基于酵母β-葡聚糖载体的口服OVA疫苗(WGP-OVA疫苗)诱导体液免疫及抗原特异性T细胞免疫反应

目的:探讨口服WGP-OVA疫苗对C57BL/6小鼠体液免疫及抗原特异性T细胞免疫的诱导作用。方法:分别连续给予C57BL/6小鼠口服PBS、WGP及WGP-OVA 17 d后,使用LEGENDplexTM多因子流式检测试剂盒检测给药后小鼠血清中IgG1、IgG2a、IgG3及IgM的含量;HE染色比较各组小鼠脾脏淋巴小结的大小。取小鼠腹股沟淋巴结(ILNs)制备单细胞悬液,流式细胞仪(FACS)检测淋巴结内F4/80+巨噬细胞及F4/80+SIINFEKL+巨噬细胞比例,分析WGP-OVA对巨噬细胞在ILNs内的浸润及抗原提呈情况;同时通过MHC Tetramer染色检测抗原特异性CD8+T细胞比例,明确WGP-OVA疫苗对T细胞免疫的诱导作用。结果:与PBS组相比,WGP-OVA能显著诱导IgG1、IgG2a、IgG3及IgM的分泌,增大脾脏内淋巴小结。此外,口服WGPOVA疫苗能促进F4/80+巨噬细胞向淋巴结浸润,诱导巨噬细胞对OVA的抗原提呈,同时增加淋巴结内OVA特异性CD8+CTLs的数量。结论:口服WGP-OVA疫苗能诱导C57BL/6小鼠体液免疫及抗原特异性T细胞免疫反应。

基于HBV核心抗原CTL表位的治疗性多肽在体诱导抗原特异性细胞免疫应答的研究

目的 探讨基于表位的治疗性多肽抗原组分、结构与诱导免疫应答之间的关系。方法 用分子设计的理论和方法 ,设计基于HBV抗原免疫优势性CTL、Th及B细胞表位的 3种治疗性多肽候选疫苗分子 ,经Merrifield固相多肽合成技术合成 ,并经HPLC纯化、鉴定。以BALB c(H 2 d)纯系小鼠为实验对象 ,进行体内免疫学功能研究。结果 所设计治疗性多肽分子可在体诱导较强的抗原特异性CTL应答和适度的抗体反应。Th、B细胞表位的引入可增强CTL表位肽的效应。结论 提示在治疗性表位多肽疫苗的分子设计中 ,引入B -、Th表位可显著提高CTL表位肽的免疫原性。

两种白血病细胞抗原负载DC的体外诱导特异性CTL应答的比较

目的: 比较树突状细胞(DC)与白血病细胞融合及白血病细胞冻融抗原负载DC两种白血病DC疫苗诱导抗原特异性CTL应答的能力.方法: 采用羟乙基淀粉-Ficoll两步法分离外周血单个核细胞(PBMC), 通过贴壁2 h获得黏附的单核细胞, 用GM-CSF加IL- 4诱导培养5 d收获细胞.将细胞分为4组: A组将K562细胞或原代慢性粒细胞白血病(CML)细胞在500 g/L PEG-100 mL/L DMSO诱导下与DC融合; B组加入相应细胞数量的白血病细胞冻融抗原; C组将K562细胞或CML细胞与DC共培养; D组: 单独DC培养组.融合前以红色荧光染料PKH26标记K562细胞, 采用流式细胞仪(FCM)检测PKH26/FITC-抗HLA-ABC抗体双标细胞并评估融合率.培养的第6天, 加入TNF-α诱导DC成熟, 然后分别与自体T细胞共培养, 用MTT比色法检测各组CTL对靶细胞的杀伤活性.结果: GM-CSF加IL- 4和TNF-α依次诱导成熟的DC具有经典的DC的形态和表型特征, 在PEG-DMSO的介导下, DC与白血病细胞的融合率为(17.33～29.94)%.两种抗原负载方案激活的CTL均对表达K562抗原的细胞具有特异性的细胞毒作用.在效靶比相同时, 融合组诱导CTL的杀伤活性强于冻融抗原致敏DC组.结论: 与冻融抗原致敏的DC相比, DC与白血病细胞融合细胞递呈抗原的效率更高, 体外诱导的CTL特异性杀伤靶细胞的作用更强, 有可能用于白血病的免疫治疗.

