传染性支气管炎病毒(M41株)HI试验抗原的特异性和敏感性试验

采用本研究室制备的3批传染性支气管炎病毒(IBV,M41株)HI试验抗原,分别对100份和80份不同鸡血清进行IBV HI抗体检测,同时用IBV ELISA抗体检测试剂盒进行检测,比较两种不同方法检测的特异性和敏感性。结果显示,特异性试验中80份SPF鸡血清,自制抗原检测均为阴性,IBV ELISA检测79份为阴性,10份其他鸡病血清,两种方法检测9份均为阴性,10份IBV阳性血清两种方法检测均为阳性;敏感性试验中,74份已知IB疫苗免疫或IBV M41株感染鸡血清IBV HI检测72份为阳性,阳性检出率为97.3%(72/74),IBV ELISA检测74份均为阳性,阳性检出率为100%(74/74),SPF鸡血清及其他鸡病血清,两种方法检测均为阴性,两种检测方法总符合率为97.5%,差异不显著(P>0.05)。试验结果证明,本研究室自制抗原具有良好的特异性,特异性为100%,抗原同时具有良好的敏感性,但IBV ELISA方法的敏感性要高于IBV HI方法。

结核感染T细胞斑点试验中结核特异性抗原/植物血凝素比值对肺外结核的诊断价值

目的探讨结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)中结核特异性抗原(TBAg)/植物血凝素(PHA)比值在肺外结核(EPTB)诊断中的应用价值。方法选择2018年1月至2020年1月新乡医学院第一附属医院收治的522例疑诊的EPTB患者为研究对象,根据最终是否诊断为EPTB,将患者分为EPTB组(n=209)和非EPTB组(n=313)。2组患者均行T-SPOT.TB检测,比较2组患者T-SPOT.TB检测结果阳性率、PHA斑点形成细胞(sfc)数、早期分泌靶向抗原6(ESAT-6)sfc数、培养滤液蛋白10(CFP-10)sfc数及TBAg/PHA比值。比较ESAT-6 sfc数、CFP-10 sfc数及TBAg/PHA比值对EPTB的诊断价值。结果EPTB组和非EPTB组患者T-SPOT.TB检测结果阳性率分别为88.5%(185/209)和24.3%(76/313);EPTB组患者T-SPOT.TB检测结果阳性率显著高于非EPTB组(χ^(2)=206.840,P<0.05)。EPTB组患者T-SPOT.TB检测结果中ESAT-6 sfc数、CFP-10 sfc数、TBAg/PHA比值均显著高于非EPTB组,PHA sfc数显著低于非EPTB组(P<0.05)。根据受试者工作特征(ROC)曲线,TBAg/PHA比值诊断EPTB的特异度显著高于ESAT-6 sfc数和CFP-10 sfc数(P<0.05);ESAT-6 sfc数、CFP-10 sfc数、TBAg/PHA比值诊断EPTB的ROC曲线下面积和灵敏度比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论TBAg/PHA比值可显著提高T-SPOT.TB诊断EPTB的特异度,在EPTB诊断中具有较好的应用前景。

PVF抗原片环卵沉淀试验诊断日本血吸虫病敏感性和特异性的进一步观察

据80份粪检阳性的血吸虫病人血清,95份经吡喹酮治疗后3～8年的血吸虫病患者血清和90份非流行区健康人血清,按单盲法混合编号的考核实验结果:PVF—COPT使用江苏省寄研所提供的冷冻干卵抗原和热处理超声干卵抗原,对血吸虫病人血清的阳性率均为83.8％;在有血吸虫病治疗史者血清的阳性率分别为22.1％和15.8％;对正常人血清的假阳性率分别为8.9％和6.7％.此外,对肺吸虫、华枝睾吸虫病和姜片虫病人血清采用冷冻干卵抗原的交叉反应阳性率分别为8％、12％和4％。与常规法COPT的平行对比实验结果均无显著的差异.但标准化的PVF—COPT能预制定量的干卵抗原片,有利于提高COPT的稳定性.操作上较常规法COPT简便.

