有26份合格,1份不合格;对照组标本中检测出14份双试剂阳性标本,42份单试剂阳性可疑标本,对42份可疑标本进行复检后,有22份合格,20份不合格。实验组复检率为0.09%,复检合格率为96.30%;对照组复检率为0.15%,复检合格率为52.4%。实验组复检率低于对照组,复检合格率高于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。实验组双试剂阳性率为0.06%,对照组双试剂阳性率为0.05%,比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论在血站对无偿献血人群进行检测时,可以选择双抗原夹心法对丙型肝炎病毒抗体进行检测,检测有效率要高于间接检测方法,降低了假阳性结果的出现几率,避免了血液浪费的现象出现,也减少了献血者淘汰的几率,值得在今后血站进行推广使用。

溶血对双抗原夹心法检测HIV抗体的影响

目的：探讨溶血对双抗原夹心法检测HIV抗体的影响。方法：制备HIV抗体阴性非溶血和配对溶血（Hb2-7g／L）血清48份。另制备HIV抗体阴性非溶血和重度溶血（Hb80g／L）血清1份、HIV抗体阳性非溶血和重度溶血（Hb108g／L）血清1份，用HIV抗体阴性血清对HIV抗体阴性重度溶血血清、HIV抗体阳性非溶血和配对重度溶血血清进行倍比稀释，得到不同溶血程度的样品。测定HIV抗体，检测溶血及不同溶血程度对HIV抗体的影响。结果：48份HIV抗体阴性非溶血和溶血血清比较，差异无统计学意义（f=0．078，P=0．938）：对HIV抗体阴性重度溶血倍比稀释血清的A值和Hb浓度做相关性分析，两组间无相关性（r=-0．382，P=0．221）；对HIV抗体阳性溶血、非溶血倍比稀释血清的A值进行比较，差异无统计学意义（t=0．236，P=0．817）。AA（溶血血清A-非溶血血清A）与Hb浓度作相关性分析，两组间无相关性（r=0．149，P=0．644）。结论：溶血对双抗原夹心法检测HIV抗体无影响。但是如果试剂反应孔包被、封闭的质量差可能引起Hb的非特异吸附而造成假阳性，故日常工作中要尽量避免样品溶血，严格按照全国艾滋病检测技术规范操作。

基因重组抗原酶联免疫法检测兔出血症病毒抗体及其标准化

以重组兔出血症病毒 (RHDV) VP6 0蛋白为抗原 ,建立了 RHDV抗体间接 EL ISA检测方法。优化的试验反应条件为 :重组 VP6 0的包被质量浓度为 1.0 mg/ L ,用 10 %牛血清封闭 ,以大肠杆菌提取物稀释被检血清以消除非特异性反应。将所建立的 EL ISA与现行血凝抑制 (HI)试验比较发现 ,不同免疫状态的兔血清的 RHDV EL ISA抗体与 HI抗体均呈正相关。对 11个 RHD免疫兔场 1130份血清样品的抗体检测表明 ,各免疫兔群血清 RHDV抗体水平不完全一致 ,D值在 1.0 9～ 1.76之间 ,显著高于非免疫兔 (0 .0 5 )及 SPF兔 (0 .0 2 ) ,低于高免兔 (2 .34)。在此基础上 ,研制了RHDV抗体酶联免疫检测试剂盒 ,测定了其主要指标 ,制定了各成分的质量控制标准 。