鼻咽癌病人和正常人群中EB病毒特异性T细胞对靶抗原的识别和应答

为探讨痘苗病毒表达的Epslein Barr病毒 (EBV)核抗原 1、4(EBNA1、4)和潜伏膜蛋白 1、2 (LMP1、2 ) ,在不同人群的特异性T细胞引起的特异性T细胞杀伤 (CTL)中的作用 ,采集EBV阴性正常人、未经治疗的鼻咽癌 (NPC)病人和EBV IgA/VCA阳性者各 10人的周围血淋巴单核细胞 (PBMC) ,用EBV转化B淋巴细胞 ,建立类淋巴母细胞 (LCL)。用LCL刺激自体的T淋巴细胞作为效应细胞 ,以LCL感染重组痘苗病毒表达的EBNA1、4和LMP1、2为靶细胞 ,以51Cr释放法检测EBV特异性CTL所识别的靶抗原。结果表明 ,EBV LMP1、2可能既是EBV特异性T细胞的刺激抗原 ,又是其识别的靶抗原。将采集的 30例试验者的各 5株单克隆T细胞株分别检测HLA Ⅰ型(A、B、C) ,按照不同型别寻找相对应的EBNA1、4和LMP1、2的不同合成肽 ,应用酶免疫吸附斑点法 (Elispot)检测EBV特异性CD8+ 的CTL应答。结果显示 :10例正常人中 9人有特异的LMP2应答 ,4人有特异的EBNA4应答 ;10例未治疗的NPC病人中 3人有特异的LMP2 ,2人有特异的EBNA1,3人有特异的EBNA4应答 ;在 10例EBV-IgA/VCA阳性中 ,6人有特异的LMP2 ,5人有特异的EBNA4应答。

结核杆菌抗原特异性激发人γδT细胞活化信号涉及Ras/Erk途径

目的 :探讨Ras Erk通路是否参与结核杆菌低分子多肽抗原 (Mtb Ag)启动的γδT细胞活化信号转导途径。方法 :分离获取PBMC ,用佛波醇酯 (PMA)和离子霉素 (IM) ,CD3mAb或Mtb Ag刺激不同时间 ,或PBMC先经PD980 5 9处理后再刺激培养 ;用荧光单抗染色后在流式细胞仪测定细胞CD6 9分子的表达 ;计数培养扩增 10天的细胞数量。结果 :PBMC用PMA +IM刺激 6小时 ,总T细胞和γδT细胞中的CD6 9表达均达高峰 (均 >99% ) ,用CD3mAb刺激 2 4小时 ,均达高峰 (均在 5 5 %左右 ) ,用Mtb Ag刺激 2 4小时 ,亦均达高峰 ,但总T细胞和γδT细胞中CD6 9分别为 16 .0 %和 75 2 % ;用PD980 5 9预处理PBMC ,可明显抑制Mtb Ag激活的γδT细胞CD6 9表达和γδT细胞的增殖。结论 :Mtb Ag可特异性激活γδT细胞 ,其活化信号转导需通过Ras Erk通路。