弓形虫速殖子细胞质、细胞膜、排泄-分泌抗原蛋白分子测定及特异性免疫反应的试验分析

目的 研究弓形虫速殖子各类抗原的蛋白组分 ,主要蛋白分子的抗原性和用于血清学诊断的价值。 方法 用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析弓形虫速殖子各类抗原的蛋白组分和主要蛋白分子 ,用免疫印渍技术以弓形虫患者血清识别弓形虫各类抗原的免疫反应靶位。 结果 弓形虫速殖子细胞质抗原、细胞膜抗原和分泌代谢抗原的主要蛋白分子分别为 85、5 2、38ku;4 8、35、16、14 ku和 15 8、95、2 7、15、13ku及弓形虫患者特异性血清识别速殖子各类抗原的免疫反应靶位分别是 32、4 0和 2 7ku。 结论 弓形虫速殖子各类抗原间存在各自独特的抗原决定簇和可被特异性记忆抗体识别的免疫反应受体。此对于提高弓形虫感染的免疫学诊断及免疫学预防均具有一定的实用价值。

严重急性呼吸综合征患者肺组织包被抗原的特异性研究

目的 :探讨严重急性呼吸综合征 (SARS)肺组织包被抗原在不同个体以及猪、羊、大鼠中的种属特异性。 方法 :匀浆SARS患者尸检肺组织、非 SARS患者肺组织以及猪、羊、大鼠肺组织后分别包被 ,利用酶联免疫吸附试验 (EL ISA) ,同时检测SARS患者及正常献血员血清中的 Ig G。 结果 :SARS患者及正常献血员血清用 SARS尸检患者与非 SARS患者肺组织包被抗原检测 ,两种组织包被抗原检测的阳性率间无统计学差异 ;而用非 SARS患者肺组织包被抗原检测的阳性率和用羊、猪、大鼠肺组织包被抗原检测的阳性率均具有统计学差异。 结论 :SARS患者肺组织及非 SARS患者肺组织中存在相同的抗原 ;其他动物中可能也存在该抗原 。

不同稀释介质对化学发光免疫法检测血清游离前列腺特异性抗原结果的评估

目的 评估不同稀释介质、稀释倍数在罗氏和新产业两仪器上稀释测定游离前列腺特异性抗原(free prostate specific antigen,FPSA)的可行性。方法 选取2020年7~12月在南通市肿瘤医院检测血清FPSA浓度在40~50ng/ml的样本60例为研究对象,运用化学发光免疫法稀释验证。根据罗氏仪器的检测上限,选取30例FPSA浓度为40~50ng/ml的血清样本,在罗氏仪器上分别用罗氏稀释液、蒸馏水、生理盐水和低值混合血清进行2,4和8倍稀释验证。根据新产业仪器的检测上限选取30例FPSA浓度为40~50ng/ml的血清样本,在新产业仪器上分别用蒸馏水、生理盐水和低值混合血清进行2,4和8倍稀释验证。对样本使用配对t检验,比较不同稀释介质和稀释倍数稀释后FPSA测定值与原倍值的差异,并计算两者的偏差。结果 FPSA在罗氏仪器上使用罗氏稀释液、蒸馏水、生理盐水和低值混合血清按不同比例稀释后测定,测定值的偏倚分别为-33.92%~63.51%,-36.83%~133.0%,-44.82%~116.2%和-33.0%~74.2%,其中罗氏稀释液和低值混合血清2倍稀释后结果与原倍值比较差异无统计学意义(t=0.387,0.707,均P>0.05),其余稀释后测定值与原倍值差异均有统计学意义(罗氏稀释液4和8倍,t=2.33,3.364;蒸馏水2,4和8倍,t=2.072,3.898,6.619;生理盐水2,4和8倍,t=2.052,3.078,6.507;低值混合血清4和8倍,t=3.584,6.229,均P<0.05)。FPSA在新产业仪器上使用蒸馏水、生理盐水和低值混合血清按不同比例稀释后测定,测定值偏倚分别为-32.14%~112.07%,-30.89%~95.22%和-31.85%~112.7%,稀释后测定值与原倍值差异均有统计学意义(蒸馏水2,4和8倍,t=2.169,2.706,3.996;生理盐水2,4和8倍,t=2.149,2.617,3.757;低值混合血清2,4和8倍,t=2.058,2.932,4.639,均P<0.05)。结论 对于超出检测上限的FPSA,罗氏仪器可用罗氏稀释液和低值混合血清进行2倍稀释,而新产业仪器不宜进行稀释检测。