抗原特异性滤泡辅助性T细胞的活化与诱导在流感减毒活疫苗所诱导的人黏膜免疫抗体应答中发挥关键作用

当前,抗呼吸道感染的鼻内疫苗开发项目正日益吸引着越来越多的关注。对疫苗所诱导的保护力而言,抗体应答是决定性的,而人们普遍认为滤泡辅助T细胞(TFH)对于介导抗体应答非常重要。绝大多数支持TFH在免疫应答中作用的数据均来自于动物研究,而除血液中存在TFH样细胞外,来自人体的直接证据则十分有限。研究者考察了在人类鼻咽相关淋巴组织(NALT)中TFH细胞的活化与诱导,及其在流感减毒活疫苗(LAIV)所诱导的抗体应答中的作用。腺扁桃体组织的TFH细胞活化情况使用流式细胞仪分析,同时在LAIV刺激扁桃体单核细胞(MNC)后检测抗流感血凝素(anti-HA)抗体。通过使用流式细胞仪对被诱导的TFH细胞和CD154表达进行分析,研究者对由LAIV诱导的抗原特异性TFH细胞活化情况展开研究。LAIV诱导了与抗HA抗体产生有关的TFH细胞增殖,同时研究显示TFH细胞对于抗体应答至关重要。表达BCL6和CD21新诱导的TFH细胞以及随后抗HA抗体的测定表明,初始T细胞被LAIV诱导成为TFH细胞。

青藤碱对环瓜氨酸肽抗原特异性T细胞体外增殖的影响

目的青藤碱(Sinomenine,SN)在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)治疗中有较好的临床疗效,对SN相关免疫机制的研究也越来越受到关注。但关于SN在抗原特异性T细胞(antigen special T cell,AST)机制的研究少见报道。文中观察了SN对RA患者环瓜氨酸肽(cyclic citrullinated peptide,CCP)AST体外增殖的影响,探讨SN治疗RA的相关免疫机制。方法体外分离、培养RA患者外周血淋巴细胞,分别设对照组:不加任何干预药物;CCP组:仅加CCP干预,终浓度为20μg/ml;甲氨喋呤(Methotrexate,MTX)组:同时加CCP与MTX干预,终浓度均为20μg/ml;SN低剂量组:同时加CCP与SN干预,SN终浓度为10μg/ml,CCP终浓度为20μg/ml;SN高剂量组:同时加CCP与SN干预,终浓度均为20μg/ml;体外培养72 h后,采用CCK-8法检测细胞增殖吸光度(A)值水平。结果 CCP可体外诱导RA患者外周血淋巴细胞增殖(P<0.01),在此基础上加入不同浓度的SN后,CCP诱导的淋巴细胞增殖被显著抑制(P<0.01),SN高剂量组较之SN低剂量组的抑制程度更为明显(P<0.01)。结论 SN可抑制RA患者CCP-AST的体外活化、增殖,这可能是SN临床治疗RA的免疫机制之一。

慢性乙型肝炎及HBV相关肝硬化和肝细胞癌患者间HBV特异性CD8^(+) T细胞反应活性的比较分析

目的 比较分析慢性乙型肝炎及HBV相关肝硬化和肝细胞癌患者间的HBV特异性CD8^(+)T细胞反应活性。方法 选取124例慢乙肝、36例HBV相关肝硬化和114例HBV相关肝细胞癌患者,采用独创的ELISPOT系统定量检测患者外周血中具有反应活性的HBV特异性CD8^(+)T细胞数量;另对19例慢乙肝患者和20例肝细胞癌患者进行纵向追踪(每3~5月检测1次)。结果 慢乙肝组的HBV特异性CD8^(+)T细反应活性与肝硬化组无统计学差异,但明显低于肝细胞癌组,尤其是HBsAg、HBpol和HBe/cAg抗原特异性T细胞。慢乙肝组中,ALT和AST水平正常组、低病毒载量组比ALT和AST水平异常组、高病毒载量组都呈现更高的HBV特异性CD8^(+)T细胞反应活性。NUCs治疗的时间长短对慢乙肝患者HBV特异性T细胞的功能恢复有一定影响,但在相同时长内药物种类对其影响较弱。肝硬化组中,HBeAg阳性组的HBV特异性CD8^(+)T细胞反应活性明显高于HBeAg阴性组(P=0.03)。肝细胞癌组中,AFP正常和DCP正常组的HBV特异性CD8^(+)T细胞反应活性明显高于AFP和DCP异常组。纵向研究结果显示,慢乙肝患者使用NUCs治疗期间,HBV特异性CD8^(+)T细胞反应活性呈逐渐上升趋势;而肝细胞癌患者在靶向药物联合免疫治疗期间,HBV特异性CD8^(+)T细胞反应活性呈现明显上升。结论 HBV特异性CD8^(+)T细胞反应活性在慢乙肝、肝硬化和肝细胞癌的进程中存在差异,且受到病毒学指标、肿瘤标志物以及药物治疗的影响,因此在临床治疗中应密切关注HBV特异性CD8^(+)T细胞反应活性的变化。