组织多肽特异性抗原对原发性肝癌诊断作用的评价

目的 探讨组织多肽特异性抗原 (TPS)对原发性肝癌 (PHC)的临床应用价值。方法 采用酶联免疫吸附法 ,分别测定 85例PHC患者、35例肝硬化患者、2 2例慢性肝炎患者和 5 0例健康体检者血清TPS和AFP水平。结果 PHC组TPS和AFP血清水平均显著高于肝硬化组、肝炎组和健康体检组 (P <0 0 5 )。TPS与AFP的相关系数r=0 2 35 (P =0 0 0 1 )。AFP的ROC曲线下面积大于TPS(0 777vs 0 76 1 )。应用ROC曲线确定TPS和AFP的最佳切割值分别为 1 80U/L和 2 0ng/ml,在此切割值下 ,TPS和AFP对PHC的敏感性为 72 9%和 6 1 2 % ,特异性为6 7 3%和 86 0 %。肝细胞癌组AFP血清水平及阳性率高于胆管癌组 (P <0 0 5 ) ,但两组之间TPS血清水平及阳性率差异无显著性 (P >0 0 5 )。联合检测TPS和AFP可以将PHC的诊断敏感性提高到 84 7% ,但特异性却下降至6 1 7%。结论 单独检测TPS的血清水平对PHC未显示出比AFP更高的诊断价值 ,但对胆管癌的诊断具有一定的指导意义。联合检测TPS和AFP提高了PHC诊断的敏感性和阴性预测值 ,减少漏诊率 ,但由于TPS特异性较低 ,对PHC与肝硬化、肝炎的鉴别能力较差 。

制备幽门螺杆菌特异性抗原建立半定量免疫酶技术

制备幽门螺杆菌特异性抗原建立半定量免疫酶技术路又可，王年吉，王琳（南京军区南京总医院消化科２１０００２）幽门螺杆菌（ＨＰ）感染的血清学诊断方法因其安全、方便、无痛苦而受到欢迎。但是，由于ＨＰ与某些弯曲菌属存在交叉抗原，应用ＨＰ全菌抗原的ＥＬＩＳＡ方法...

Dot-ELISA法检测结核分枝杆菌特异性抗原CFP10的改进和建立

目的建立一种检测结核分枝杆菌特异性抗原培养滤液蛋白10(culture filtrate protein 10,CFP10)的斑点酶联免疫吸附试验(dot enzyme linked i mmunesorbant assay,Dot-ELISA)方法。方法采用真空泵抽吸浓缩检测样本,改进Dot-ELISA用改进前的和改进后的Dot-ELISA方法检测同一批临床确诊的结核性胸膜炎的胸腔积液25例和非结核性胸腔积液31例,比较方法改进前后检测CFP10的敏感性和特异性;改变实验程序中的工作条件(硝酸纤维素膜的孔径、滴加样本的体积、真空泵抽吸的压力、不同的封闭液、温育的温度和时间及抗体的滴度),确定最适工作条件及重复性和稳定性。结果改进前检测CFP10的敏感性为76.0%,改进后并应用最适条件的敏感性为96.0%,差异有统计学意义(P=0.042);特异性和重复性、稳定性实验结果表明,所建立的Dot-ELISA法特异性和改进前差异无统计学意义(P=0.641),且稳定性和重复性较好。结论所建立的Dot-ELISA是一种比较敏感、特异和稳定的检测方法,能用于结核特异性抗原的检测和疾病的诊断。

ELISA抗梅毒螺旋体抗原的特异性IgG/IgM抗体在诊断梅毒中的应用

目的探讨酶联免疫吸附测定(ELISA)抗梅毒螺旋体抗原的特异性IgG/IgM抗体在诊断梅毒中的应用。方法临床诊断或怀疑为梅毒的97例患者和74例非梅毒患者的血清同时接受ELISA抗梅毒螺旋体抗原的特异性IgG/IgM抗体和TPPA试验两种检测。结果ELISA抗梅毒螺旋体抗原的特异性IgG/IgM抗体具有较高的敏感性和特异性。结论ELISA抗梅毒螺旋体抗原的特异性IgG/IgM抗体适合于大样本的筛查和确诊。

不同人群结核分枝杆菌潜伏感染特异性IFN-γ检测分析

目的采用早期建立的特异性结核菌抗原IFN-γ Elispot检测技术,对深圳市不同人群结核菌潜伏感染的现状进行调查研究。方法采用结核菌特异性Elispot方法检测了34例深圳市某高校学生、18例结核病区医务人员、19例深圳市某IT公司职员、36例深圳市某生物技术公司职员、29例深圳市某公司后勤保安的结核菌抗原特异性IFN-γ反应水平。同时对各组人群还进行结核菌素皮试(PPD皮试)调查作为对照研究。结果各组人群中的Elispot检测阳性率分别是高校学生5.88%、结核病区医务人员55.6%、公司保安人员31.03%、IT公司职员31.57%、生物公司职员19.44%;PPD皮试阳性率为高校学生20.58%、结核病区医务人员88.9%、IT公司职员42.11%、生物公司职员41.67%、公司保安41.38%。结论Elispot检测诊断潜伏期结核分枝杆菌感染优于PPD皮试。

蓝舌病琼脂凝胶扩散可溶性抗原的制备及其特异性测试

动物蓝舌病的诊断方法很多,在特异性诊断方法中,琼脂凝胶扩散试验已被公认为一种准确、简便而快速的方法,广范应用于该病的定理试验。自Klontz等(1962)报告以蓝舌病病毒制备抗原,与特异性的沉淀抗体的沉淀作用以来,Jochim(1969)又报道了一种检测蓝舌病抗体的微量琼脂扩散试验。