肝癌细胞抗原致敏树突状细胞体外诱导特异性细胞毒T淋巴细胞

目的:探讨原发性肝癌患者外周血树突状细胞(DC)体外经自体肝癌细胞抗原致敏后,对特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL) 的诱导作用. 方法:肝癌患者外周血经梯度密度离心法分离,获得DC前体细胞,用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM- CSF)和重组人白介素-4(rhIL-4)联合培养,诱导扩增DC. 制备自体肝癌细胞抗原,体外脉冲DC,检测DC诱导自体T细胞增生能力及特异性CTL在体外对自体肝癌细胞的杀伤活性. 结果:经自体肝癌细胞抗原致敏的DC能诱导较强的自体T 细胞增生,且能诱导特异性CTL,该CTL,对自体肝癌细胞具有很强的杀伤活性,杀伤率明显高于DC、未经肝癌细胞抗原致敏的DC激活的CTL及T淋巴细胞的杀伤率,而对CT26细胞、BEL-7402细胞无明显的杀伤作用. 结论:肝癌患者外周血DC体外能诱导高效而特异的抗肝癌免疫,提示DC可能在肿瘤治疗及预防其复发与转移中发挥重要作用.

调节性T细胞在过敏性鼻炎及抗原特异性免疫治疗中的作用

免疫系统是一个高速运转的复杂网络系统,当机体遇到环境中的抗原、细菌、病毒等异物侵袭,它会及时做出相应的免疫反应。过敏性疾病的发生是一个复杂的免疫过程,目前对其机制的研究还处于探索之中,近些年,随着Treg细胞的出现及对其认识的不断加深,人们渐渐意识到"免疫耐受"的形成对维持机体的免疫环境的稳定发挥着重要作用。而Treg细胞在诱导和维持免疫耐受中的核心作用已得到肯定,本文将会对Treg细胞在过敏性鼻炎及抗原特异性免疫治疗中的作用加以阐述。

四聚体技术检测原发性胆汁性肝硬化患者血循环中抗原特异性T细胞

目的：定量检测原发性胆汁性肝硬化（PBC）患者体内抗原特异性T淋巴细胞含量，探讨其在PBC发病机制中的作用。方法：采用四聚体技术检测15例HLA-A＊0201阳性（A2^＋）PBC患者外周血单个核细胞（PBMC）经抗原肽诱导生长的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）中PDC-E2 159～167aa与PDC—E2 165～174aa特异性CD8^＋T细胞频率，以A＊0201阴性（A2^-）PBC患者与A2^＋的其他慢性肝病和健康自愿者为对照组：结果：在A2^＋PBC患者PDC-E2 159～167aa与PDC-E2165～174aa诱导的CTL中可检测到其相应的四聚体／CD8^＋细胞，平均频率分别为0．42%±0．24％（0．17％～1．08％）、0．27%±0．17%（0．05％～0．56％），各对照组的四聚体阳性细胞频率均低于0．1％，差异非常显著（P〈0．001）；A2^＋PBC组中PDC-E2 159～167aa特异性的CTL频率与PDC—E2 165～174aa特异性的CTL无显著性差异（P〉0．05）：处于临床Ⅰ、Ⅱ期的A2^＋PBC患者中CD8^＋特异性CTL频率均较Ⅲ期的要高（P〈0．05）：PDC—E2159～167aa特异性CTL与PDC—E2165～174aa特异性CTL频率在抗．PDC阳性PBC组和抗．PDC阴性组之间均无显著性差异（P〉0．05）：结论：HLA—A＊0201限制性的PDC-E2159～167aa和PDC-E2165～174aa特异性CD8^＋CTL在PBC疾病进展中起重要作用，抗线粒体抗体阴性或抗-PDC阴性PBC患者与阳性患者可能有着相似的T细胞介导的免疫发病机制。

VIR576通过与TCR跨膜区结合抑制抗原特异性T细胞活化

目的探讨抗HIV多肽VIR576抑制抗原特异性T细胞活化的作用机制。方法OVA体外刺激分离的DO11.10小鼠抗原特异性T细胞,CCK-8法检测VIR576对其活化的影响。采用溶血试验、溶血抑制实验、荧光结合法等方法检测VIR576与TCR跨膜区序列(TCR-TMD)之间的相互作用。结果体外实验显示,VIR576能逆转HIVgp41融合多肽(FP)介导的抗原特异性T细胞活化,并且其自身也能抑制抗原特异性的T细胞活化(P<0.05)。溶血试验、溶血抑制实验、荧光结合法等方法证实,VIR576能与TCR-TMD特异性结合。结论VIR576对T细胞活化的作用是TCR依赖性的,通过与TCR-TMD结合抑制抗原特异性T细胞活化。VIR576兼具抑制HIV进入和抗原特异性T细胞活化的特性,可望作为预防HIV性传播的杀微生物剂进行研究。

荧光素标记检测乙型肝炎病毒表面抗原特异性杀伤性T淋巴细胞方法的探讨

用绿色荧光前体化合物CalceinAM标记靶细胞,经过与杀伤性T淋巴细胞(CTL)效应细胞数小时的孵育,通过分析培养上清中的荧光强度检测CTL效应。通过对一系列标记条件的研究:不同浓度CalceinAM标记靶细胞、不同洗涤缓冲液、不同标记细胞浓度、不同洗涤次数、不同裂解液配方,确定CalceinAM荧光素标记法的最佳条件。用该方法检测乙型肝炎病毒表面抗原的DNA疫苗免疫Balb/c小鼠对P815S细胞的CTL效应,E/T比为10时,杀伤效率接近饱和,达到65%。通过荧光显微镜直接观察杀伤后的P815S细胞,细胞破裂程度与计算出的杀伤效率有一定相关性。

结核感染T细胞斑点试验中结核特异性抗原/植物血凝素比值对肺外结核的诊断价值

目的探讨结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)中结核特异性抗原(TBAg)/植物血凝素(PHA)比值在肺外结核(EPTB)诊断中的应用价值。方法选择2018年1月至2020年1月新乡医学院第一附属医院收治的522例疑诊的EPTB患者为研究对象,根据最终是否诊断为EPTB,将患者分为EPTB组(n=209)和非EPTB组(n=313)。2组患者均行T-SPOT.TB检测,比较2组患者T-SPOT.TB检测结果阳性率、PHA斑点形成细胞(sfc)数、早期分泌靶向抗原6(ESAT-6)sfc数、培养滤液蛋白10(CFP-10)sfc数及TBAg/PHA比值。比较ESAT-6 sfc数、CFP-10 sfc数及TBAg/PHA比值对EPTB的诊断价值。结果EPTB组和非EPTB组患者T-SPOT.TB检测结果阳性率分别为88.5%(185/209)和24.3%(76/313);EPTB组患者T-SPOT.TB检测结果阳性率显著高于非EPTB组(χ^(2)=206.840,P<0.05)。EPTB组患者T-SPOT.TB检测结果中ESAT-6 sfc数、CFP-10 sfc数、TBAg/PHA比值均显著高于非EPTB组,PHA sfc数显著低于非EPTB组(P<0.05)。根据受试者工作特征(ROC)曲线,TBAg/PHA比值诊断EPTB的特异度显著高于ESAT-6 sfc数和CFP-10 sfc数(P<0.05);ESAT-6 sfc数、CFP-10 sfc数、TBAg/PHA比值诊断EPTB的ROC曲线下面积和灵敏度比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论TBAg/PHA比值可显著提高T-SPOT.TB诊断EPTB的特异度,在EPTB诊断中具有较好的应用前景。