血清特异性抗尘螨IgE、皮肤试验与小儿哮喘

应用酶联免疫吸附试验(简称ELISA)测定血清中特异性IgE,比放射性过敏原吸附试验更为简便,是体外测定的一种可靠而灵敏的方法,用以确诊外源性哮喘的有关过敏原,对选择有效的免疫疗法也有指导意义。

流行性出血热各种特异性抗原抗体及其他免疫因子的研究

本研究为1982年～1992年10年间采用免疫荧光法、阻断ELISA法,单克隆抗体ELISA法,双抗体夹心ELISA法,微量细胞病变中和试验和高密度颗粒凝集试验等方法,对流行性出血热(EHF)各种抗原、抗体系统及某些免疫因子的系统研究,其目的是建立特异性早期诊断方法,探讨发病机理。

肺炎克雷伯氏菌特异性抗原的筛选与鉴定

目的寻找肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)血清学检测用特异性抗原。方法双向电泳分离K.pneumoniae总蛋白,通过免疫印迹(Western blotting)与常见病原菌的多抗反应筛选特异性抗原蛋白,原核表达该蛋白并用ELISA法验证。结果获得K.pneumoniae的双向电泳图谱。寻找Western blotting中与K.pneumoniae自身多抗反应而不与与其它病原菌多抗反应的蛋白,质谱鉴定为酸性磷酸酶(Acid phosphatase,GI:238894261)。经表达纯化并以酶联免疫吸附试验(ELISA)验证,证明该蛋白作为包被抗原的灵敏度高,特异性强。结论 K.pneumoniae酸性磷酸酶是适用于该菌感染检测特异性抗原蛋白。

脐血红细胞A、B抗原特异性分析

目的 分析脐血A、B抗原与相应抗体反应中的抗原特异性。方法 通过成人血和脐血在不同孵育时间内吸收血清后将上清液中相应抗体效价变化会制成曲线 ,比较曲线下降的速率 ,分析成人血和脐血亲和力的不同 ;利用反应达到平衡后的吸收细胞进行放散试验 ,比较放散液中相应的抗体效价差异性。结果 在曲线比较中 ,成人血效价下降的速率明显高于脐血。在放散液抗体的效价上脐血组明显高于成人组 (P <0 0 1 )。结论 成人血与脐血不仅在抗原位点数上有差别 。

化学发光法在输血前梅毒特异性抗体逆向筛查中的应用价值研究

目的:探究化学发光法(CLIA)在输血前梅毒特异性抗体逆向筛查中的应用价值。方法:对实验室进行输血前梅毒筛查的9012份血清样本数据进行回顾性分析,运用CLIA对梅毒螺旋体特异性抗体进行逆向筛查,初筛结果中呈阳性的标本再分别进行非梅毒螺旋体抗原血清甲苯胺红不加热试验(TRUST)和梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)复测,对于TRUST复测后呈阳性的标本行滴度测试,对各检测结果进行分析。结果:9012份样本经CLIA检测发现有129份(1.43%)呈阳性,对129份初筛呈阳性的样本行TRUST、TPPA复测,结果发现:129份样本中有43份(33.33%)经TRUST、TPPA复测后均呈阳性;有1份(0.78%)为TRUST检测呈阳性而TPPA检测呈阴性。在129份初筛呈阳性的样本中,TRUST、TPPA复测呈阳性的概率分别为34.11%(44/129)、93.80%(121/129),两种检测方法的阳性率经统计学分析发现差异有统计学意义(P<0.05)。对129例经CLIA初筛后呈阳性的患者进行跟踪随访,发现其中有23例为一期梅毒患者,13例为二期梅毒患者,4例为三期梅毒患者,24例为隐性梅毒患者,57例为治疗后梅毒患者,8例为非梅毒患者。对经TRUST复测呈阳性的43份样本进行滴度检测,发现滴度值为1:1~1:64,统计发现其中一期梅毒、三期梅毒、隐性梅毒、治疗后梅毒的TRUST滴度均≤1:8,滴度偏低;二期梅毒的TRUST滴度最高为1:64,滴度偏高。结论:采用CLIA进行梅毒特异性抗体逆向筛查,再对初筛呈阳性的样本进行TRUST、TPPA和滴度测试,可以提高检测结果的准确性,减少假阴性结果的出现。逆向梅毒筛查流程更适合样本量大的梅毒筛查工作,不仅能够提高筛查的准确性、敏感性和特异度,还可降低假阴性的发生率。