负载乳腺癌细胞冻融抗原的DC对CTL体外特异性杀伤活性的影响

目的:研究乳腺癌患者腋下淋巴结单个核细胞来源的DC,经自体肿瘤细胞冻融抗原刺激后,对CTL体外特异性杀伤活性的影响。方法:以细胞因子分别诱导、培养乳腺癌腋下淋巴结单个核细胞中的DC及TDLNC,用自体癌细胞冻融抗原刺激DC,并和TDLNC共培养,诱导成为肿瘤抗原特异性CTL;检测特异性CTL对自体乳腺癌细胞及MCF-7细胞的体外杀伤活性。结果:DC-Ag-TDLNC、DC-TDLNC和TDLNC对自体乳腺癌细胞的杀伤率分别为67.64%、31.25%和26.36%,P<0.001;三种TDLNC细胞对MCF-7细胞的杀伤率无明显差异(P>0.05)。结论:乳腺癌患者腋下引流淋巴结中的单个核细胞在细胞因子的诱导、活化及自体肿瘤抗原刺激下,可分化为成熟DC,DC可促进TDLNC增殖、分化为特异性CTL,后者对自体肿瘤细胞有较高的杀伤活性。

白癜风患者外周血黑素细胞抗原特异性T细胞、调节性T细胞及自然杀伤T细胞水平及意义

目的探讨白癜风患者外周血黑素抗原特异性CD8^+T细胞、调节性T细胞及自然杀伤T细胞的变化及意义。方法采用流式细胞术对初诊123例白癜风患者(观察组)和30例正常人(对照组)外周血中黑素细胞抗原特异性T细胞(CD8^+Melan-A^+/Tyrosinase^+CTL)、调节性T细胞(CD4^+CD125^+CD127^-Tregs)及自然杀伤T细胞(CD3^+TCRα24^+β11^+NKT)进行定量分析并进行比较。结果观察组CD8^+Melan-A^+/Tyrosinase^+CTL水平显著高于对照组(P<0.05);CD4^+CD125^+CD127-Tregs、CD3^+TCRα24^+β11^+NKT水平均低于对照组(均P<0.05。不同分期白癜风患者外周血各种T细胞表达水平比较中,CD8^+Melan-A^+/Tyrosinase^+CTL在各期中均高于对照组(均P<0.05);CD4^+CD125^+CD127^-Tregs、CD3^+TCRα24^+311^+NKT水平仅在进展期中均低于对照组(均P<0.05),稳定期则无统计学差异。3种细胞水平与患者的白斑面积明显相关(r=0.929、-0.982、-0.957,均P<0.01。结论 CD8^+Melan-A^+/Tyrosinase^+CTL、CD4^+CD125^+CD127^-Tregs、CD3^+TCRα24^+β11^+NKT水平的异常导致白癜风患者体内免疫调节功能失衡,与白癜风的发生、发展有密切关系。

卵巢癌细胞系SKOV3冻融抗原诱导CTL特异性杀瘤效应的研究

目的探讨卵巢癌冻融抗原对T淋巴细胞的增殖作用及其诱导的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)在体外杀伤卵巢癌细胞的抗原特异性细胞毒性效应。方法采用免疫磁珠分离法(magneticactivatedcellsorting,MACS)分离纯化正常人外周血CD+3T细胞,体外以SKOV3卵巢癌细胞中提取的可溶性肿瘤抗原加以刺激。溴标法检测肿瘤抗原对T细胞增殖的影响;MTT法测定肿瘤抗原诱导的CTL体外杀伤卵巢癌细胞的能力;利用绒毛膜癌细胞抗原对比观察肿瘤抗原诱导CTL杀伤肿瘤细胞的抗原特异性。结果卵巢癌细胞抗原有很强的促进T淋巴细胞增殖的作用,且存在时间依赖性,在24h时促进作用最强。SKOV3抗原诱导的CTL在体外对SKOV3细胞的杀伤率为68.38%,显著高于它对JAR绒毛膜癌细胞的杀伤率(18.31%);而JAR细胞抗原诱导的CTL对JAR和SKOV3细胞的杀伤率分别为61.02%和14.79%,有显著的抗原特异性(P=0.0001)。结论卵巢癌细胞冻融抗原诱导的CTL在体外具有很强的增殖能力和抗原特异性杀伤卵巢癌细胞的作用。

主要组织相容性复合体-肽四聚体技术及其在定量检测抗原特异性T细胞中的应用

四聚体(tetramer)技术是近来发展的一种可直接检测抗原特异性T细胞(antigen specific Tcells,AST)的新方法,在病毒感染、肿瘤、自身免疫病研究及抗原肽免疫优势表位筛选中有着广阔的应用前景。文章简要介绍主要组织相容性复合体(MHC)-抗原肽与T细胞表面受体作用的分子基础、四聚体分子构建及由此衍生的四聚体方法技术类型,并就该技术应用于临床疾病的AST研究现状进行综述。

TH1/TH2对HBV特异性抗原HBcAg和HBeAg应答的研究

为研究HBcAg和HBeAg对慢性乙型肝炎病毒感染者外周血单个核细胞 (PBMC)中TH1/TH2类细胞分化的影响。将 6 4例慢性HBV感染者根据免疫状态不同分为ATL正常组 (ATL <40u/L)和ATL异常组 (ATL>6 0u/L) ;HBeAg阳性组和抗 -HBe阳性组。分别用重组HBcAg和HBeAg诱导感染者PBMC体外增殖。并设 2 0例健康人群做正常对照组 ,用双抗体夹心ELISA法检测培养上清液中TH1类细胞因子 (IL - 2、IFN -γ)和TH2类细胞因子 (IL - 4、IL - 10 )发现无论何组 ,在HBcAg诱导下产生TH1类细胞因子量明显高于HBeAg诱导下产生的量 ,TH2类细胞因子量低于HBeAg诱导下产生的量 ,正常对照组也得出类似的结果。提示 :对于慢性HBV感染者在不同的免疫状态下 ,均表现为HBcAg倾向诱导TH1类细胞分化 ,而HBeAg倾向诱导TH2类细胞分化。

甲氨蝶呤对类风湿关节炎环瓜氨酸肽抗原特异性T细胞体外增殖的影响

目的观察甲氨蝶呤(MTX)对类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)患者环瓜氨酸肽抗原特异性T细胞(Circum-citrul-linated peptide antigen special Tcell,CCP/AST)体外增殖水平的影响。方法体外分离、培养RA患者外周血淋巴细胞,分别设:空白组:不加任何干预药物;CCP组:仅加CCP干预(CCP终浓度为20 mg.L-1);甲氨喋呤(MTX)组:同时加CCP与MTX干预(CCP与MTX终浓度均为20 mg.L-1);体外培养72 h后,采用CCK-8法检测细胞增殖(OD)水平。结果CCP可以显著诱导RA患者环瓜氨酸肽抗原特异性T细胞(CCP/AST)体外增殖(P<0.01),在此基础上加入MTX后,CCP/AST增殖状态被显著抑制(P<0.01)。结论MTX对RA患者CCP/AST的增殖水平有显著的抑制作用,推断MTX做为RA临床治疗的经典用药,抑制RA患者CCP/AST的活化、增殖,可能是其治疗RA的有效途径之一。